首页> 正文

海藻糖合酶在枯草芽孢杆菌中的高效表达

2020-12-02阅读(983)

海藻糖合酶在枯草芽孢杆菌中的高效表达

论文摘要

以枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）为表达平台,海藻糖合酶为表达蛋白,研究了单启动子和多个启动子串联对外源蛋白表达的影响。分别选择6个启动子构建PsrfA、P43单启动子和PabrB-spoVG-LytR-mmgA四个时期特异性启动子串联表达系统进行验证。根据实验结果分析,组成型启动子P43转录强度最高,摇瓶中酶活达到3 381 U/g,串联启动子PabrB-spoVG-LytR-mmgA强度次之。针对验证酶活最高的重组菌pHT01-P43-treS进行发酵优化,并在5 L发酵罐中进行放大实验,酶活达到7 215 U/g。实现了海藻糖合酶在枯草芽孢杆菌中自诱导高效表达,为获得高效率制备海藻糖合成酶的表达系统奠定了基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 菌株与质粒
  •     1.1.2 实验试剂
  •     1.1.3 引物及核苷酸序列
  •     1.1.4 培养基
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 穿梭表达载体的构建
  •       1.2.1.1 PCR获得目的基因片段
  •       1.2.1.2 pHT01-PsrfA- treS表达载体的构建
  •       1.2.1.3 pHT01-P43-treS表达载体的构建
  •       1.2.1.4 pHT01-PabrB-spoVG-LytR-mmgA-treS表达载体的构建
  •     1.2.2 产海藻糖合酶重组枯草芽孢杆菌的构建
  •       1.2.2.1 枯草芽孢杆菌感受态的制备
  •       1.2.2.2 构建重组菌B.subtilis WB800n （pHT01-PsrfA-treS、pHT01-P43-treS和pHT01-PabrB-spoVG-LytR-mmgA-treS）
  •       1.2.2.3 验证重组菌
  •   1.3 摇瓶培养条件的优化
  •     （1） 碳源优化。
  •     （2） 碳氮比优化。
  •     （3） 不同发酵温度对发酵结果的影响。
  •     （4） 培养基初始pH值优化。
  •   1.4 5 L发酵罐发酵培养
  •     1.4.1 酶活测定
  •     1.4.2 SDS-PAGE检测分析
  • 2 结果与分析
  •   2.1 重组菌的构建
  •     2.1.1 重组质粒pHT01-PsrfA-treS、pHT01-P43-treS和pHT01-PabrB-spoVG-LytR-mmgA-treS的构建
  •     2.1.2 重组菌B.subtilis WB800n/pHT01-PsrfA-treS、B.subtilis WB800n/pHT01-P43-treS和B.subtilis WB800n/pHT01-PabrB-spoVG-LytR-mmgA-treS的构建
  •   2.2 启动子的筛选
  •   2.3 摇瓶发酵条件优化
  •     2.3.1 碳源优化
  •     2.3.2 氮源优化
  •     2.3.3 发酵温度对酶活的影响
  •     2.3.4 发酵pH值对产酶的影响
  •   2.4 发酵罐放大发酵培养
  •   2.5 SDS -PAGE凝胶分析
  • 3 结论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 王希晖,刘洪玲,隋松森,杨少杰,王瑞明,王腾飞

    关键词: 枯草芽孢杆菌,海藻糖合酶,启动子,自诱导,发酵优化

    来源: 食品与发酵工业 2019年07期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

    专业: 生物学,一般化学工业

    单位: 生物基材料与绿色造纸国家重点实验室( LBMP) ( 齐鲁工业大学),山东省微生物工程重点实验室( 齐鲁工业大学)

    基金: 国家自然科学基金青年基金资助项目(31501413),山东省重点研究开发项目(2017GSF221019),齐鲁工业大学(山东科学院)青年博士合作基金项目(2017BSHZ021)

    分类号: Q78;TQ925

    DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.019246

    页码: 29-36

    总页数: 8

    文件大小: 2687K

    下载量: 325

    相关论文文献

    • [1].海藻糖合酶磁性交联酶聚集体的制备及其性质研究[J]. 南开大学学报(自然科学版) 2018(06)
    • [2].转海藻糖合酶基因玉米株系的获得及其抗旱性研究[J]. 山西农业科学 2016(01)
    • [3].介孔分子筛固定化海藻糖合酶的研究[J]. 安徽农业科学 2012(10)
    • [4].高产高温海藻糖合酶菌株的诱变选育[J]. 食品科技 2010(06)
    • [5].产海藻糖合酶菌株的筛选及发酵条件的优化[J]. 中国酿造 2015(10)
    • [6].高温海藻糖合酶产生菌的诱变选育及产酶条件研究[J]. 食品研究与开发 2008(05)
    • [7].海藻糖合酶的结构和催化机制研究进展[J]. 中国酿造 2018(03)
    • [8].一株产海藻糖合酶假单胞菌菌株的分离及鉴定[J]. 中国酿造 2017(04)
    • [9].高温海藻糖合酶释放处理条件及其酶学性质的研究[J]. 安徽农业科学 2010(22)
    • [10].海藻糖合酶产生菌株的诱变选育[J]. 食品研究与开发 2008(11)
    • [11].海藻酸钙固定麦芽寡糖基海藻糖合酶的研究[J]. 安徽农业科学 2009(09)
    • [12].嗜热古菌Sulfolobus tokodaii strain 7中麦芽寡糖基海藻糖合酶的酶学性质[J]. 微生物学通报 2016(11)
    • [13].红色亚栖热菌海藻糖合酶在大肠杆菌中的表达及其酶学性质分析[J]. 南开大学学报(自然科学版) 2011(03)
    • [14].天蓝色链霉菌海藻糖合酶的异源表达、活性分析及重组菌全细胞转化合成海藻糖的条件优化[J]. 生物工程学报 2019(07)
    • [15].海藻糖合酶的自诱导表达及其催化生产海藻糖的新工艺[J]. 化工进展 2018(05)
    • [16].壳聚糖固定化海藻糖合酶[J]. 食品工业科技 2018(19)
    • [17].紫外-亚硝基胍复合诱变选育海藻糖合酶高产菌株的研究[J]. 食品科技 2009(05)
    • [18].海藻糖合酶基因工程菌的高密度发酵策略[J]. 食品研究与开发 2009(06)
    • [19].海藻糖的生产及分析方法的国内研究进展[J]. 甘蔗糖业 2020(01)
    • [20].萌发期和苗期玉米转海藻糖合酶基因的抗旱性研究[J]. 安徽农业科学 2019(17)
    • [21].Lys490饱和突变提高海藻糖合酶转化率的研究[J]. 食品与发酵工业 2018(01)
    • [22].昆明假单胞菌HL22-2海藻糖合酶基因的克隆、表达及酶学性质研究[J]. 中国酿造 2020(01)
    • [23].海藻糖合酶重组菌LB35透性化细胞产海藻糖特性研究[J]. 农业机械 2011(08)
    • [24].高温海藻糖合酶产生菌SN02004-01发酵产酶条件研究[J]. 食品科技 2010(11)
    • [25].薄层层析法在产海藻糖合酶菌株筛选中的应用研究[J]. 食品与发酵科技 2011(02)
    • [26].海藻糖合酶研究进展[J]. 中国酿造 2008(15)
    • [27].海藻糖的生物合成及相关酶系[J]. 中国甜菜糖业 2008(01)
    • [28].利用定点突变分析海藻糖合酶的功能[J]. 微生物学通报 2009(05)
    • [29].海藻糖合酶基因工程菌诱导表达条件的研究[J]. 食品工业科技 2009(11)
    • [30].海藻糖的应用及其合酶基因TPS在植物转基因中的研究进展[J]. 中国农学通报 2009(06)

    标签：;  ;  ;  ;  ;  

    海藻糖合酶在枯草芽孢杆菌中的高效表达
    下载Doc文档

    猜你喜欢

    © 2024 毕论降 版权所有 鄂ICP备12018319号-6