论文摘要
目的:卵泡作为雌性哺乳动物的生殖细胞,其发育过程与雄性生殖细胞相比具有特殊性,卵巢内不含生殖干细胞,卵泡的数量随着卵泡周期性募集不断减少。原始卵泡形成后聚集在卵巢皮质区形成原始卵泡池,卵泡池中的卵泡一部分由静息状态活化发育为成熟卵泡,另一部分卵泡在发育中途闭锁。成熟卵泡全部来源于活化后的原始卵泡,卵泡过早消耗殆尽,将极大地影响卵巢的生殖年限,原始卵泡最初形成的数量和原始卵泡活化的比率是影响雌性生殖年限最关键的两个因素,原始卵泡形成到原始卵泡活化阶段卵泡发育不依赖促性腺激素,而依赖于卵母细胞和颗粒细胞之间的信息传递,很多转录因子和旁分泌因子在这一阶段发挥重要作用。本课题组前期发现转录因子SOHLH1可以通过上调c-Kit基因启动子活性,影响颗粒细胞分泌的KITL与卵母细胞表面KIT结合,参与调控卵泡发育。卵泡中除KIT、KITL外,BMP15、GDF9也是卵母细胞与颗粒细胞间重要的信号因子,但BMP15、GDF9调控机制目前还不清楚。本研究意在探索FOXO3和转录因子SOHLH1是否通过调控旁分泌因子BMP15、GDF9,影响卵母细胞与颗粒细胞交流,并探讨在原始卵泡阶段BMP15和GDF9蛋白不能表达的原因,完善转录因子SOHLH1影响卵母细胞与颗粒细胞间信号交流的分子机制。研究方法:本研究以6-8w C57BL/6J小鼠卵巢为研究对象,利用ChIP实验寻找SOHLH1和FOXO3在Bmp15、Gdf9基因启动子序列上的结合位点;通过构建pGL3.0-Bmp15、pGL3.0-Gdf9启动子表达质粒、pcDNA3.0-FOXO3真核表达质粒,利用双荧光素酶报告基因研究FOXO3和SOHLH1蛋白对Bmp15、Gdf9基因启动子序列的转录调控活性。结果:1.pcDNA3.0-FOXO3表达质粒、pGL3.0-Bmp15萤光质粒、pGL3.0-Gdf9萤光质粒构建成功。2.FOXO3过表达质粒转染入HEK293T细胞中24h、48h后FOXO3蛋白在HEK293T细胞核、质中均有表达。3.SOHLH1过表达质粒转染入HEK293T细胞中24h、48h后SOHLH1蛋白在HEK293T细胞核、质中均有表达。4.SOHLH1对Bmp15、Gdf9启动子全长区域有正调控作用。5.FOXO3抑制了SOHLH1对Bmp15、Gdf9启动子全长区域的正调控作用,并且随着FOXO3含量增加,抑制作用越强。6.SOHLH1蛋白能与Bmp15启动子（-170bp,80bp）、（-450bp,-220bp）、（-745bp,-560bp）及（-1410bp,-1200bp）区间的E-box位点结合;7.SOHLH1能与Gdf9启动子（-525bp,-340bp）、（-960bp,-755bp）及（-1080bp,-790bp）区间的E-box位点结合,SOHLH1不能与Gdf9启动子（-200bp,0bp）区间结合;8.FOXO3能与Bmp15启动子（120bp、183bp）、（-84bp,-75bp）、（-442bp、-395bp）、（-546bp、-470bp）及（-674bp,-665bp）区间结合;9.FOXO3能与Gdf9启动子（-278bp,-271bp）、（-1004bp,-997bp）区间结合。结论:1、SOHLH1可以通过Bmp15、Gdf9启动子区E-BOX位点调控基因转录,进而影响卵泡发育。2、原始卵泡阶段FOXO3可以通过竞争性结合转录调控位点影响SOHLH1对Bmp15、Gdf9的转录激活作用。
论文目录
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 刘源
导师: 郑志红
关键词: 卵泡活化
来源: 中国医科大学
年度: 2019
分类: 基础科学
专业: 生物学,生物学
单位: 中国医科大学
基金: 辽宁省科技计划项目(2015408002)
分类号: Q78
DOI: 10.27652/d.cnki.gzyku.2019.001367
总页数: 67
文件大小: 3454K
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标签：卵泡活化论文;