盐穗木正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌抑菌机理及安全性的研究

论文摘要

据研究报道,盐穗木正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌有抑菌活性,且抑菌效果较为显著,但其抑菌机理尚无定论。本实验通过研究盐穗木正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌细胞膜通透性、细胞壁完整性、菌体代谢活力等方面,系统的阐明盐穗木正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌的抑菌机理。并采用小鼠的体内安全试验检验盐穗木正丁醇萃取物的毒性大小,为盐穗木正丁醇萃取物的开发和应用提供基础理论依据。本研究主要内容和结果如下:采用琼脂二倍稀释法测定盐穗木正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度（MIC）为25mg/mL,最低杀菌浓度（MBC）为50mg/mL。通过电导率法、可见分光光度法及酶标仪检测法测定菌悬液中电导率、小分子物质（钾离子）及大分子物质（核酸）泄漏情况,反映盐穗木正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌细胞膜的作用机制。结果显示,当盐穗木正丁醇萃取物作用菌体后,使胞内小分子物质（钾离子）及大分子物质（核酸）泄漏至胞外,说明盐穗木正丁醇萃取物可改变金黄色葡萄球菌细胞膜的通透性。通过微量酶标法、酶联免疫分析、红外光谱检测法测定菌悬液中碱性磷酸酶含量、肽聚糖含量及细胞壁化学键变化情况,反映盐穗木正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌细胞壁的作用机制。结果显示,当盐穗木正丁醇萃取物作用菌体后,使菌体内碱性磷酸酶泄漏至胞外,同时对细胞壁化学键产生轻微影响,但对细胞壁肽聚糖含量无明显影响,说明盐穗木正丁醇萃取物可破坏金黄色葡萄球菌细胞壁的完整性。采用化学发光检测法及SDS-PAGE凝胶电泳检测金黄色葡萄球菌ATP释放含量及菌体蛋白合成表达情况,反映盐穗木正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌代谢活力的作用机制。结果显示,不同浓度盐穗木正丁醇萃取物处理金黄色葡萄球菌均使菌悬液中ATP含量下降;加入盐穗木正丁醇萃取物的菌体出现部分蛋白条带的缺失。说明盐穗木正丁醇萃取物可影响金黄色葡萄球菌的代谢活力。采用小鼠体内安全试验反映盐穗木正丁醇萃取物毒性大小。结果显示,当以一天内多次给药总剂量达60 g/（kg bw）的盐穗木正丁醇萃取物灌胃并未引起小鼠的死亡,说明盐穗木正丁醇萃取物毒性较小。

论文目录

摘要

abstract

第1章概述

1.1 中草药简介

1.1.1 中草药简介

1.1.2 中草药应用

1.1.3 中草药抑菌研究进展

1.1.4 中草药抑菌机理

1.2 盐穗木研究进展

1.2.1 盐穗木介绍

1.2.2 盐穗木形态学及生理学研究

1.2.3 盐穗木耐盐基因分子生物学研究

1.2.4 盐穗木营养成分研究

1.2.5 盐穗木抑菌效果研究

1.2.6 盐穗木抑菌成分分析

1.3 金黄色葡萄球菌研究进展

1.3.1 金黄色葡萄球菌简介

1.3.2 金黄色葡萄球菌耐药情况

1.3.3 细菌耐药机制

1.3.4 针对细菌耐药性采取的对策

1.4 研究目的及意义

1.5 研究内容

第2章盐穗木正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌细胞壁影响的研究

2.1 材料

2.1.1 提取物

2.1.2 菌种

2.1.3 主要试剂

2.1.4 主要仪器

2.2 方法

2.2.1 盐穗木正丁醇萃取物的提取

2.2.2 培养基及缓冲液的配制

2.2.3 供试菌的处理

2.2.4 样品前期处理

2.2.5 数据处理

2.2.6 盐穗木正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌最低抑菌浓度的测定

2.2.7 盐穗木正丁醇萃取物对菌悬液中碱性磷酸酶含量的测定

2.2.8 盐穗木正丁醇萃取物对菌悬液中肽聚糖含量的测定

2.2.9 盐穗木正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌细胞壁化学键的测定

2.3 结果与分析

2.3.1 盐穗木正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度的测定结果

2.3.2 盐穗木正丁醇萃取物对菌悬液中碱性磷酸酶的影响

2.3.3 盐穗木正丁醇萃取物对菌悬液中肽聚糖含量的影响

2.3.4 盐穗木正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌细胞壁化学键的影响

2.4 讨论

2.5 结论

第3章盐穗木正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌细胞膜影响的研究

3.1 材料

3.1.1 主要试剂

3.1.2 主要仪器

3.2 方法

3.2.1 盐穗木正丁醇萃取物对菌悬液中电导率的测定

3.2.2 盐穗木正丁醇萃取物对菌悬液中钾离子含量的测定

3.2.3 盐穗木正丁醇萃取物对菌悬液中核酸含量的测定

3.3 结果与分析

3.3.1 盐穗木正丁醇萃取物对菌悬液电导率的影响

3.3.2 盐穗木正丁醇萃取物对菌悬液中钾离子含量的影响

3.3.3 盐穗木正丁醇萃取物对菌悬液中核酸含量的影响

3.4 讨论

3.5 结论

第4章盐穗木正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌代谢活力影响的研究

4.1 材料

4.1.1 主要试剂

4.1.2 主要仪器

4.2 方法

4.2.1 盐穗木正丁醇萃取物对菌悬液中ATP含量的测定

4.2.2 盐穗木正丁醇萃取物对菌体蛋白合成的影响

4.3 结果与分析

4.3.1 盐穗木正丁醇萃取物对菌悬液ATP含量影响的检测结果

4.3.2 盐穗木正丁醇萃取物对菌体蛋白质合成影响的检测结果

4.4 讨论

4.5 结论

第5章盐穗木正丁醇萃取物体内安全试验的研究

5.1 材料

5.1.1 材料

5.1.2 试验动物

5.2 方法

5.2.1 急性毒性预试验

5.2.2 急性毒性正式试验

5.3 结果与分析

5.4 讨论

5.5 结论

第6章结论

参考文献

致谢

作者简介

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 蒋秀梅

导师: 陶大勇,刘全国

关键词: 盐穗木,正丁醇萃取物,金黄色葡萄球菌,细胞膜,细胞壁,代谢活力,毒性

来源: 塔里木大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 塔里木大学

基金: 国家自然科学基金项目“盐穗木正丁醇提取物及目标单体对st.aureus细胞壁作用机制研究”的部分研究成果(项目编号:31560711),课题主持：陶大勇教授(塔里木大学)

分类号: S852.61

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