Ⅰ群禽腺病毒4型IgG抗体间接ELISA检测方法的建立

Ⅰ群禽腺病毒4型IgG抗体间接ELISA检测方法的建立

论文摘要

利用纯化的Ⅰ群禽腺病毒4型重组Hexon蛋白,通过各反应条件筛选,建立了Ⅰ群禽腺病毒4型IgG抗体间接ELISA检测方法。结果显示,抗原最佳包被浓度为1μg/mL;最佳封闭液为1%牛血清白蛋白;待检血清最佳作用浓度是400倍稀释,37℃孵育60 min;酶标抗体的最佳作用条件为稀释度1∶8000,37℃孵育60 min;最佳显色时间为10 min。用所建方法对160只临床鸡只进行检测,同时与拭子PCR检测对比,一致性较好,表明该方法可有效用于临床检测。

论文目录

  • 1 材料
  •   1.1 抗原与对照抗体
  •   1.2 试剂
  •   1.3 临床样品
  • 2 方法
  •   2.1 FAdV-4抗体间接ELISA操作基本方法
  •   2.2 抗原最佳包被浓度及最佳样品稀释度的确定
  •   2.3 最佳封闭液的选择
  •     2.3.1 直接封闭
  •     2.3.2 包被后封闭
  •   2.4 样品孵育时间的优化
  •   2.5 HRP-兔抗鸡二抗最佳工作浓度的测定
  •   2.6 HRP-兔抗鸡二抗最佳孵育时间的优化
  •   2.7 底物 (TMB) 反应时间的优化
  •   2.8 临床样品检测
  • 3 结果与分析
  •   3.1 抗原最佳包被浓度及最佳样品稀释度的确定
  •   3.2 最佳封闭液的选择
  •   3.3 样品孵育时间的优化
  •   3.4 HRP-兔抗鸡二抗最佳稀释度的确定
  •   3.5 HRP-兔抗鸡二抗最佳反应时间的确定
  •   3.6 底物 (TMB) 显色时间的确定
  •   3.7 阴、阳性标准临界值的确定
  •   3.8 临床样品I群FAdV-4抗体的检测
  • 4 讨论与结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 张启龙,孙丹,韦海涛,宋彦军,周德刚,冯小宇,王林

    关键词: 群禽腺病毒型,蛋白,间接,检测

    来源: 中国兽药杂志 2019年08期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 北京市动物疫病预防控制中心,北京市兽药监察所

    基金: 北京市农业农村局农业科技项目(20170130)

    分类号: S852.65

    页码: 1-7

    总页数: 7

    文件大小: 113K

    下载量: 137

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