蒜头果内生真菌发酵产神经酸油脂的研究

论文摘要

国家二级保护植物蒜头果是广西及云南特色林产资源,其蒜头果油中富含的神经酸为超长链单不饱和脂肪酸,具有多种生理药理活性,经济价值高,被广泛应用于食品、医药等领域。本文在建立5种混合脂肪酸的定性及定量分析基础之上,利用从蒜头果枝、叶及果实中分离的内生真菌对神经酸结晶母液进行了发酵产富含神经酸微生物油脂的研究。结果如下:1.神经酸结晶母液含有的脂肪酸主要有硬脂酸、油酸、花生酸、芥酸和神经酸。为了跟踪监测蒜头果内生真菌发酵神经酸结晶母液产微生物油脂中这5种脂肪酸的变化,建立了用气相色谱法同时定量测定这5种脂肪酸组分的分析方法。采用Rtx-Wax@柱（30 m×0.25 mm,0.25 μm）,升温程序为初始温度180℃,保留1 min,以5 ℃/min升至240℃,保留9 min。结果显示该法准确、可靠,可用于神经酸结晶母液发酵过程监控及后续工艺优化的测定。2.采用组织贴片和研磨涂布平板培养法对蒜头果健康的枝、叶、果肉、果壳及果仁内生真菌进行分离纯化。结果分离得到内生真菌58株。58株菌株的菌丝体经苏丹黑-B染色后镜检观察油脂粒着色情况初筛得到产油脂含量较高的菌株19株。初筛菌株经摇瓶液体培养,气相色谱定量分析微生物油脂中神经酸等脂肪酸的含量,复筛得到2株能发酵产富含神经酸油脂的目的菌株STGR-6和STGK-3。内生真菌STGR-6经鉴定为奥氏青霉菌（Penicillium olsonii）,STGK-3经鉴定为黄曲霉（Aspergillus flavus）。3.重点考察了奥氏青霉菌STGR-6发酵产富含神经酸微生物油脂的工艺条件,研究了培养基配方等对发酵的影响。研究结果表明,适宜的发酵条件为:培养基为改良马丁培养基,装液量为40mL/250mL三角瓶,加入神经酸结晶母液浓度为3.75 g/L,在pH为7.5,30℃摇床培养5 d,摇床转速为200 r/min。在该条件下,其菌体生物量达28.5 g/L,干菌体中神经酸含量55.29 mg/g。在枝叶培养基和果仁培养基添加油酸及芥酸的混合底物发酵培养时,有一定量的神经酸在菌体内形成。以单一脂肪酸油酸或芥酸为底物时,发酵后菌体内未检测到神经酸。以油酸、神经酸混合溶液为底物时,发酵后油脂中神经酸的量未增加。以芥酸、神经酸的乙醇溶液为底物时,底物芥酸含量大于50%菌体生长受到抑制,小于50%菌体生长良好但神经酸被作为营养物质被消耗。4.选择适宜的条件分别对内生真菌STGR-6、STGK-3进行扩大培养,采用索氏抽提法获得微生物油脂。发酵放大实验中,STGK-3生物量达8.31 g/L,油脂含量为44.85%,较初筛油脂含量提高23.43%,油脂中神经酸含量为20.34%,神经酸产率83.43%。奥氏青霉菌STGR-6生物量达13.69 g/L,油脂含量为23.97%,较初筛油脂含量提高6.72%,油脂中神经酸含量为26.67%,神经酸产率87.95%。分别对两种微生物油脂进行气-质分析,其油脂主要成分为油酸、芥酸及神经酸。

论文目录

摘要

ABSTRACT

符号说明

第一章绪论

1.1 蒜头果简介

1.2 神经酸

1.2.1 神经酸功能及应用

1.2.2 神经酸来源途径

1.3 植物内生菌研究进展

1.3.1 植物内生菌

1.3.2 植物内生菌在天然产物合成中的应用

1.3.3 蒜头果内生真菌研究进展

1.4 生物合成神经酸研究进展

1.5 微生物油脂研究进展

1.6 课题研究目的意义及主要内容

1.6.1 课题研究目的及意义

1.6.2 主要研究内容

第二章神经酸结晶母液发酵过程脂肪酸分析方法的建立

2.1 引言

2.2 材料与仪器

2.2.1 实验材料

2.2.2 实验试剂

2.2.3 仪器与设备

2.3 实验方法

2.3.1 色谱条件

2.3.2 标准溶液与样品制备

2.4 结果与分析

2.4.1 气相色谱升温程序的选择

2.4.2 气相色谱外标法测定

2.5 本章小结

第三章蒜头果内生真菌的分离及产油菌株的筛选、鉴定

3.1 引言

3.2 材料与仪器

3.2.1 实验材料

3.2.2 实验试剂

3.2.3 仪器与设备

3.3 实验方法

3.3.1 培养基

3.3.2 蒜头果内生真菌的分离

3.3.3 蒜头果内生真菌的纯化及保藏

3.3.4 蒜头果内生真菌产富含神经酸油脂菌株的筛选

3.3.5 数据处理

3.3.6 菌株分子生物学鉴定

3.4 结果与讨论

3.4.1 蒜头果内生真菌分离结果

3.4.2 蒜头果内生真菌产油菌株的初筛

3.4.3 蒜头果内生真菌复筛结果

3.4.4 蒜头果内生真菌STGR-6的鉴定结果

3.4.5 蒜头果内生真菌STGK-3的鉴定结果

3.5 本章小结

第四章蒜头果内生真菌发酵神经酸结晶母液的研究

4.1 引言

4.2 材料与仪器

4.2.1 实验材料

4.2.2 实验试剂

4.2.3 实验仪器与设备

4.3 实验方法

4.3.1 实验菌株

4.3.2 培养基及实验方案

4.3.3 分析方法

4.4 结果与讨论

4.4.1 发酵产物质谱结果分析

4.4.2 培养条件对发酵的影响

4.4.3 培养基添加物对发酵的影响

4.4.4 不同底物对菌STGR-6发酵的影响

4.5 本章小结

第五章蒜头果内生真菌发酵产微生物油脂的放大实验

5.1 引言

5.2 材料与仪器

5.2.1 实验试剂

5.2.2 实验仪器与设备

5.3 实验方法

5.3.1 培养基及菌株培养

5.3.2 菌体油脂提取

5.3.3 分析方法

5.4 结果与讨论

5.4.1 提取方法对油脂含量的影响

5.4.2 菌株STGR-6发酵产微生物油脂的放大实验

5.4.3 菌株STGK-3发酵产微生物油脂的放大实验

5.5 本章小结

第六章结论与展望

6.1 结论

6.2 创新点

6.3 存在问题与展望

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文目录

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 王一凡

导师: 李伟光

关键词: 神经酸,蒜头果内生真菌,神经酸结晶母液,微生物油脂,发酵工艺

来源: 广西大学

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 生物学,一般化学工业,一般化学工业

单位: 广西大学

分类号: TQ920.6;TQ645

总页数: 80

文件大小: 6340K

下载量: 156

蒜头果内生真菌发酵产神经酸油脂的研究

论文摘要

论文目录

文章来源

相关论文文献

猜你喜欢