miR-17-5p靶向自噬相关蛋白ATG7调控巨噬细胞抗结核分枝杆菌感染作用的研究

论文摘要

目的:通过研究miR-17-5p对自噬相关基因ATG7的靶向调控机制和对细胞自噬的作用,探究miR-17-5p在结核分枝杆菌介导的自噬途径中的作用及其机制。方法:生物信息学分析得到miR17-5p的靶基因ATG7,通过成功构建载体ATG7野生型（p Mir GLO-ATG7-3’UTR-WT）和突变型,利用双萤光素酶报告系统、Western blot验证miR-17-5p和ATG7的靶向关系,同时构建结核分枝杆菌（H37Ra）感染的人源性THP-1巨噬细胞模型,将做不同处理的细胞分为三组:miR-17-5p mimics、miR-17-5p inhibitor、miR-17-5p nc。通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）检测H37Ra感染对miR-17-5p表达量的影响,并且进一步通过Western blot、免疫荧光观察检测LC3蛋白的表达量和自噬小体的数量。结果:MTB感染能够引起miR-17-5p的下调,随着感染复数的增加有明显的降低。而生物信息学预测结果显示miR-17-5p与ATG7具有靶向性,双萤光素酶报告实验、Western blot验证miR-17-5p能够和ATG7靶向结合,并对其进行负调控。进一步通过Western blot、免疫荧光观察发现miR-17-5p mimics组LC3Ⅱ的表达下调,自噬小体表达降低,而miR-17-5p inhibitor组相反。其中对H37Ra感染组与未感染组之间比较,ATG7和LC3Ⅱ蛋白表达明显增强。结论:miR-17-5p直接靶向结合ATG7 3’UTR抑制自噬,在巨噬细胞抗MTB过程中发挥作用。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 洪丹彤,张帆,王淑娥,王红霞,刘昆梅,徐广贤,霍正浩,郭乐

关键词: 自噬,结核分支杆菌

来源: 中国生物工程杂志 2019年06期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 宁夏医科大学临床医学院,宁夏医科大学颅脑疾病重点实验室,宁夏医科大学总医院宁夏临床病原微生物重点实验室,宁夏医科大学基础医学院宁夏生殖与遗传重点实验室

基金: 国家自然科学基金(81760359,31600744),宁夏高等学校科学研究项目(NGY2017088)资助项目

分类号: R392

DOI: 10.13523/j.cb.20190601

页码: 1-8

总页数: 8

文件大小: 480K

下载量: 276

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