导读:本文包含了小脑颗粒细胞论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:小脑,颗粒,细胞,感觉,皮层,电位,激酶。
小脑颗粒细胞论文文献综述
符园园[1]（2019）在《孕哺期大鼠母体邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯暴露影响子代小脑颗粒细胞增殖与凋亡的机制研究》一文中研究指出目的:邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(Di-(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP)因其在塑料制品中的广泛应用以及在环境中的不易降解,成为了一种普遍存在的环境污染物。作为一种环境内分泌干扰物,DEHP在土壤,水体以及空气中均被发现,并可通过多种途径进入人体。流行病学报道孕期及哺乳期DEHP暴露会影响胎儿的神经发育,小脑是神经发育中重要的脑区,与机体的运动功能,协调性以及运动学习都有关,小脑颗粒细胞是小脑中数量最多且其正常发育是保证小脑功能的前提。但目前母体孕期和哺乳期暴露DEHP是否影响仔鼠小脑颗粒细胞的发育还不明确,其相关机制也有待研究。本研究通过在孕期及哺乳期通过灌胃的方式构建DEHP暴露模型,探讨妊娠期及哺乳期母体DEHP暴露对子代小脑颗粒细胞的增殖凋亡以及其相关行为学发育的影响,并探明其可能作用机制。研究方法:本研究以Wistar孕鼠和原代提取的小脑颗粒细胞为研究对象,首先将雌性 Wistar 大鼠随机分为四组:0 mg/kg/day,30 mg/kg/day,300 mg/kg/day和750 mg/kg/day DEHP暴露组。按着对应的剂量对其从怀孕第一天到仔鼠出生后21天进行DEHP灌胃构建DEHP暴露动物模型。利用气相色谱-质谱联用仪检测四个剂量组中怀孕第19天母鼠尿液中DEHP的五种代谢产物邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯(MEHP)、邻苯二甲酸单(2-乙基-5-羟己基)酯(MEHHP)、邻苯二甲酸单(2-乙基-5-氧己基)酯(MEOHP)、邻苯二甲酸(2-乙基-5羧基戊基)酯(MECPP)和邻苯二甲酸(2-羧基甲基已基)酯(MCMHP)的含量,初步证明DEHP暴露动物模型是否成立。对其出生后各个时间段的仔鼠进行相应的小脑相关的神经行为学检测,包括平面翻正反射,负屈地性反射和抓力测试。在仔鼠出生后7天和14天,采用免疫荧光染色观察各组仔鼠小脑小脑颗粒细胞增殖的情况,并通过Realtime PCR和Western blot检测Shh信号通路中相关蛋白的表达。采用ELISA检测子代小脑内的雌激素水平以及Western blot检测芳香化酶的表达情况。此外在体内采用TUNEL检测各剂量组仔鼠在PN 7和PN 14天小脑颗粒细胞的凋亡水平,并通过Western blot检测各组仔鼠小脑颗粒细胞PI3K/Akt信号通路中相关蛋白的表达情况。同时体外实验提取原代小脑颗粒神经元,建立原代小脑颗粒神经元MEHP暴露模型,采用CCK8检测MEHP对小脑颗粒神经元的耐受情况,并用TUNEL染色检测MEHP染毒后各组小脑颗粒神经元的凋亡水平以及采用免疫荧光染色检测其各剂量组的Cleaved caspase 3的表达情况;同时采用Western blot检测MEHP染毒后小脑颗粒神经元PI3K/Akt信号通路中相关蛋白的表达情况;并通过使用PI3K/Akt信号通路的激活剂IGF1以及抑制剂LY294002后检测各组小脑颗粒细胞的凋亡水平以及PI3K/Akt信号通路相关蛋白的变化情况。结果:1、孕期及哺乳期DEHP暴露对仔鼠小脑体重以及小脑脏器系数的影响。于仔鼠PN 7和PN 14天取材并称量仔鼠体重以及小脑的重量,称量结果表明,各组仔鼠(雌性与雄性)其小脑重量以及仔鼠的体重均无统计学差异。2、DEHP暴露模型中母鼠尿液中DEHP主要五种代谢产物的浓度。气相色谱-质谱联用仪检测四个剂量组中怀孕第19天母鼠尿液中DEHP的五种代谢产物MEHP、MECPP、MEOHP、MEMHP和MEHHP的含量。结果显示对照组的五种DEHP代谢产物的含量均低于最低检测限,但随着染毒剂量的增加,这五种代谢产物的含量也随之增加,并呈剂量反应关系(P<0.05)。这些结果表明我们成功建立了 DEHP暴露的动物模型。3、孕期及哺乳期母体DEHP暴露对仔鼠小脑颗粒细胞的增殖的影响。免疫荧光结果显示,在PN 7和PN 14天,与对照组相比,300 mg/kg/d与750 mg/kg/d DEHP暴露组中雄性仔鼠小脑外颗粒层颗粒细胞的增殖率(Pax6+PCNA+/Pax6+)显着下降(P<0.05)。然而,对照组与 30 mg/kg/d DEHP暴露组之间仔鼠小脑颗粒细胞的增殖率并无明显差异(P>0.05)。此外,对于雌性仔鼠其各组之间增殖率并没有明显的差异(P>0.05)。4、孕期及哺乳期母体DEHP暴露对仔鼠神经行为发育的影响。在PN 3,PN 5和PN 7天,与对照组相比,暴露于300与750 mg/kg/d DEHP剂量组的雄性仔鼠的平面翻正反射的时间均延长,且差异具有统计学意义(P<0.05)。而雌性仔鼠的平面翻正反射时间在各组间无明显差异(P>0.05)。对于抓力测试,暴露于300与750 mg/kg/d DEHP剂量组的雄性仔鼠仔鼠握杆时间与对照组相比显着减少(P<0.05)。而雌性仔鼠的握杆时间在各组间无明显差异(P>0.05)。此外,各组雌雄仔鼠前肢抓力实验时间均无明显差异。对于负趋地性反射实验,各个暴露组的雌雄仔鼠由头朝下转变到头朝上即旋转180°所需的时间均无明显差异(P>0.05)。5、孕期及哺乳期母体DEHP暴露对仔鼠小脑颗粒细胞Shh信号通路的影响。Real time RCR结果显示,在PN 7和PN 14天,与对照组相比,暴露于300与750 mg/kg/d DEHP剂量组的雄性仔鼠小脑Shh,Gli1,N-Myc以及Cyclind1基因水平显着下降(P<0.05)。Western blot结果同样说明,在各个时间点,300与750 mg/kg/d DEHP暴露组的雄性仔鼠小脑Shh,Gli1,N-Myc以及Cyclind1蛋白表达水平比对照组也明显降低(P<0.05),然而对于雌性仔鼠,在PN 7和PN 14天各剂量暴露组之间的仔鼠小脑Shh,Gli1,N-Myc以及Cyclind1的mRNA水平以及蛋白的表达均无明显变化(P>0.05)。6、孕期及哺乳期DEHP暴露对仔鼠小脑雌激素水平以及芳香化酶表达的影响。在各时间点暴露于300与750 mg/kg/d DEHP剂量组的雄性仔鼠小脑的芳香化酶的蛋白表达与对照组相比显着降低(P<0.05),而雌性仔鼠的小脑的芳香化酶的蛋白表达在四个剂量组各个时间点均无明显差异(P>0.05)。此外,ELASA结果显示,与对照组相比,暴露于300与750 mg/kg/d DEHP剂量组的雄性仔鼠小脑的雌激素水平也有明显下降(P<0.05),同样,雌性仔鼠小脑的雌激素水平在四个剂量组各个时间点均无明显差异(P>0.05)。7、孕期与哺乳期母体DEHP暴露对仔鼠小脑颗粒细胞凋亡的影响。TUNEL结果显示300 mg/kg/d和750 mg/kg/d DEHP暴露组的雄性仔鼠的TUNEL阳性细胞率与对照组相比明显增加(P<0.05),然而对雌性仔鼠的TUNEL阳性细胞率无明显影响(P>0.05)。8、孕期与哺乳期母体DEHP暴露对仔鼠小脑Total caspase 3以及Cleaved caspase 3蛋白表达的影响。在雄性仔鼠中,在PN 7和PN 14天,300 mg/kg/d和750 mg/kg/d DEHP暴露组中Cleaved caspase 3的表达水平明显高于对照组(P<0.05),而Total caspase 3的表达水平与对照组相比却反而下降(P<0.05)。对于雌性仔鼠各暴露剂量组间的Cleaved caspase 3的表达无明显差异(P>0.05),Total caspase 3的表达也无明显差异(P>0.05)。9、孕期与哺乳期母体DEHP暴露对仔鼠小脑PI3K/Akt信号通路的影响。Western Blot 结果显示,在 PN 7 和 PN 14 天,300 mg/kg/d 和 750 mg/kg/d DEHP暴露组雄性仔鼠小脑组织中的p-PI3K,p-Akt和Bcl-2水平与对照组相比显着下降(P<0.05),而Bax的蛋白表达却明显上升(P<0.05),各组雄性仔鼠小脑中PI3K,Akt蛋白表达无明显差异(P>0.05)。各剂量暴露组中雌性仔鼠的小脑中PI3K/Akt信号通路中相关蛋白水平均无明显变化(P>0.05)。10、MEHP对小脑颗粒神经元活力的影响。CCK8结果显示随着MEHP染毒剂量和时间的增加,细胞活力随之下降。25 lμM MEHP处理原代提取的小脑颗粒细胞12 h和24 h后,并没有明显影响小脑颗粒细胞的活力,但25 μM的MEHP作用在小脑颗粒神经元48 h后细胞活力显着下降(P<0.05)。此外,250 μM MEHP作用在小脑颗粒细胞24 h后,细胞活力与对照组相比大约下降了 20%,当1000 μM MEHP作用于细胞24h后,细胞活力下降了 50%。11、MEHP促进了原代小脑颗粒神经元凋亡。TUNEL染色结果显示随着MEHP染毒剂量的增加,小脑颗粒神经元TUNEL阳性细胞率随之增加(P<0.05)。同时我们还发现,随着MEHP的浓度增大,小脑颗粒神经元Cleaved caspase-3阳性细胞数也随之增多(P<0.05)。Western blot结果也显示,与对照组相比,MEHP染毒组的Cleaved caspase-3的蛋白水平明显增加(P<0.05),而Total caspase-3的蛋白表达水平却反而下降(P<0.05)。12、MEHP干扰PI3K/Akt信号通路蛋白分子的表达。结果显示,与对照组相比,小脑颗粒神经元MEHP染毒组中p-PI3K,p-Akt和Bcl-2的蛋白表达水平明显下降(P<0.05),而Bax的蛋白表达水平明显增加(P<0.05)。此外,在各个组中PI3K和Akt的蛋白表达水平无明显差异(P<0.05)。13、IGF1通过激活PI3K/Akt信号通路降低小脑颗粒细胞的凋亡,LY294002通过抑制PI3K/Akt信号通路加重了 MEHP诱导的小脑颗粒细胞的凋亡。MEHP单独处理组中的Bax和Cleaved caspase 3的蛋白表达水平增加(P<0.05),而p-PI3K,p-Akt,Bcl-2和Totalcaspase3的蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与MEHP单独处理组相比,IGF1与MEHP共同处理组中p-PI3K,p-Akt,Bcl-2 和 Total caspase 3 的蛋白水平明显增加(P<0.05),而 Bax 和 Cleaved caspase3的蛋白表达水平降低(P<0.05)。此外,在IGF1单独处理组与对照组之间,各蛋白的表达水平无明显差异。同时TUNEL结果显示,与MEHP单独处理组相比,预先给予IGF1的MEHP处理组中的TUNEL阳性细胞数明显减少(P<0.05)。而在对照及IGF1单独处理组之间TUNEL阳性细胞数没有明显的差异(P>0.05)。与对照组相比,DEHP与PI3K/Akt信号通路的抑制剂LY294002组一样可以抑制PI3K/Akt信号通路,且增加小脑颗粒细胞的TUNEL阳性细胞率(P<0.05)。与LY294002单独处理组相比,MEHP与LY294002共同处理组的p-PI3K,p-Akt,Bcl-2和Total caspase 3的蛋白表达水平显着降低(P<0.05),Bax和Cleaved caspase 3的蛋白表达水平明显增高(P<0.05),且小脑颗粒细胞的TUNEL阳性细胞率也明显增加(P<0.05)。结论:1、孕哺期DEHP暴露可通过下调Shh信号通路抑制雄性仔鼠小脑颗粒细胞的增殖,并导致神经发育障碍。2、孕哺期DEHP暴露可通过抑制PI3K/Akt信号通路诱导小脑颗粒细胞的过度凋亡。3、DEHP损伤小脑颗粒细胞的性别差异性可能与仔鼠小脑内雌激素水平以及芳香化酶表达有关。(本文来源于《中国医科大学》期刊2019-02-01）
符园园,董静,游明丹,丛章钊,韦玲玲[2]（2018）在《母体DEHP暴露抑制雄性仔鼠小脑颗粒细胞前体的增殖》一文中研究指出目的 DEHP作为一种增塑剂被广泛应用在各种商业和工业产品中。由于它与塑料分子之间结合的不稳定性,使它很容易释放到环境中而成为了一种无处不在的环境污染物。作为一种环境内分泌干扰物,DEHP进入体内会干扰自然激素的产生,释放以及代谢进而对人体产生健康影响。本研究利用Wistar孕鼠建立DEHP暴露模型,来探究不同剂量的DEHP母体暴露对子代小脑颗粒细胞的增殖影响,并检测了shh信号通路的水平,为母体DEHP暴露对子代神经发育的影响提供实验基础。方法实验将Wistar孕鼠分为四个剂量组,对照组(0 mg/kg/d),低剂量暴露组(30mg/kg/d),中剂量暴露组(300 mg/kg/d)和高剂量暴露组(750 mg/kg/d)。采用免疫荧光技术观察了仔鼠小脑颗粒细胞前体增殖特异性蛋白PCNA的表达水平,并测定了shh信号通路中shh,gli1,nmyc和cyclinD1的基因水平以及蛋白表达。结果与对照组相比,300 mg/kg/d和750 mg/kg/d DEHP暴露组雄性仔鼠小脑颗粒细胞前体PCNA表达水平下降。同时在300 mg/kg/d和750 mg/kg/d DEHP暴露组中,雄性仔鼠小脑中的shh,gli1,nmyc和cyclinD1的基因水平和蛋白表达与对照组相比降低,差异都具有显着性差异。而母体DEHP暴露对雌性仔鼠没有明显影响。结论 300 mg/kg/d和750 mg/kg/d DEHP母体暴露抑制了雄性仔鼠的小脑颗粒细胞前体的增殖,这个变化与shh信号通路中shh,gli1,nmyc和cyclinD1 mRNA水平以及蛋白表达的下调有关。(本文来源于《2018环境与健康学术会议--精准环境健康：跨学科合作的挑战论文汇编》期刊2018-08-13）
苏文浩[3]（2018）在《尼古丁对感觉刺激诱发小鼠小脑颗粒细胞层场电位的影响》一文中研究指出目的:N型乙酰胆碱受体(nAChRs)在哺乳动物小脑皮层神经环路中大量存在,尼古丁可以活化nAChRs可以通过调节其它受体及递质传递来影响小脑皮层各种神经元的活动,但活化尼古丁对哺乳动物小脑皮层颗粒细胞层感觉信息传递的影响还不清楚。因此,本研究将在活体动物上观察小脑表面局部灌流给予不同剂量的尼古丁对感觉刺激诱发小鼠小脑颗粒细胞层场电位活动的影响,探索尼古丁对小脑皮层颗粒层感觉信息传导的影响机制。方法:本实验选用昆明种小鼠,采用腹腔注射乌拉坦进行麻醉,给予气管插管术后用耳棒和口部固定器把小鼠固定在自制的在体记录架上。然后,去除要记录部分的头皮皮肤及肌肉组织,使颅骨暴露于空气中,在记录部位放置灌流槽,进行开颅手术。用牙科钻去除颅骨,剥离硬脑膜,在记录部位用充氧的人工脑脊液进行表面灌流。通过Axopatch-200B放大器记录小脑颗粒细胞层场电位,颗粒细胞层的细胞外记录大约在软脑膜下300-400μ m处。利用1440数模转换器将记录的数据在电脑上用Clampex 10.3软件记录。记录玻璃电极经过拉制仪拉制而成,在记录用的玻璃电极内充入ACSF约20-30μL。吹风感觉刺激同侧触须垫是用一个规格为12的钢管连接一个气体喷射装置进行吹风刺激(时程5-500 ms,压力 50-60 psi)。Picospritzer 通过Marster 8控制器(A.M.P.I.)和 Clampex 10.3软件来进行同步电生理记录。使用记录电极通过膜片钳放大器记录感觉刺激诱发的场电位,应用显微镜来寻找小脑的记录部分,将记录玻璃电极放置于记录部分,利用微操仪将记录电极小心刺入软脑膜下,到达小脑皮质颗粒细胞层后给予吹风感觉刺激,寻找最大反应记录部位后,记录场电位变化。小脑皮层表面通过蠕动泵给予尼古丁及其受体阻断剂进行灌流,观察由于药物引起的场电位的变化。电生理数据应用Clampfit 10.4软件统计分析。实验数据采用均数土标准误表示,通过标准配对t检验或者方差分析,采用SPSS版本号17.0分析软件来评估差异。当P<0.05时被认为是存在实验组之间的统计学显着差异。结果:(1)在电流钳记录模式下,面部吹风刺激(60 ms,60 psi)可诱发小脑皮质颗粒细胞层出现兴奋性反应,脑表面灌流Nicotine(0.5mM)后N1、N2的振幅及波形下面积比灌流给药前变大,提示小脑皮质颗粒细胞层兴奋性反应增强。(2)脑表面灌流Nicotine(0.5mM)后吹风刺激引起的振幅增加是有浓度依存性的,可剂量依存地增强感觉刺激诱发小鼠颗粒细胞场电位开始反应的振幅,根据浓度-反应曲线显示半数有效浓度(EC50)为398μ M。(3)尼古丁增加感觉刺激诱发小鼠小脑皮层颗粒层反应N1、N2的振幅和波形下面积,及N2/N1的比率,说明尼古丁影响感觉刺激诱发的开关反应和感觉信息在颗粒层传递的高保真特性。(4)在脑表面灌流氯化六甲双胺后,尼古丁对感觉刺激诱发的颗粒细胞层场电位反应的振幅及AUC没有显着影响,与给药前比较没有明显差异,表明尼古丁通过nAChRs增强感觉刺激诱发小鼠颗粒细胞层场电位反应强度。(5)尼古丁是通过活化突触前nAChRs来增加感觉刺激诱发小鼠小脑皮层颗粒层反应N1、N2的振幅和波形下面积,及N2/N1的比率。结论:尼古丁通过活化nAChRs导致感觉刺激诱发小鼠小脑皮质颗粒细胞层场电位反应增强,影响感觉刺激诱发的开关反应和感觉信息在颗粒细胞层传递的高保真性,提示nAChRs系统参与哺乳动物小脑皮层颗粒层感觉信息的传递与整合。(本文来源于《延边大学》期刊2018-05-14）
王建新,李崭,何志利,黄洁,李涛[4]（2018）在《基于原代小脑颗粒细胞的A型肉毒毒素活性分析法的建立》一文中研究指出目的分离、培养SD大鼠原代小脑颗粒细胞,用于评价A型肉毒毒素活性。方法将出生后6~8 d的SD大鼠小脑颗粒细胞培养5~7 d后用A型肉毒毒素处理,采用免疫荧光法进行检测并评价毒素的活性,Western印迹法分析毒素活性与剂量关系。结果与结论成功培养了大鼠小脑颗粒细胞,并在原代神经细胞水平建立了A型肉毒毒素活性分析法,测定了毒素活性剂量关系,为进一步解析肉毒毒素作用的生化机制提供了技术手段。(本文来源于《军事医学》期刊2018年01期）
胡夏韵,苏天园,刘丽,季敏,美丽克木·巴拉提[5]（2017）在《c-Jun和Bcl-2在海洛因所致大鼠小脑颗粒细胞凋亡中的作用》一文中研究指出目的探究海洛因致小脑颗粒细胞凋亡中c-Jun氨基端激酶(c-Jun)和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白质的表达情况,分析c-Jun和Bcl-2与海洛因影响小脑颗粒细胞凋亡的关系。方法取8只出生7d的SD大鼠小脑颗粒细胞进行体外培养,随机分为实验组(以80 mg/L海洛因干预)、抑制剂组(以80 mg/L海洛因和10μmol/L CEP1347干预)、正常组(正常培养的小脑颗粒细胞)。采用Hoechst 33258荧光染色技术检测细胞凋亡率,采用免疫荧光、Western blot检测c-Jun和Bcl-2蛋白的表达情况。结果实验组细胞凋亡率较抑制剂组及正常组高(P<0.05);实验组与正常组比较,c-Jun蛋白含量明显升高(P<0.05),Bcl-2蛋白含量下调(P<0.05);抑制剂组中c-Jun蛋白含量较实验组明显下降(P<0.05)。结论 c-Jun和Bcl-2参与海洛因致小脑颗粒神经元细胞凋亡过程,并且可能是c-Jun氨基末端激酶信号通路中的重要候选促凋亡因子。(本文来源于《新疆医科大学学报》期刊2017年12期）
金文哲,邴艳华,邱德来,初春平,金哲虎[6]（2016）在《丙泊酚对小鼠小脑皮层颗粒细胞层感觉信息传递的影响》一文中研究指出最近,我们研究发现丙泊酚抑制面部刺激诱发的小脑皮层分子层场电位反应的GABA能成分,但增强分子层和浦肯野细胞上的平行纤维兴奋性输入,提示丙泊酚可能影响活体动物小脑颗粒细胞对感觉信息的传递。1材料与方法1.1动物和主要试剂6~8周龄健康♂ICR小鼠6只,体质量28~32 g,由延边大学实验动物中心提供。丙泊酚(批(本文来源于《中国药理学通报》期刊2016年12期）
金娟,咸峰元,吴光,崔松彪[7]（2016）在《乙醇对感觉刺激诱发小鼠小脑颗粒细胞反应的影响机制》一文中研究指出目的探讨乙醇对小脑颗粒细胞感觉信息传递的影响,揭示急性酒中毒对小脑皮质感觉信息传递与整合影响的部分机制。方法 ICR小鼠(6~8周龄)经腹腔注射乌拉坦(1.3 g/kg体重.)麻醉后,在小脑Crus II相应部位行直径为1~1.5 mm的开颅术,除去硬脑膜,脑表面暴露部位持续灌流人工脑脊液(ACSF);叁叉神经感觉刺激选用吹风刺激同侧触须垫,电生理记录选用GC场电位记录,通过膜片钳放大器及数据采集软件记录感觉刺激诱发GC场电位变化;电生理实验数据分析采用Clampfit 10.1软件,采用SPSS软件进行数据统计学分析。结果(1)吹风刺激(60 ms,50~60 psi)小鼠触须垫,可诱发小脑Crus II区颗粒细胞高保真反应。(2)小脑表面灌流乙醇对诱发反应的潜伏期没有明显影响,但可逆性地抑制颗粒细胞的感觉刺激诱发反应。(3)乙醇对小脑颗粒细胞的感觉刺激诱发反应的抑制作用有浓度依存性,最小抑制浓度为0.5 mmol/L,最大抑制浓度300 mmol/L。(4)高浓度乙醇(500 mmol/L)明显降低P1振幅中值(half-width)、振幅下面积(area)、P1上升参数(rise tau)和衰减参数(decay tau),表明高浓度乙醇严重影响递质传递与信息传导。(5)阻断GABAA受体活性增强P1振幅,同时完全阻断乙醇对GC感觉刺激诱发反应的抑制作用,表明乙醇通过增强GABAA受体活性来抑制GC感觉刺激诱发反应。结论乙醇通过增强GABAA受体活性对小脑颗粒细胞感觉刺激诱发反应产生明显的抑制作用,表明乙醇抑制小脑颗粒细胞对感觉信息的传递,提示急性酒中毒对小脑运动调节功能的损害可能与乙醇抑制小脑皮质感觉信息传递有关。(本文来源于《中风与神经疾病杂志》期刊2016年05期）
王小青,王淑曼,王来,鄢明超,邓锦波[8]（2016）在《MitoTracker对在体小鼠小脑和体外培养颗粒细胞线粒体的染色方法》一文中研究指出目的:采用线粒体红色荧光探针MitoTracker标记小脑颗粒细胞线粒体,并与标记体外培养神经元线粒体进行比较,探讨MitoTracker标记在体脑细胞线粒体的实验方法。方法:在脑立体定位仪下,微量注射MitoTracker线粒体红色荧光探针到小鼠小脑皮质,继续饲养3 d后,常规取脑、固定、切片,利用共聚焦显微镜观察线粒体标记情况。结果:共聚焦显微镜下,可观察到在体标记的神经细胞内颗粒样线粒体呈团块状分布,排列较体外培养神经元标记的杆状线粒体紧密。结论:MitoTracker线粒体红色荧光探针可用于标记在体小脑细胞的线粒体。(本文来源于《解剖学杂志》期刊2016年02期）
金文哲[9]（2016）在《丙泊酚对小鼠小脑皮层分子层和颗粒细胞层感觉信息传递的影响》一文中研究指出[目的]丙泊酚是一种中枢神经系统抑制剂,在体内条件下剂量依赖性的抑制大脑新皮层的信息处理。然而,丙泊酚对活体动物小脑皮质分子层感觉信息处理的影响还不清楚。因此,我们在乌拉坦麻醉麻醉下,应用电生理学和药理学方法研究丙泊酚对感觉刺激诱发小鼠小脑分子层场电位反应的影响。[方法]6-8周龄的成年ICR小鼠通过腹腔注射体重为1.3g/kg乌拉坦麻醉后,进行气管插管以避免呼吸道堵塞,然后将小鼠固定在定制的立体定位装置上。在小脑相应部位作一个防水外流灌流槽后,在小脑Crus Ⅱ区的相对应部位行开颅手术,钻一个直径为1-1.5mm的小孔,暴露记录部位的小脑表面,并用蠕动泵在暴露脑表面持续灌流含氧的人工脑脊液(artificial cerebrospinal fluid, ACSF)o使用Axopatch-200B膜片钳放大器(Molecular Devices, Foster City, CA)记录感觉刺激诱发小脑皮层分子层场电位,并通过D/A转换器1440和Clampex 10.3软件获取感觉刺激诱发场电位活动的数据。记录电极内填充的是人工脑脊液,阻抗在3-5 MΩ之间。丙泊酚和gabazine购置于Sigma上海公司,所以药物溶于ACSF并用蠕动泵来来灌流到手术暴露部位。使用Clampfit10.3软件进行电生理学的数据分析,所有数据采用均数±标准误表示,并应用SPSS 17.0软件进行配对T检验或单因素方差分析,P<0.05被认为实验组之间有显着性差异。[结果](1)小脑表面灌注浓度为10-1000μM的丙泊酚可显着抑制感觉刺激诱发的分子层场电位反应的GABA能成分(P1),呈现出振幅和波形下面积(AUC)明显减少,但波形的上升时间与延迟时间显着增加。(2)丙泊酚显着增强感觉刺激诱发的分子层场电位反应的兴奋性成分(N1),这表现在振幅和AUG的增加,并伴随着上升时间和衰减时间的增加。(3)在GABAA受体阻断剂,gabazine (20μM)的存在下,丙泊酚显着增加浦肯野细胞兴奋性突触后反应成分(N2)的幅度和AUC。[结论]本研究结果表明丙泊酚通过调节GABAA受体活性,导致竞争性抑制感觉刺激诱发小鼠小脑皮质分子层场电位反应的GABA能成分,并增强平行纤维兴奋传入。[目的]丙泊酚是一种中枢神经系统抑制剂,通过活化γ氨基丁酸A和甘氨酸受体来降低神经元的活性。最近,我们研究发现丙泊酚抑制面部刺激诱发的小脑皮层分子层场电位反应的GABA能成分,但增强分子层和浦肯野细胞上的平行纤维兴奋性输入,提示丙泊酚调节活体动物小脑颗粒细胞对感觉信息的传递。因此,本研究拟利用乌拉坦麻醉小鼠,应用电生理学和药理学方法研究丙泊酚对感觉刺激诱发小鼠小脑颗粒细胞层场电位反应的影响。[方法]实验动物选用成年ICR小鼠(6-8周龄),通过腹腔注射体重为1.3g/kg乌拉坦麻醉后,进行气管插管以避免呼吸道堵塞,然后将小鼠固定在定制的立体定位装置上。在小脑相应部位作一个防水外流的灌流槽后,在小脑Crus Ⅱ区的相对应部位行开颅手术,钻一个直径为1-1.5mm的小孔,暴露记录部位的小脑表面,并用蠕动泵在暴露脑表面持续灌流含氧的ACSF。使用Axopatch-200B膜片钳放大器记录感觉刺激诱发小脑皮层颗粒细胞层场电位反应,并通过型号为1440的D/A转换器和Clampex 10.3软件获取感觉刺激诱发场电位活动的数据。记录电极内填充的是人工脑脊液,阻抗在3-5 MΩ之间。丙泊酚和NMD A, gabazine和D-APV购置于Sigma上海公司,所以药物溶于ACSF并用蠕动泵来来灌流到手术暴露部位。使用Clampfit 10.3软件进行电生理学的数据分析,所有数据采用Mean ± S. E. M.表示,并应用SPSS 17.0软件进行配对T检验或单因素方差分析,P<0.05被认为实验组之间有显着性差异。[结果](1)脑表面灌流50-1000μM的丙泊酚,可显着增强吹风刺激小鼠同侧触须垫诱发的小脑皮层颗粒细胞层的场电位反应,呈现在刺激开始反应(Ron)半宽度和曲线下面积(AUC)的增加,但Ron的振幅和上升时间没有明显改变。(2)丙泊酚同时导致刺激反应结束(Roff)振幅增强,Roff与R。n比值增大。丙泊酚诱发Ron反应波形下面积增大,具有剂量依存性,半数有效浓度为242.4毫摩尔。(3)给予GABAA受体拮抗剂gabazine (20 pM)可以显着增加Ron的振幅,半宽值,上升时间常数和曲线下面积,丙泊酚(300μM)可以进一步导致上述指标增加。(4)给予NMDA受体阻断剂D-APV(250μM)不仅显着减弱Ron的半宽值、曲线下面积和Roff的振幅,而且完全阻断丙泊酚对面部感觉刺激诱发颗粒层场电位的增强作用。此外,阻断NMDA受体对Ron的振幅没有显着影响。[结论]丙泊酚通过活化NMDA受体显着增强小鼠面部感觉刺激诱发的颗粒细胞层场电位反应,但丙泊酚对颗粒细胞层感觉刺激诱发场电位的增强作用与GABAa受体活化无关,进一步揭示了丙泊酚导致面部感觉刺激诱发小脑分子层和浦肯野细胞平行纤维兴奋性传入的增强机制。(本文来源于《延边大学》期刊2016-03-06）
刘晓同[10]（2015）在《小脑发育中颗粒细胞前体细胞的增殖依赖于Sonic Hedgehog信号》一文中研究指出信号通路调控发育的基因组学研究认为,一些进化保守的信号通路,包括骨形成蛋白BMP信号通路,Wnt信号通路,Notch和Hedgehog(Hh)信号通路等,参与了几乎所有动物的发育。尽管细胞生长的环境决定了一个信号通路最后的输出,但大多数的实验研究表明,大部分信号通路的配体、受体、膜信号转导结构和转录因子都是进化保守的。Hedgehog(Hh)信号通路是一个在调控细胞的生长分化,胚胎的发育成形和肿瘤的起始生长中都起着重要作用的信号通路,且从非脊椎动物到脊椎动物进化保守。在脊椎动物中,根据Hh蛋白的不同,可以将Hh信号通路分为叁种类型:Sonic Hedgehog(Shh)、Desert Hedgehog(Dhh)和Indian Hedgehog(Ihh),它们的调控范围及分布情况各不相同,其中Shh信号通路是目前研究最成熟,也是在体内分布较为广泛的一个信号通路。多项研究表明Shh信号通路在哺乳动物早期发育过程中对于维持神经管的发育起着十分关键的作用。在脑的形态发育过程中,小脑的生长和形成是一个独特的结构区域。在新生儿的小脑发育过程中,起初会出现小脑体积的明显增长,这种体积的不断增长主要依赖于颗粒细胞的不断增殖和扩增,颗粒细胞是小脑中最丰富的神经元集群。小脑的皮层是有几种已经确定了的神经元细胞集群组成,这些细胞群处在不同的皮层,这种严格的分层取决于发育过程中细胞的增值、分化和迁移适时的精确分配。在小脑发育过程中,有两个明显增殖的区域:一个是脑室神经上皮细胞区,另一个是位于小脑表面的外颗粒层(EGL)细胞。EGL是由颗粒细胞前体细胞(GCPs)组成,小鼠出生后,EGL的颗粒细胞前体细胞不断的增殖,直到出生后的两周左右,经有丝分裂形成颗粒性神经元,并迁移到EGL层的下方,形成内颗粒层(IGL),IGL是由成体终末分化的神经元细胞组成,这种有丝分裂后的颗粒性神经元快速的迁移依赖于贝格曼神经胶质。EGL的颗粒细胞前体细胞能够不断增值的动力来自于浦肯野细胞,浦肯野细胞的树突能够延伸到EGL下方,形成一个单层,成为浦肯野细胞层(PCL)。蒲肯野细胞可以产生和分泌SHH,SHH作为一种细胞增殖因子可与位于EGL的颗粒性细胞前体细胞上的抑制性受体PTCH结合,使得PTCH对SHH信号通路下游激活性受体Smo的抑制作用解除,从而导致SHH信号通路激活,刺激细胞的自我更新,以此维持EGL的扩增。髓母细胞瘤(以下简称MB)是儿童中最常见的恶性程度很高的脑部肿瘤,它起源于小脑颗粒细胞层的未成熟的颗粒性神经元细胞前体细胞或深层神经干细胞。大量的研究表明SHH信号通路的异常激活与髓母细胞瘤的发生有着非常密切的关系。MB形成的假说之一就是EGL的颗粒性细胞前体细胞的PTCH基因突变,导致SHH信号通路过度激活,EGL层过度扩增,从而形成肿瘤。最新的研究表明,Ptch基因的缺失会导致小鼠在出生后七个月左右自发的产生髓母细胞瘤,且在6周的时候,小鼠小脑的表面会有大量的异位细胞,这些异位细胞从病理学的角度分析与晚期的肿瘤细胞非常的相似,被称作前癌细胞。但是MB发生的分子机制仍尚不清楚。我们的研究发现在小脑发育的早期,SHH信号是促进小脑外颗粒层细胞增殖的重要信号,通过建立体外脑片培养系统,客观的还原了外颗粒层细胞向内颗粒层迁移的动态过程,并发现一旦SHH信号被阻断,外颗粒层细胞的增殖会明显受到抑制,但迁移却几乎不受影响。我们利用Ptch基因缺失的小鼠发现,在小鼠出生后2-3周,外颗粒层的细胞不能正常的向内颗粒层迁移,并保持着高度增殖的特性。最后,希望通过对小脑外颗粒层细胞早期的增殖、迁移的观察,发现SHH信号通路对小脑早期发育的影响,并提示MB发生的可能分子机制。(本文来源于《南京医科大学》期刊2015-05-01）
小脑颗粒细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的 DEHP作为一种增塑剂被广泛应用在各种商业和工业产品中。由于它与塑料分子之间结合的不稳定性,使它很容易释放到环境中而成为了一种无处不在的环境污染物。作为一种环境内分泌干扰物,DEHP进入体内会干扰自然激素的产生,释放以及代谢进而对人体产生健康影响。本研究利用Wistar孕鼠建立DEHP暴露模型,来探究不同剂量的DEHP母体暴露对子代小脑颗粒细胞的增殖影响,并检测了shh信号通路的水平,为母体DEHP暴露对子代神经发育的影响提供实验基础。方法实验将Wistar孕鼠分为四个剂量组,对照组(0 mg/kg/d),低剂量暴露组(30mg/kg/d),中剂量暴露组(300 mg/kg/d)和高剂量暴露组(750 mg/kg/d)。采用免疫荧光技术观察了仔鼠小脑颗粒细胞前体增殖特异性蛋白PCNA的表达水平,并测定了shh信号通路中shh,gli1,nmyc和cyclinD1的基因水平以及蛋白表达。结果与对照组相比,300 mg/kg/d和750 mg/kg/d DEHP暴露组雄性仔鼠小脑颗粒细胞前体PCNA表达水平下降。同时在300 mg/kg/d和750 mg/kg/d DEHP暴露组中,雄性仔鼠小脑中的shh,gli1,nmyc和cyclinD1的基因水平和蛋白表达与对照组相比降低,差异都具有显着性差异。而母体DEHP暴露对雌性仔鼠没有明显影响。结论 300 mg/kg/d和750 mg/kg/d DEHP母体暴露抑制了雄性仔鼠的小脑颗粒细胞前体的增殖,这个变化与shh信号通路中shh,gli1,nmyc和cyclinD1 mRNA水平以及蛋白表达的下调有关。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
小脑颗粒细胞论文参考文献
[1].符园园.孕哺期大鼠母体邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯暴露影响子代小脑颗粒细胞增殖与凋亡的机制研究[D].中国医科大学.2019
[2].符园园,董静,游明丹,丛章钊,韦玲玲.母体DEHP暴露抑制雄性仔鼠小脑颗粒细胞前体的增殖[C].2018环境与健康学术会议--精准环境健康：跨学科合作的挑战论文汇编.2018
[3].苏文浩.尼古丁对感觉刺激诱发小鼠小脑颗粒细胞层场电位的影响[D].延边大学.2018
[4].王建新,李崭,何志利,黄洁,李涛.基于原代小脑颗粒细胞的A型肉毒毒素活性分析法的建立[J].军事医学.2018
[5].胡夏韵,苏天园,刘丽,季敏,美丽克木·巴拉提.c-Jun和Bcl-2在海洛因所致大鼠小脑颗粒细胞凋亡中的作用[J].新疆医科大学学报.2017
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[7].金娟,咸峰元,吴光,崔松彪.乙醇对感觉刺激诱发小鼠小脑颗粒细胞反应的影响机制[J].中风与神经疾病杂志.2016
[8].王小青,王淑曼,王来,鄢明超,邓锦波.MitoTracker对在体小鼠小脑和体外培养颗粒细胞线粒体的染色方法[J].解剖学杂志.2016
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[10].刘晓同.小脑发育中颗粒细胞前体细胞的增殖依赖于SonicHedgehog信号[D].南京医科大学.2015
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