蓝舌病1型病毒VP5蛋白的表达及免疫原性分析

论文摘要

蓝舌病（Bluetongue,BT）是由蓝舌病毒（Bluetongue virus,BTV）感染引起的一种非接触性传染病。该病被世界动物卫生组织（World Organisation for Animal Health）列为一种必须申报的烈性动物传染病。BTV主要感染羊、牛等反刍动物。BTV通过库蠓、伊蚊等昆虫在反刍动物之间传播。构成病毒外壳的VP2能够诱导机体产生中和抗体;VP5能够增强由VP2刺激机体产生的中和抗体滴度,可以用于病毒样颗粒的装配和基因工程疫苗的研究。本研究利用原核表达系统表达了BTV1外壳蛋白VP5,又对其免疫原性进行研究,为进一步开展BTV VP5蛋白相关研究奠定了基础。通过构建原核重组质粒pET-28a-VP5,并转化BL21（DE3）感受态细胞。IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE和Western-blot结果表明,重组VP5蛋白分子量约为62kDa,与预期一致。进一步对诱导表达条件进行优化,结果表明用2×YT培养基、在IPTG浓度为0.4mmol/L、温度为25℃、诱导表达6h时重组蛋白可溶性表达量最高。纯化后的重组蛋白VP5分别以40μg/只和20μg/只免疫Balb/c小鼠,同时设置阴性对照。小鼠三免后ELISA检测产生抗体的效价,结果显示效价最高能达到1:2.048×105;Dot-ELISA结果显示VP5抗体能与BTV1病毒发生特异性反应。本研究不仅为分析VP5提高VP2的免疫保护效果的作用机制提供了重要的实验材料,并且为进一步研发多价亚单位疫苗和多肽疫苗奠定了基础。

论文目录

摘要

Abstract

1 文献综述

1.1 BTV的流行病学概述

1.1.1 BTV的流行现状

1.1.2 BTV的传播途径

1.1.3 BTV的易感动物及危害

1.1.4 BTV的发病机制

1.2 BTV的分子生物学概述

1.2.1 BTV的基因组构成

1.2.2 BTV的结构蛋白

1.2.3 BTV的非结构蛋白

1.2.4 BTV的形态结构及理化性质

1.3 BTV的诊断及防控

1.3.1 BTV的诊断

1.3.2 BTV的防控

1.4 BTV的研究进展

1.5 本研究的目的、意义

2 VP5蛋白的原核表达及纯化

2.1 实验材料

2.1.1 载体、菌株

2.1.2 实验试剂及试剂盒

2.1.3 主要实验仪器与耗材

2.1.4 试剂配制方法

2.2 实验方法

2.2.1 原核表达载体pET-28a-VP5 的构建

2.2.2 重组VP5 蛋白的表达、鉴定及可溶性分析

2.2.3 重组VP5 蛋白表达条件的优化

2.2.4 VP5 重组蛋白的纯化及浓度测定

2.3 实验结果

2.3.1 原核表达载体pET-28a-VP5 的构建

2.3.2 重组VP5 蛋白的表达、鉴定及可溶性分析

2.3.3 重组VP5 蛋白表达条件的优化

2.3.4 VP5 重组蛋白的纯化及浓度测定

2.4 讨论

2.5 本章小结

3 动物实验及免疫原性鉴定

3.1 实验材料

3.1.1 实验仪器及设备

3.1.2 实验耗材及试剂

3.1.3 实验溶液

3.1.4 实验动物及病毒

3.2 实验方法

3.2.1 免疫方案

3.2.2 免疫效果初步评价

3.3 实验结果

3.3.1 间接ELISA测定免疫血清效价

3.3.2 Dot-ELISA测定免疫血清与灭活病毒BTV1 的反应性

3.4 讨论

3.5 小结

4 结论

参考文献

附录英文缩略词表

致谢

个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 党伟华

导师: 王爱萍

关键词: 蓝舌病病毒,蛋白,原核表达,抗体

来源: 郑州大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 郑州大学

分类号: S852.65

总页数: 53

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蓝舌病1型病毒VP5蛋白的表达及免疫原性分析

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