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梭状芽孢杆菌对呕吐毒素诱导的生长猪小肠PCNA、ghrelin和Hsp70表达的干预效应

2020-12-10阅读(973)

梭状芽孢杆菌对呕吐毒素诱导的生长猪小肠PCNA、ghrelin和Hsp70表达的干预效应

论文摘要

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol,DON）又名呕吐毒素（Vomitoxin,VT）对畜牧养殖业的健康发展带来了极大的威胁,造成了巨大的经济损失,但因毒性大而分子结构稳定,有很强的耐酸性和耐热性,所以目前市场上并没有针对DON脱毒效果显著的脱毒产品。本研究旨在验证梭状芽孢杆菌作为解毒菌对DON诱导的生长猪小肠PCNA、ghrelin和Hsp70表达的干预效应,为梭状芽孢杆菌的开发应用提供详实的理论依据。试验选取4月龄体重为55.58±1.83kg的健康PIC父母代生长猪40头,随机分为5组（n=8）,组间初始体重差异不显著（p>0.05）。对照组饲喂基础日粮（DON:371.2μg/kg,AFB1:1.56μg/kg,FB1:256.3μg/kg,ZEA:145.16μg/kg）,纯DON组饲喂基础日粮+呕吐毒素大米（DON:5429.31μg/kg,AFB1:3.42μg/kg,FB1:283.98μg/kg,ZEA:210.16μg/kg）,纯DON+梭状芽孢杆菌组:基础日粮+呕吐毒素大米+15mL/kg梭状芽孢杆菌,自然DON组:基础日粮+自然霉变小麦（DON:1904.44μg/kg,AFB1:1.59μg/kg,FB1:325.7μg/kg,ZEA:196.08μg/kg）,自然DON+梭状芽孢杆菌组:基础日粮+自然霉变小麦+15mL/kg梭状芽孢杆菌。预试验期7d,试验期28d,试验结束屠宰取其十二指肠、空肠及回肠。通过HE和IHC以及WB方法观察小肠的形态学变化及PCNA,ghrelin和Hsp70蛋白分布以及表达量的变化规律,分析梭状芽孢杆菌对DON的脱毒效果。试验结果表明:（1）与对照组相比,纯DON组生长猪的平均日增重降低,平均日采食量升高,但影响不显著（P>0.05）。组织学结构观察发现DON导致小肠绒毛缩短,隐窝深度增加,小肠黏膜上皮脱落,十二指肠段损伤状况最为严重;IHC及WB结果显示:DON抑制小肠黏膜上皮PCNA表达,并促进了小肠腺PCNA的蛋白的表达量,其中十二指肠最明显;DON提高了小肠绒毛黏膜上皮细胞及小肠腺分泌ghrelin、Hsp70的能力,ghrelin以空肠最显著,Hsp70以十二指肠表达最显著。梭状芽孢杆菌的添加提高了猪的平均日增重,平均日采食量趋于对照组水平,小肠绒毛损伤状态得到了一定程度的恢复;小肠绒毛上皮的PCNA的蛋白表达量趋于对照组水平,小肠腺的阳性反应减弱,下调了ghrelin以及Hsp70的蛋白表达量,接近对照组水平。（2）自然DON组的平均日增重及平均日采食量显著降低（P<0.05）,自然DON明显抑制小肠绒毛的生长发育,导致绒毛长短不一整体长度变短,隐窝深度增加,以十二指肠最为明显。IHC以及WB的结果显示:自然霉变小麦产生的DON毒素抑制小肠绒毛上皮表达PCNA,同时小肠腺的阳性反应增强,其中十二指肠最显著,并促进小肠上皮细胞及小肠腺的ghrelin和Hsp70的分泌,上调其蛋白表达量,其中回肠最明显;梭状芽孢杆菌的添加显著提高了平均日增重以及平均日采食量,接近对照组水平,并对自然DON所导致的绒毛形态损伤起到了一定的恢复作用;IHC以及WB的结果显示:梭状芽孢杆菌使小肠绒毛上皮的PCNA阳性细胞数量增加,同时减弱了小肠腺上的阳性反应,并下调了ghrelin及Hsp70的蛋白表达量,接近对照组水平。结论:梭状芽孢杆菌对DON导致的小肠组织学形态改变及PCNA、ghrelin和Hsp70表达的异常变化起到了正向干预的效应。

论文目录

  • 中文摘要
  • Abstract
  • 1 前言
  •   1.1 DON的研究现状
  •     1.1.1 DON的理化性质
  •     1.1.2 镰刀菌的污染现状
  •     1.1.3 中国及欧盟的镰刀菌毒素的限量标准
  •     1.1.4 DON的毒性作用
  •     1.1.5 对消化道的毒性作用
  •   1.2 镰刀菌毒素解毒剂的研究现状
  •   1.3 PCNA
  •   1.4 ghrelin
  •   1.5 Hsp70
  •   1.6 研究目的和意义
  • 2 材料与方法
  •   2.1 试验材料
  •     2.1.1 试验设计
  •     2.1.2 呕吐毒素的制备与梭状芽孢杆菌的培养
  •     2.1.3 试验日粮的配制和毒素含量的测定
  •     2.1.4 主要试剂和试验仪器
  •     2.1.5 主要试剂的配制
  •     2.1.6 主要的生物统计分析软件
  •   2.2 试验方法
  •     2.2.1 试验动物饲养管理
  •     2.2.2 生长性能指标的测定
  •     2.2.3 小肠样品采集
  •     2.2.4 石蜡切片的制备
  •     2.2.5 HE染色
  •     2.2.6 免疫组织化学法
  •     2.2.7 Western blot法
  •       2.2.7.1 总蛋白提取
  •       2.2.7.2 Western blot具体步骤
  •     2.2.8 统计与分析
  • 3 结果
  •   3.1 纯DON及梭状芽孢杆菌对生长猪生产性能的影响
  •   3.2 纯DON及梭状芽孢杆菌对生长猪小肠的组织学结构的影响
  •   3.3 纯DON及梭状芽孢杆菌对生长猪小肠中的PCNA分布的影响
  •   3.4 纯DON及梭状芽孢杆菌对生长猪小肠中的ghrelin分布的影响
  •   3.5 纯DON及梭状芽孢杆菌对生长猪小肠中的Hsp70 分布的影响
  •   3.6 自然DON及梭状芽孢杆菌对生长猪生产性能的影响
  •   3.7 自然DON及梭状芽孢杆菌对生长猪小肠的组织学结构的影响
  •   3.8 自然DON及梭状芽孢杆菌对生长猪小肠中的PCNA分布的影响
  •   3.9 自然DON及梭状芽孢杆菌对生长猪小肠中的ghrelin分布的影响
  •   3.10 自然DON及梭状芽孢杆菌对生长猪小肠中的Hsp70 分布的影响
  •   3.11 Western blot结果
  •     3.11.1 纯DON及梭状芽孢杆菌对小肠的PCNA、ghrelin以及Hsp70 的蛋白表达量的影响
  •     3.11.2 自然DON及梭状芽孢杆菌对小肠的PCNA、ghrelin以及Hsp70 的表达量的影响
  • 4 讨论
  •   4.1 梭状芽孢杆菌对纯DON对生长猪生产性能影响的分析
  •   4.2 梭状芽孢杆菌对纯DON致生长猪小肠结构形态及PCNA表达变化的影响
  •   4.3 梭状芽孢杆菌对纯DON导致生长猪小肠内ghrelin表达变化的影响
  •   4.4 梭状芽孢杆菌对纯DON导致生长猪小肠内Hsp70 表达变化的影响
  •   4.5 梭状芽孢杆菌对自然DON对生长猪生产性能影响的分析
  •   4.6 梭状芽孢杆菌对自然DON致生长猪小肠结构形态以及PCNA变化的影响
  •   4.7 梭状芽孢杆菌对自然DON导致生长猪小肠内的ghrelin变化的影响
  •   4.8 梭状芽孢杆菌对自然DON导致生长猪小肠内的Hsp70 变化的影响
  • 5 结论
  • 6 参考文献
  • 7 致谢

    • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 董永芳

    导师: 黄丽波

    关键词: 梭状芽孢杆菌,生长猪,小肠

    来源: 山东农业大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学,农业科技

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 山东农业大学

    分类号: S852.61

    总页数: 85

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