产β-香树脂醇酿酒酵母细胞构建及高密度发酵

产β-香树脂醇酿酒酵母细胞构建及高密度发酵

论文摘要

该研究通过异源表达甘草来源β-香树脂醇合成酶(β-AS),成功在实验室前期保存的酿酒酵母底盘细胞中构β-香树脂醇的合成途径,实现了利用酿酒酵母生产β-香树脂醇,发酵质量浓度达5.97 mg·L-1。通过进一步过表达酵母MVA途径的甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶基因(ERG19),甲羟戊酸激酶基因(ERG12),3-羟基-3-甲基戊二酰-CoA合酶基因(ERG13),磷酸甲羟戊酸激酶基因(ERG8)和异戊烯二磷酸酯异构酶基因(IDI1),促进酵母代谢流走向β-香树脂醇合成方向,最终成功获得Y2-C2-4工程菌株,将β-香树脂醇浓度提高一倍,达到10.3 mg·L-1。通过高密度发酵策略,该菌株其β-香树脂醇的产量可达到157.4 mg·L-1,相对于原始菌株提高了26倍,为公开报道基因工程酵母合成β-香树脂醇的较高产量。该研究不仅为β-香树脂醇生物合成奠定了基础,也为后期研究细胞色素氧化酶及糖基转移酶的挖掘提供优势底盘菌株。

论文目录

  • 1 材料
  •   1.1 工具酶与试剂
  •   1.2 质粒、菌株与引物
  •   1.3 培养基
  • 2 方法
  •   2.1 产β-香树脂醇菌株的构建
  •     2.1.1 片段扩增
  •     2.1.2 酵母转化
  •   2.2 高产β-香树脂醇菌株Y2-C2-4的构建
  •   2.3 发酵及产物的提取
  •     2.3.1 种子液的制备
  •     2.3.2 摇瓶发酵
  •     2.3.3 高密度发酵
  •     2.3.4 产物提取
  •     2.3.5 鲨烯、麦角固醇、羊毛甾醇及β-香树脂醇检测分析
  • 3 结果与分析
  •   3.1 β-香树脂醇酿酒酵母细胞工厂创建及产物鉴定
  •   3.2 优化代谢流, 构建高产β-香树脂醇菌株Y2-C2-4
  •   3.3 高密度发酵Y2-C2-4产β-香树脂醇
  • 4 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 孙梦楚,晁二昆,苏新堯,朱敏,苏勇,钱广涛,陈士林,王彩霞,薛建平

    关键词: 齐墩果烷型三萜皂苷,香树脂醇,酿酒酵母

    来源: 中国中药杂志 2019年07期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,工程科技Ⅰ辑

    专业: 一般化学工业

    单位: 淮北师范大学生命科学学院,中国中医科学院中药研究所,广州中医药大学国际中医药转化医学研究所

    基金: 国家自然科学基金青年基金项目(81503196)

    分类号: TQ920.6

    DOI: 10.19540/j.cnki.cjcmm.20190129.011

    页码: 1341-1349

    总页数: 9

    文件大小: 373K

    下载量: 289

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