导读:本文包含了同源克隆论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基因,序列,紫花苜蓿,桑蚕,聚糖,基因组,节律。
同源克隆论文文献综述
林榕燕,方能炎,罗远华,黄敏玲,叶秀仙[1]（2019）在《文心兰FT同源基因的克隆及其表达分析》一文中研究指出FT(Flowering Locus T)及其同源基因被认为是植物开花、花发育相关的重要基因。为了深入研究FT同源基因的功能以及文心兰开花的分子机理,该研究以文心兰品种‘金辉’为试验材料,基于转录组测序结果,克隆获得‘金辉’FT同源基因,命名为OnFT(GenBank登录号为MK967676)。OnFT基因编码区长度为537 bp,共编码178个氨基酸;生物信息学分析表明,该蛋白质分子量约为19.99 kD,可能是一种亲水性不稳定蛋白质,属于PEBP家族蛋白;基于FT的系统进化分析表明,文心兰与同科植物桃红蝴蝶兰的亲缘关系较近。qRT-PCR分析结果显示,OnFT在文心兰不同组织的表达差异较大,在花中表达量最高,在根中几乎不表达;OnFT基因在幼嫩花芽中的表达量较低,并且在花的成熟过程中逐渐增加;OnFT基因在叶片和假鳞茎中的表达量随成熟度的增长均呈先上升后降低的变化趋势,在中苗期的叶片和抽芽期的假鳞茎中表达量较高。(本文来源于《西北植物学报》期刊2019年10期）
高建明,桂枝,卢树昌[2]（2019）在《紫花苜蓿β-1,3-葡聚糖酶基因同源克隆与序列变异分析》一文中研究指出β-1,3-葡聚糖酶是植物重要的防卫蛋白之一。采用同源克隆法,从16个紫花苜蓿品种的集群DNA中分离到3个苜蓿β-1,3-葡聚糖酶基因的部分基因组编码序列,分别对应于蒺藜苜蓿3个不同的β-1,3-葡聚糖酶基因,并命名为β-1,3-葡聚糖酶基因1、β-1,3-葡聚糖酶基因2和β-1,3-葡聚糖酶基因3。其中,β-1,3-葡聚糖酶基因2和苜蓿β-1,3-葡聚糖酶基因3及其蒺藜苜蓿对应基因与包括β-1,3-葡聚糖酶基因1在内的其他豆科同类基因遗传距离较大。序列变异分析显示,β-1,3-葡聚糖酶基因2的SNP位点间平均距离为255bp,DNA和氨基酸序列均非常保守,表明其在进化中受到了强烈的选择压力。β-1,3-葡聚糖酶基因1的SNP位点间平均距离虽然较小(31bp),但其全部21个SNP位点均为同义SNP,同时,测序片段仅发现了10个单倍型,远远小于其理论单倍型数目(2~(21))。这表明β-1,3-葡聚糖酶基因1的氨基酸序列高度保守,在功能上非常重要,少量单倍型的存在是为了调节其表达,以使苜蓿适应多种内、外部环境条件。(本文来源于《西部林业科学》期刊2019年05期）
朱文东[3]（2019）在《野桑蚕scalloped同源基因的克隆和序列分析》一文中研究指出Hippo通路与昆虫的生长、发育和变态等过程密切相关,在动物不同物种之间高度保守。scalloped基因是Hippo通路元件Yki的偶联因子之一,参与调控基因的表达。克隆了野桑蚕(Bombyx mandarina)scalloped基因的完整开放阅读框(ORF)及其上下游的部分非编码序列。序列联配分析表明,与家蚕相比,野桑蚕scalloped基因序列存在多处的核酸片段缺失、插入及位点差异。结构域分析表明,野桑蚕Scalloped蛋白与家蚕、黑腹果蝇、小鼠和人的蛋白结构类似,均含有完整的TEAD蛋白家族典型TEA结构域和PDB结构域,但野桑蚕编码蛋白缺失蛋白C末端序列。系统发生树分析表明,昆虫Scalloped蛋白与脊椎动物TEF3可能存在共同的起源;家蚕Scalloped在进化中出现晚于野桑蚕且经历较多遗传选择过程。(本文来源于《湖北农业科学》期刊2019年17期）
王青,何新华,林蔚,苏玲,李彬[4]（2019）在《柠檬UBE2I同源基因的克隆及表达模式分析》一文中研究指出前期从香水柠檬自交不亲和花的转录组数据中筛选到一个上调表达的泛素结合酶UBE2I同源基因片段,为了弄清该基因的特性,开展了本研究。以香水柠檬(自交不亲和)和白花柠檬(自交亲和)为试材,根据从香水柠檬花转录组中获得的UBE2I基因片段设计引物,采用同源克隆方法获得了香水柠檬和白花柠檬这2个品种中UBE2I同源基因的ORF全长和DNA全长,对其序列进行生物信息学分析,再对其表达模式进行探讨。结果显示UBE2I基因在香水柠檬和白花柠檬中的ORF长度均为483 bp,二个品种ORF全长仅有一个核苷酸的差异,编码160个氨基酸,但其氨基酸序列无差异;DNA全长为2 267 bp,拥有有5个外显子和4个内含子,在第2个和第4个内含子序列中存在2个类似于启动子(TATAA)框的结构。UBE2I泛素连接酶蛋白理论等电点为7.64,分子量为17 981.474 44 Da,叁级结构中有4个α螺旋、7个β折叠和10个无规卷曲,不是分泌蛋白,没有跨膜结构,肽链呈现疏水性。时空表达分析表明,UBE2I基因在香水柠檬的不同组织中均表达,但在不同组织中的表达存在差异,其中在花粉中的表达量明显高于其它组织,UBE2I在自交(香水柠檬♀×香水柠檬♂)后柱头中的表达量均比(香水柠檬♀×白花柠檬♂)杂交后柱头中的表达量高。本研究为进一步探索发现自交不亲和过程的泛素结合酶UBE2基因奠定基础。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2019年08期）
朱朝阳,文家和,倪瑜,张琪,王志明[5]（2019）在《小麦节律基因TaLHY同源基因的克隆及表达分析》一文中研究指出小麦节律基因TaLHY作为一个MYB转录因子,在小麦抗条锈病免疫反应过程中具有关键作用。本研究在小麦中分别克隆得到来源于叁个染色体组的TaLHY同源基因:TaLHYa、TaLHYb、TaLHYd。使用中国春及其缺体四体系N7A-T7B、N7D-T7B为材料,通过RT-PCR研究了叁个基因的节律表达以及受外源激素SA、条锈菌条中32 (CY32)诱导的表达特性,结果表明TaLHY同源基因的节律表达具有共表达特性;TaLHYa受SA诱导下调表达,TaLHYd受SA诱导上调表达,TaLHYb随TaLHYa、TaLHYd同时下调或上调表达。CY32处理小麦叶片24 h后叁个基因均上调表达,96 h后,TaLHYb仍持续高表达,另外2个同源基因不具该特性。在小麦抗条锈病防御反应过程中,TaLHYb可能具有更重要的作用。TaLHY同源群基因节律表达和对SA的响应模式具有协同调节的特性。本研究为揭示SA信号通路和节律基因TaLHY参与小麦抗条锈病免疫反应过程的相关性提供参考数据。(本文来源于《第十届全国小麦基因组学及分子育种大会摘要集》期刊2019-08-11）
蒋云峰,Ahsan,Habib,郑直,陈国跃,魏育明[6]（2019）在《大麦茎基腐病抗性位点Qcrs.cpi-4H的图位克隆与小麦同源基因优异等位变异的鉴定》一文中研究指出茎基腐病(Fusarium crown rot)是由镰刀菌引起的世界半干旱地区麦类作物的一种常见严重病害,引起麦类作物严重减产。筛选抗性材料,解析其抗病的遗传基础是麦类作物茎基腐病抗性改良的重要基础。我们前期鉴定了一个位于野生大麦4HL的主效抗茎基腐病位点Qcrs.cpi-4H,可以解释45.3%的表型变异。利用1820个株系的近等基因系衍生群体对Qcrs.cpi-4H进行精细定位研究,将其定位于0.09 cM范围,对应637 kb的物理区域,其中包含29个预测基因。通过构建新的遗传群体,候选基因区域被缩小至200 kb的物理区间,其中包含9个预测基因。结合近等基因系转录组分析的结果,我们正在对筛选到的候选基因展开功能验证的相关工作。克隆Qcrs.cpi-4H对理解麦类作物茎基腐病抗性的遗传机制和育种改良具有重要意义。后续鉴定该基因在小麦中同源基因的优异等位变异,可用于小麦抗茎基腐病育种。(本文来源于《第十届全国小麦基因组学及分子育种大会摘要集》期刊2019-08-11）
杨正福[7]（2019）在《水稻雄性不育基因TIP3的图位克隆与功能分析及其同源基因OsMS1分子机理研究》一文中研究指出在开花植物中雄性生殖发育涉及一系列复杂的生物学事件,需要精确的转录调控才能完成这一生物学过程。尽管已报道了一些调控绒毡层发育和花粉形成的转录因子,但是对乌氏体形态和花粉壁形成的转录调控机理尚不是很清楚。本研究在辐射诱变中恢8015的突变体库中,鉴定分离出了一个雄性败育的突变体为tip3(TDR interacting protein 3),进而对其调控基因进行了图位克隆和功能分析。另一方面,在中恢8015背景下敲除了拟南芥MS1的同源基因,并进一步研究了该基因在水稻绒毡层PCD和花粉外壁形成过程中的作用机理。具体研究结果如下:1.与野生型相比,突变体tip3营养生长正常,但是tip3花药泛白、变短,无成熟的花粉粒。通过细胞学观察发现,tip3中小孢子母细胞能够经历减数分裂产生形态正常的二分体和四分体,但是其乌氏体形态异常,无花粉外壁形成,绒毡层降解延迟。2.利用tip3突变体与中恢8015杂交获得的F_2进行遗传分析表明tip3不育性状受一对隐性核基因控制,进而利用tip3突变体与粳稻02428杂交构建的F_2分离群体将tip3不育基因定位在水稻3号染色体S20-29和S20-35两个分子标记之间,物理距离为21.4 kb。对候选基因测序发现在ORF3的第叁个外显子中有两个碱基(AG)缺失。通过转基因互补实验和CRISPR/Cas9敲除证明了TIP3是控制tip3突变体绒毡层降解延迟和花粉壁形成缺陷性状的基因。该基因编码保守的PHD-finger蛋白,在绒毡层和发育中的小孢子中高表达。进化分析表明TIP3与已知的PHD-finger蛋白有各自不同的进化方向,暗示TIP3可能具有不同的功能。3.亚细胞定位表明TIP3定位在细胞核中,酵母转录自激活活性分析表明TIP3具有转录自激活活性,然而PHD结构域并不具有激活活性。酵母双杂交和双分子荧光互补实验证明TIP3与花药发育调控因子TDR互作。此外,qPCR分析表明TIP3突变影响了绒毡层发育和降解以及孢粉素前体合成与转运相关基因的表达。4.通过CRISPR/Cas9技术在中恢8015背景下编辑拟南芥MS1的同源基因,获得了完全不育的纯合突变体,命名为osms1。该突变体花药变小泛白,无可见的花粉粒产生,雄性不育。细胞学观察结果显示osms1中绒毡层PCD延迟,花粉壁柱状结构缺失,花粉形成缺陷。5.OsMS1编码PHD-finger蛋白,定位在细胞核中,是个转录激活子,并且羧基端的12个氨基酸起到激活作用。Y2H和BiFC实验证明OsMS1可以与OsMADS15和TIP2蛋白相互作用。qPCR结果表明,与绒毡层PCD和花粉壁生物合成相关的基因如EAT1、AP37、AP25、OsC6和OsC4在osms1中表达量显着降低。这些结果表明OsMS1通过其PHD结构域与已知的绒毡层调控因子相互作用,调控水稻绒毡层PCD和花粉外壁的形成。(本文来源于《华中农业大学》期刊2019-06-01）
李振[8]（2019）在《基于Red/ET同源重组的基因簇克隆、修饰和异源表达平台的构建与应用》一文中研究指出微生物是天然产物的重要来源,随着合成生物学的快速发展和基因组测序技术的进步,越来越多的微生物基因组测序工作已完成,人们在这些微生物基因组发现了大量的微生物次级代谢产物生物合成基因簇尚未被开发和研究,但是很多微生物很难进行遗传操作或者在实验室内无法培养。将基因簇转入遗传背景清晰、易操作的宿主菌进行异源表达是开发生物合成资源的一种重要手段。但是微生物次级代谢产物基因簇一般大于20 kb,很难通过PCR的方式获得。获得基因簇的传统方法是构建基因组文库,但是周期长、操作复杂,不能满足高通量克隆基因簇的要求。符军等于2012年根据RecE和RecT蛋白能高效介导线性DNA分子之间发生同源重组的特性,开发了能够将目的DNA片段从基因组直接捕获至载体上的直接克隆技术。目前RecET直接克隆技术已被广泛应用于次级代谢产物基因簇的异源表达研究。次级代谢产物在异源表达时经常需要对表达载体进行修饰以添加基因转移元件、插入正调控基因、敲除负调控基因等。基于酶切和连接的传统DNA重组方法由于受到酶切位点和DNA分子大小的限制,难以完成这些遗传修饰。张友明等于1998年利用大肠杆菌Redαβ蛋白能够高效介导线性DNA分子和环状DNA分子之间发生同源重组的特性,建立了不受DNA分子大小和限制性酶切位点制约的DNA重组工程技术(Recombineering)。该技术能够精确、高效地对质粒、黏粒和细菌人工染色体等DNA分子进行基因插入、基因敲除、点突变和模块替换等操作,尤其适合天然产物基因簇的遗传改造。本研究将RecET DNA直接克隆系统和Redαβ DNA修饰系统整合到一个大肠杆菌宿主中,并通过克隆载体和DNA转移元件的标准化,建立了生物合成途径高通量直接克隆、修饰和异源表达的技术平台。在该技术平台中,我们针对不同大小基因簇和不同DNA序列特点构建了便于操作的直接克隆载体,同时将接合转移和转座元件、位点特异性重组元件、广宿主多拷贝复制子两侧的序列进行了标准化,使其都能通过Redαβ重组快速插入上述所有克隆载体中,使一个载体可以适用于细菌接合转移,转座和位点特异性重组等不同遗传操作手段,便于快速的进行异源表达研究。该技术平台实现了生物合成途径克隆、转移和异源表达的无缝对接,只需要一周就能完成生物合成途径的克隆及基因转移元件的插入,大大简化了DNA克隆、修饰、转移和异源表达的流程。利用该技术平台,我们对波赛链霉菌ATCC 27952、刺糖多孢菌NRRL18395和阿维链霉菌DSM 46492基因组中的次级代谢产物基因簇进行了克隆和异源表达研究。土壤和海洋宏基因组中的次级代谢产物基因簇由于浓度低而很难通过直接克隆获得,从头合成是克隆宏基因组中基因簇的有效方法,但是该方法对DNA组装效率的要求较高。本研究通过结合寡核苷酸体外退火和RecET介导的线性DNA分子间的同源重组建立了头合成基因簇的方法。该方法的策略是:(1)首先将10个两端带有20 nt互补配对序列的60 nt寡核苷酸组装成420 bp的双链DNA片段;(2)把10个两端带有40 bp同源序列的420 bp片段组装成4020 bp的中等长度DNA片段;(3)把两端带有40 bp同源序列的4020 bp片段组装成最终目的基因簇。我们利用该方法从头合成了在海鞘共生蓝细菌中发现的非核糖体多肽patellamide A的12.7 kb基因簇,并在大肠杆菌中进行了异源表达研究。本论文构建的基于Red/ET同源重组的基因簇克隆、修饰和异源表达技术平台为微生物基因组的开发利用提供了便利。(本文来源于《山东大学》期刊2019-05-21）
何国庆,常鹏杰,卞赛男[9]（2019）在《桂花SVP同源基因的克隆及序列分析》一文中研究指出试验以桂花'日香桂'Osmanthus fragrans cv.rixianggui嫩叶为试验材料,根据转录组数据库中SVP基因的保守序列信息,通过PCR方法克隆得到日香桂SVP基因,将其命名为QfSVP,运用在线生物信息学分析工具对OfSVP序列进行分析。结果表明:OfSVP基因全长1325 bp,开放阅读框(ORF)为687 bp,编码228个氨基酸。氨基酸序列保守性分析发现,OfSVP所编码的蛋白中含有MADS-box基因家族特有的K-box区域。通过ProtParam ExPASy在线软件分析OfSVP蛋白质分子式为C_(1121)H_(1859)N_(327)O_(364)S_9,分子量为26030.60 Da,理论等电点PI值为5.80。不稳定指数为68.10,属于不稳定蛋白质。蛋白氨基酸序列比对和系统发育进化分析结果表明OfSVP与油橄榄(Olea europaea)、黄连(Coptis chinensis)和芝麻(Sesamum indicum)的同源性分别达到94%、83%和82%;OfSVP基因的克隆与序列分析对于进一步了解桂花'日香桂'成花机理具有重要意义。(本文来源于《南方园艺》期刊2019年03期）
孙筱品,董玉梅,汪海燕,谌容,桂飞[10]（2019）在《Neuritin条件性基因打靶载体的构建和同源重组胚胎干细胞克隆鉴定》一文中研究指出Neuritin(Nrn1)是神经营养因子家族的成员,能够维持神经元的存活和突起的生长,在神经系统发育和再生中起重要作用。为了解Neuritin基因在整体动物水平的系统生物学功能,通过PCR扩增Neuritin基因片段,将该片段用In-fusion无缝克隆技术连接至用限制性内切酶Asc1酶切后线性化的CTVIRES-EGFP质粒,转化至Stellar感受态细胞后,对酶切和测序鉴定正确的阳性克隆子进行大量提取质粒,酶切使之线性化后将其电转导入小鼠胚胎干细胞细胞,经G418筛选,挑取抗性克隆,用PCR方法鉴定出同源重组的ES细胞DNA。结果表明,成功构建了CTV-Nrn1-IRES-EGFP基因打靶载体载体并筛选出阳性同源重组胚胎干细胞,为制备Neuritin条件性基因打靶小鼠模型奠定了实验基础。(本文来源于《动物医学进展》期刊2019年04期）
同源克隆论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
β-1,3-葡聚糖酶是植物重要的防卫蛋白之一。采用同源克隆法,从16个紫花苜蓿品种的集群DNA中分离到3个苜蓿β-1,3-葡聚糖酶基因的部分基因组编码序列,分别对应于蒺藜苜蓿3个不同的β-1,3-葡聚糖酶基因,并命名为β-1,3-葡聚糖酶基因1、β-1,3-葡聚糖酶基因2和β-1,3-葡聚糖酶基因3。其中,β-1,3-葡聚糖酶基因2和苜蓿β-1,3-葡聚糖酶基因3及其蒺藜苜蓿对应基因与包括β-1,3-葡聚糖酶基因1在内的其他豆科同类基因遗传距离较大。序列变异分析显示,β-1,3-葡聚糖酶基因2的SNP位点间平均距离为255bp,DNA和氨基酸序列均非常保守,表明其在进化中受到了强烈的选择压力。β-1,3-葡聚糖酶基因1的SNP位点间平均距离虽然较小(31bp),但其全部21个SNP位点均为同义SNP,同时,测序片段仅发现了10个单倍型,远远小于其理论单倍型数目(2~(21))。这表明β-1,3-葡聚糖酶基因1的氨基酸序列高度保守,在功能上非常重要,少量单倍型的存在是为了调节其表达,以使苜蓿适应多种内、外部环境条件。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
同源克隆论文参考文献
[1].林榕燕,方能炎,罗远华,黄敏玲,叶秀仙.文心兰FT同源基因的克隆及其表达分析[J].西北植物学报.2019
[2].高建明,桂枝,卢树昌.紫花苜蓿β-1,3-葡聚糖酶基因同源克隆与序列变异分析[J].西部林业科学.2019
[3].朱文东.野桑蚕scalloped同源基因的克隆和序列分析[J].湖北农业科学.2019
[4].王青,何新华,林蔚,苏玲,李彬.柠檬UBE2I同源基因的克隆及表达模式分析[J].基因组学与应用生物学.2019
[5].朱朝阳,文家和,倪瑜,张琪,王志明.小麦节律基因TaLHY同源基因的克隆及表达分析[C].第十届全国小麦基因组学及分子育种大会摘要集.2019
[6].蒋云峰,Ahsan,Habib,郑直,陈国跃,魏育明.大麦茎基腐病抗性位点Qcrs.cpi-4H的图位克隆与小麦同源基因优异等位变异的鉴定[C].第十届全国小麦基因组学及分子育种大会摘要集.2019
[7].杨正福.水稻雄性不育基因TIP3的图位克隆与功能分析及其同源基因OsMS1分子机理研究[D].华中农业大学.2019
[8].李振.基于Red/ET同源重组的基因簇克隆、修饰和异源表达平台的构建与应用[D].山东大学.2019
[9].何国庆,常鹏杰,卞赛男.桂花SVP同源基因的克隆及序列分析[J].南方园艺.2019
[10].孙筱品,董玉梅,汪海燕,谌容,桂飞.Neuritin条件性基因打靶载体的构建和同源重组胚胎干细胞克隆鉴定[J].动物医学进展.2019
论文知识图
