犬Ⅰ型腺病毒结构蛋白Knob的可溶性表达及免疫原性研究

犬Ⅰ型腺病毒结构蛋白Knob的可溶性表达及免疫原性研究

论文摘要

为了探究犬Ⅰ型腺病毒(Canine adenovirus type 1, CAdV-1)F1301株结构蛋白Knob的免疫原性,试验采用原核表达技术将Knob蛋白基因克隆到pColdⅡ原核表达载体中进行低温诱导,并在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中实现可溶性表达。利用纯化后的重组蛋白Knob免疫Balb/c小鼠,监测免疫后小鼠血清中重组蛋白Knob特异性抗体ELISA效价、病毒中和抗体效价,测定脾脏T淋巴细胞增殖活性,研究重组蛋白Knob的免疫原性。结果表明:表达的重组蛋白Knob为可溶性蛋白,分子质量约为20 ku。第2次免疫后7,14天,试验组小鼠血清ELISA抗体效价分别为1∶6 400和1∶3 200,中和抗体效价分别为1∶118和1∶96。第2次免疫后7天,试验组小鼠T淋巴细胞增殖指数为1.322,显著高于对照组(P<0.05)。说明试验成功表达出CAdV-1重组蛋白Knob,所表达的重组蛋白Knob具有良好的免疫原性且存在CAdV-1的中和抗原表位。

论文目录

  • 1 材料
  •   1.1 毒株、菌株、载体及试验动物
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 主要仪器
  • 2 方法
  •   2.1 Knob基因的克隆及表达载体的构建
  •   2.2 重组质粒的表达纯化及Western-blot分析
  •   2.3 重组蛋白Knob免疫原性分析
  •     2.3.1 免疫动物血清中重组蛋白Knob特异性抗体的ELISA检测
  •     2.3.2 CAdV-1中和抗体效价的测定
  •     2.3.3 脾脏T淋巴细胞增殖活性的测定
  •   2.4 数据的统计分析
  • 3 结果与分析
  •   3.1 Knob基因的克隆及表达载体的构建
  •   3.2 重组质粒的表达纯化及Western-blot分析
  •   3.3 重组蛋白Knob免疫原性分析
  •     3.3.1 免疫动物血清中重组蛋白Knob特异性抗体的ELISA检测
  •     3.3.2 CAdV-1中和抗体效价的测定
  •     3.3.3 脾脏T淋巴细胞增殖活性的测定
  • 4 讨论与结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 孙杰,秦飞燕,朱言柱,薛向红,廉士珍,赵辉,王洋,柴秀丽,闫喜军

    关键词: 犬型腺病毒,蛋白,原核表达,免疫原性,中和抗体

    来源: 黑龙江畜牧兽医 2019年15期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 中国农业科学院特产研究所农业农村部经济动物疫病重点实验室,敦化市畜牧业管理局

    基金: “十三五”国家重点研发计划项目(2016YFD0501001)

    分类号: S852.4

    DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.12.0115

    页码: 10-14

    总页数: 5

    文件大小: 217K

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