优化Ⅰ型胶原蛋白的纯化工艺

优化Ⅰ型胶原蛋白的纯化工艺

论文摘要

使用0.5 mol/L乙酸和胃蛋白酶提取Ⅰ型胶原蛋白后,结合等电点沉淀法和超滤纯化技术对Ⅰ型胶原蛋白进行纯化。通过鞣酸沉淀法和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证实等电点沉淀可有效除去胃蛋白酶;经超滤纯化后的胶原蛋白紫外光谱检测在235nm处有最大吸收峰;在SDS-PAGE谱图上出现3条Ⅰ型胶原蛋白特征谱带;采用凯氏定氮法也证实其纯度符合YY/T1511—2017医药行业标准;通过傅里叶变换红外光谱、圆二色谱法(Circular Dichroism, CD)测定证实胶原蛋白三螺旋结构被完整保留下来。采用等电点沉淀法结合超滤纯化技术,可保证Ⅰ型胶原蛋白的高纯度及三螺旋结构的完整性。

论文目录

  • 1 实验部分
  •   1.1 材料与仪器
  •   1.2 胶原蛋白的提取与纯化方法
  •   1.3 纯化过程中胃蛋白酶残留量检测
  •     1.3.1 鞣酸沉淀法
  •     1.3.2 SDS-PAGE凝胶电泳法
  •   1.4 Ⅰ型胶原蛋白的纯度分析
  •     1.4.1 纯化与未纯化胶原蛋白的SDS-PAGE电泳实验
  •     1.4.2 紫外光谱测定
  •     1.4.3 蛋白含量测定
  •   1.5 Ⅰ型胶原蛋白的结构表征
  •     1.5.1 SDS-PAGE实验
  •     1.5.2 傅里叶变换红外光谱
  •     1.5.3 圆二色谱法 (Circular Dichroism, CD)
  • 2 结果与讨论
  •   2.1 纯化过程中胃蛋白酶的残留量检测
  •     2.1.1 沉淀法
  •     2.1.2 SDS-PAGE法
  •   2.2 Ⅰ型胶原蛋白纯度分析
  •     2.2.1 超滤纯化前后胶原蛋白的SDS-PAGE
  •     2.2.2 Ⅰ型胶原蛋白紫外光谱
  •     2.2.3 蛋白含量测定
  •   2.3 Ⅰ型胶原蛋白结构分析
  •     2.3.1 SDS-PAGE法
  •     2.3.2 傅里叶变换红外光谱
  •     2.3.3 圆二色谱法 (CD)
  • 3 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 刘雯恩,周艳芳,范志强,李玉玲,甘兵,彭新生

    关键词: 型胶原蛋白,等电点沉淀法,超滤纯化,圆二色谱法,生物工程

    来源: 精细化工 2019年05期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑

    专业: 一般化学工业

    单位: 广东医科大学药学院,广东医科大学海洋医药研究院,广东医科大学第三附属医院

    基金: 广东省科技计划项目(2015A020214020),东莞市科技计划项目(2017507152431)~~

    分类号: TQ936.2

    DOI: 10.13550/j.jxhg.20180754

    页码: 850-855+874

    总页数: 7

    文件大小: 2772K

    下载量: 524

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