RNAi法分析香菇色氨酸合酶基因的功能

RNAi法分析香菇色氨酸合酶基因的功能

论文摘要

色氨酸合酶(tryptophan synthase,TrpB)是生物体内一种重要的功能蛋白,在生物抗逆应激反应过程中发挥着重要的调控作用。本研究以香菇(Lentinula edodes)耐热栽培菌株S606为实验材料,采用双向启动子(Leactin和Legpd)启动LetrpB蛋白β亚基功能结构域的反向互补片段(400 bp),构建了LetrpB基因的RNAi载体,利用农杆菌介导法将该载体转入香菇菌丝中,在潮霉素培养基上筛选转化子,再通过PCR检测片段是否插入,获得了稳定的阳性转化子。实时荧光定量PCR结果显示,与野生型菌株相比,转化子的LetrpB基因表达量显著下调,转化子LeALDH、LeamiE等基因的表达量也显著下调,而LeYuccA的表达量显著上调。40℃高温处理24 h后,野生型S606的菌丝体在25℃条件下可以恢复生长,而RNAi转化子的菌丝体则不能恢复生长。研究结果表明,香菇菌株S606的LetrpB基因参与了热胁迫应激反应。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 供试菌株
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 培养基配制
  •   1.4 LetrpB 基因的克隆和蛋白分析
  •   1.5 LetrpB基因RNAi载体的构建
  •   1.6 菌丝体的遗传转化及转化子筛选
  •   1.7 qRT-PCR 检测基因表达量
  •   1.8 菌丝生长速度测定
  •   1.9 转化子耐热能力检测
  • 2 结果与分析
  •   2.1 香菇S606菌株LetrpB的基因克隆和蛋白分析
  •   2.2 载体构建
  •   2.3 遗传转化和转化子的筛选
  •   2.4 LetrpB基因 qRT-PCR分析
  •   2.5 转化子菌丝生长速度分析
  •   2.6 转化子的耐热性检测
  •   2.7 色氨酸与 IAA 合成途径中其它酶基因的表达水平
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 王晨,罗义,王刚正,徐瑞平,周雁,龚钰华,边银丙

    关键词: 香菇,色氨酸合酶,耐热性

    来源: 食用菌学报 2019年04期

    年度: 2019

    分类: 农业科技

    专业: 园艺

    单位: 华中农业大学应用真菌研究所

    基金: 国家自然科学基金(34116162),湖北省技术创新专项重大项目(2016ABA100)

    分类号: S646.12

    DOI: 10.16488/j.cnki.1005-9873.2019.04.001

    页码: 1-8+161

    总页数: 9

    文件大小: 1430K

    下载量: 94

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