卵泡颗粒细胞论文_凌英会,朱露,吴昊,陈青,权青

导读:本文包含了卵泡颗粒细胞论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译,主要关键词:卵泡,颗粒,细胞,受体,雌激素,卵巢,孕酮。

卵泡颗粒细胞论文文献综述

凌英会,朱露,吴昊,陈青,权青[1](2019)在《山羊FST慢病毒载体构建及其对卵巢卵泡颗粒细胞增殖的影响》一文中研究指出研究卵泡抑素(FST)对山羊卵巢卵泡颗粒细胞增殖的影响。采集山羊卵巢组织、分离培养原代卵巢卵泡颗粒细胞,RT-PCR克隆山羊FST,设计shRNA片段,构建慢病毒过表达载体和干扰载体,感染原代卵巢卵泡颗粒细胞,qPCR技术检测过表达与干扰的效果, CCK-8检测细胞的增殖效果。结果显示:分离培养的山羊卵巢卵泡颗粒细胞经促卵泡素受体(FSHR)免疫荧光鉴定,阳性率为95%;慢病毒感染颗粒细胞时荧光蛋白的表达占比80%;qPCR验证FST过表达和干扰慢病毒载体的效果均显着(P<0.05);过表达FST显着(P<0.05)抑制卵巢卵泡颗粒细胞的增殖,干扰FST显着(P<0.05)促进卵巢卵泡颗粒细胞增殖。笔者分离出山羊卵巢卵泡颗粒细胞,成功构建FST过表达和干扰两种慢病毒载体,感染结果表明FST能够抑制山羊卵巢卵泡颗粒细胞的增殖,为进一步研究FST在哺乳动物卵泡发育调控中的作用及其机制提供了基础资料。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2019年09期)

马丽珠,郑宇新,王立强,江中良[2](2019)在《牛卵泡颗粒细胞中生长相关基因的表达研究》一文中研究指出随着卵巢卵泡的生长,卵泡内雌激素分泌量逐渐上升,雌激素通过其受体(Estrogen Receptors,Esrs)对卵泡的调节作用也在发生改变。该研究通过手术法获取牛卵巢上不同直径的卵泡颗粒细胞,对颗粒细胞中雌激素受体及相关基因表达进行研究。结果表明:Esr1和Esr2都能在牛卵泡颗粒细胞中表达,且随着卵泡的生长而显着下降(P<0.05);Fshr的表达随着卵泡的生长而显着上升(P<0.05),但在中、大型卵泡颗粒细胞中差异不显着(P>0.05);Lhr在大型卵泡颗粒细胞中的表达量极显着高于小、中型卵泡(P<0.01);随着卵泡的生长,Cox2在颗粒细胞中的表达显着上升(P<0.05),而Hsd17b1的表达则显着下降(P<0.05)。综上所述,随着卵泡生长,卵泡颗粒细胞对Esr1、Esr2作用的依赖性逐渐减弱;大卵泡在排卵前Lhr表达量急剧上升,同时诱导Cox2表达量显着上升而Hsd17b1表达量显着下降,表明大卵泡已启动排卵反应。(本文来源于《家畜生态学报》期刊2019年09期)

郭云霞,郝庆红,张英杰,刘月琴[3](2019)在《绵羊卵泡期卵泡颗粒细胞FSHR差异剪接体的表达》一文中研究指出为探讨卵泡期卵泡颗粒细胞促卵泡素特异性受体(FSHR)差异剪接体表达的变化,选择30只道寒杂交一代育成母羊肌注PG+埋植CIDR+肌注PG进行同期发情处理,选取9只发情母羊屠宰,取两侧卵巢组织,按小卵泡(≤3.0 mm),中等卵泡(3.0~5.0 mm)和大卵泡(≥5.0 mm)级别分别收集卵泡液和颗粒细胞,采用放射性免疫法测定类固醇激素(E_2和P_4)和FSH浓度,实时定量PCR检测不同直径卵泡颗粒细胞FSHR差异剪接体表达水平。结果表明,小卵泡和中等卵泡中FSHR1和FSHR3 mRNA的表达量极显着高于FSHR2和FSHR4(P<0.01),在中等卵泡中FSHR3 mRNA的表达量显着高于FSHR1(P<0.01);大卵泡中FSHR2 mRNA的表达量显着高于FSHR1、FSHR3和FSHR4(P<0.01),FSHR1、FSHR3和FSHR4 mRNA的表达量差异不显着(P>0.05)。大卵泡中雌激素浓度极显着高于小卵泡和中等卵泡(P<0.01),孕酮浓度无显着性差异(P>0.05),E_2/P_4比值与大卵泡中FSHR3 mRNA的表达量呈极显着负相关(P<0.01)。由结果可知,卵泡发育过程中FSHR1和FSHR3可能是小卵泡和中等卵泡颗粒细胞增殖的2种主要剪接形式。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2019年08期)

李振淼,李文[4](2019)在《miR-383通过下调细胞周期相关蛋白的表达抑制小鼠卵泡颗粒细胞的增殖》一文中研究指出目的探讨微小RNA-383(miR-383)在小鼠卵泡不同发育阶段的表达规律以及对颗粒细胞增殖的影响。方法取健康雌性受孕昆明小鼠不同小鼠出生后12、 21、 21 d[腹腔注射10 IU孕马血清促性腺激素(PMSG)48 h后]和21 d[腹腔注射10 IU PMSG 48 h和10 IU人绒毛膜促性腺激素(hCG)6 h后]的卵巢组织、卵泡和颗粒细胞,通过实时定量PCR法检测miR-383的表达情况。取小鼠出生21 d的颗粒细胞,分别转染miR-383模拟物(miR-383 mimics)或miR-383抑制物(miR-383 inhibitor),另外设置阴性对照组。通过噻唑蓝(MTT)法检测颗粒细胞增殖情况,流式细胞术检测颗粒细胞的细胞周期变化。采用Western blot法检测细胞周期相关蛋白细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、 cyclin B、细胞周期蛋白依赖激酶1(CDK1)、 CDK2、 CDK4的蛋白水平。结果与小腔前卵泡相比,大腔前卵泡中miR-383的含量降低,但是在腔较小的有腔卵泡中含量升高,成熟卵泡中的含量又进一步降低。与小腔前卵泡颗粒细胞相比,大腔前卵泡和腔较小的有腔卵泡颗粒细胞中miR-383的含量降低,但是在成熟卵泡颗粒细胞中的含量却有所上调。与空白组相比, miR-383 mimics组颗粒细胞的增殖速度减慢,且G0/G1期比例升高, G2/M期比例降低, cyclin D1、 cyclin B、 CDK1、 CDK2、 CDK4蛋白水平降低;而miR-383 inhibitor组颗粒细胞的增殖速度加快, G0/G1期比例降低, G2/M期比例升高,且cyclin D1、 cyclin B、 CDK1、 CDK2、 CDK4蛋白水平增加。结论 miR-383可通过抑制细胞周期相关蛋白的表达,将颗粒细胞周期阻滞在G0/G1期,进而抑制卵泡颗粒细胞的增殖。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2019年06期)

高小博,姚楠,郑盼盼,骆海燕,马旭[5](2019)在《miR-143在卵泡刺激素介导的卵巢颗粒细胞孕酮生成中的作用》一文中研究指出目的探讨miR-143在卵泡刺激素(FSH)介导的卵巢颗粒细胞孕酮生成中的作用。方法实时定量RT-PCR检测FSH诱导原代颗粒细胞后miR-143的表达;重组腺病毒感染颗粒细胞进行miR-143的过表达;放射免疫法(RIA)测定孕酮的水平。结果 50ng/ml的FSH处理原代颗粒细胞24h后颗粒细胞分泌孕酮显着增加(P<0.001),建立了FSH刺激原代颗粒细胞分泌孕酮模型。miR-143在FSH处理颗粒细胞6、12h后表达没有显着变化,在24h后表达显着增加(P<0.01),在48h时表达量最高(P<0.001)。与感染对照病毒Ad-miRNC组相比,感染Ad-miR143组的细胞miR-143表达水平显着增加(P<0.01)。感染Ad-miR143后颗粒细胞与空白对照组和感染对照病毒组相比,孕酮分泌水平显着升高(P<0.01)。结论 miR-143可以促进FSH介导的卵巢颗粒细胞孕酮生成。(本文来源于《生殖医学杂志》期刊2019年06期)

李金秋[6](2019)在《GDF9和BMP15对鸡卵泡颗粒细胞增殖及孕酮合成的影响》一文中研究指出鸡的卵巢发育是一个受多因子共同调控的复杂的动态过程,其中卵泡发育的状态直接影响到母鸡的产蛋性能。鸡卵泡发育的研究可为了解禽类繁殖性能调控机理和提高家禽生产性能奠定理论基础。生长分化因子9(GDF9)和骨形态发生蛋白15(BMP15)均属于转化生长因子-β(TGF-β)超家族的成员,已被证实在哺乳类动物卵巢发育中有重要调控作用,但在禽类中的研究较少。本研究的主要目的是探索GDF9和BMP15对鸡卵泡颗粒细胞的影响。研究首先检测鸡卵泡发育过程中性激素的合成变化、GDF9和BMP15特异性受体的表达变化,然后建立颗粒细胞体外培养模型并对细胞增殖和类固醇激素合成进行验证,最后分别探索GDF9和BMP15对颗粒细胞功能的影响。主要研究结果如下:1.鸡卵泡内孕酮和雌二醇的合成随发育而呈现动态变化。孕酮合成始于等级卵泡,进入排卵前卵泡阶段后(特别是F1~F2)大量增加,排卵后消失;雌二醇主要在等级前卵泡中合成,进入等级发育后合成逐渐下调,排卵后停止。卵泡发育过程中雌二醇和孕酮的“此消彼长”,说明不同阶段卵泡内细胞的功能不同。2.临近卵泡选择时,FSH受体(FSHR)、GDF9和BMP15的共同受体在颗粒层中的基因表达显着上调,表明它们及其配体可能参与卵泡选择过程。特别是FSHR在小黄卵泡颗粒层的独特表达模式,暗示FSHR和FSH在卵泡选择和颗粒细胞分化中具有重要作用。受体基因BMPR2、ALK5和ALK6在卵泡颗粒层的高表达(显着高于膜层),提示GDF9和BMP15对颗粒细胞有调控作用。3.体外培养的原代颗粒细胞在短时间内能较好地模拟体内状态,可用于细胞增殖和孕酮合成的研究。等级前卵泡颗粒细胞(phGC)和排卵前卵泡颗粒细胞(poGC)在细胞增殖速度和孕酮合成上的差异,体现了颗粒细胞的不同分化状态。EGF促进颗粒细胞增殖,FSH上调poGC的孕酮合成及类固醇合成基因STAR、CYP11A1和HSD3B的表达,说明内分泌激素FSH和旁分泌因子EGF参与调控卵泡发育。4.GDF9从多个方面调控卵泡颗粒细胞的功能。GDF9能以剂量依赖的方式抑制颗粒细胞增殖,同时促进细胞周期G1/S转化并调控相关基因的表达;GDF9在等级前卵泡颗粒细胞中增强DNA复制、抑制凋亡,而对排卵前卵泡颗粒细胞的DNA复制和细胞凋亡无显着影响。5.在排卵前卵泡颗粒细胞中,单独的GDF9不影响孕酮合成,但与FSH共处理时促进FSH诱导的孕酮合成和STAR基因表达,在此过程中FSHR的表达变化可能介导了GDF9对FSH功能的调控。6.BMP15抑制颗粒细胞增殖,且该作用可被抑制剂LY2109761和dorsomorphin阻断,但不能被SB505124阻断,说明BMP15通过TGF-β家族受体BMPR2和ALK6调控颗粒细胞增殖。7.BMP15对卵泡颗粒细胞具有抑增殖、促分化的作用。在等级前卵泡中,BMP15抑制EGF诱导的颗粒细胞增殖;而在排卵前卵泡中,BMP15促进FSH诱导的孕酮合成。(本文来源于《华中农业大学》期刊2019-06-01)

孟凯[7](2019)在《WT1基因调控牛卵泡颗粒细胞和膜细胞类固醇激素生成的研究》一文中研究指出WT1作为含锌指结构蛋白的转录因子,不仅在肿瘤发生过程中起重要的作用,还在维持组织稳态、调控器官发育等方面也发挥重要作用。类固醇激素参与了哺乳动物卵泡发育和闭锁的生物学过程,可以影响卵泡发育和卵母细胞的质量。颗粒细胞和膜细胞作为卵泡内主要的类固醇激素分泌细胞,其分泌的雌激素、孕酮及雄激素在卵泡发育及闭锁过程中扮演着重要的角色。据报道,WT1有两种可变剪接体WT1(+KTS)和WT1(-KTS),在性腺发育过程中起到不同的作用。已有人研究,WT1的下调能够调控小鼠腔前卵泡颗粒细胞的过早分化,引起卵泡发育异常。但是目前,WT1(+KTS)和WT1(-KTS)与颗粒细胞和膜细胞类固醇激素分泌有什么关系,这两种变体在卵泡发育过程中表达模式如何?WT1在家畜方面如何影响卵巢卵泡发育还未见报道。本研究分离牛卵巢不同阶段的有腔卵泡,进行了WT1基因及类固醇生成及相关基因在颗粒细胞和膜细胞中的表达模式研究,进行了WT1基因在卵巢颗粒细胞以及卵泡膜细胞中调控类固醇激素生成的作用的研究,并且进行了PI3K/AKT信号通路和MAPK/ERK信号通路参与WT1基因调控牛卵泡颗粒细胞类固醇激素生成的过程及其作用的研究,研究结果如下:(1)分离健康小(2-4 mm)、中(4-8 mm)、大(>8 mm)卵泡的颗粒细胞和膜细胞,分离健康和闭锁小卵泡的颗粒细胞,检测WT1和类固醇激素生成及相关基因的表达情况以及WT1在颗粒细胞和膜细胞中的定位情况,表明健康小卵泡和中卵泡颗粒细胞中WT1的表达量高于大卵泡颗粒细胞;健康大卵泡膜细胞中WT1表达量高于中卵泡膜细胞,在小卵泡膜细胞中表达量最低;健康卵泡颗粒细胞中WT1的表达量高于闭锁卵泡颗粒细胞;WT1(+KTS)和WT1(-KTS)比例不变。WT1蛋白在颗粒细胞和膜细胞细胞核和细胞质中均有表达,在颗粒细胞中主要在细胞核中表达,在膜细胞中核质均匀表达。健康大卵泡卵泡液中雌二醇和孕酮的含量,颗粒细胞中类固醇生成相关基因CYP19A1、3β-HSD、CYP11A1以及促性腺激素受体LHR、FSHR的mRNA表达量均高于中卵泡和小卵泡,STAR的mRNA表达量低于中卵泡和小卵泡;健康卵泡卵泡液中雌二醇含量高于闭锁卵泡,孕酮含量低于闭锁卵泡,健康卵泡颗粒细胞中CYP19A1和FSHR mRNA表达量高于闭锁卵泡,STAR和3β-HSD mRNA表达量低于闭锁卵泡。(2)选择健康小卵泡的颗粒细胞为体外培养模型,通过WT1下调及WT1变体-KTS和+KTS上调研究对颗粒细胞类固醇激素生成的影响,结果表明,下调WT1促进3β-HSD、LHR mRNA的表达,促进孕酮的分泌;在FSH不存在的条件下,下调WT1抑制CYP19A1 mRNA的表达,抑制雌二醇的分泌。上调WT1(+/-KTS)抑制了颗粒细胞中孕酮和雌二醇的分泌;上调-KTS抑制了CYP19A1、3β-HSD、CYP11A1、FSHR和LHR mRNA的表达,促进了STAR mRNA的表达;上调+KTS抑制了CYP19A1、3β-HSD和LHR mRNA的表达,促进了STAR mRNA的表达;在两种变体中,-KTS作用更加明显。(3)选择健康小卵泡膜细胞为体外培养模型,通过上调膜细胞WT1变体-KTS和+KTS,检测膜细胞类固醇激素生成的影响,表明上调WT1(+/-KTS)抑制孕酮的分泌;上调-KTS抑制3β-HSD、CYP11A1 mRNA的表达,促进STAR和CYP17A1 mRNA的表达;上调+KTS抑制CYP11A1 mRNA的表达,促进STAR和CYP17A1 mRNA的表达;在两种变体中,-KTS作用更加明显。(4)选择健康小卵泡颗粒细胞为体外培养模型,检测WT1下调及WT1变体-KTS上调对下游信号通路的影响。表明上调-KTS促进AKT磷酸化,抑制ERK磷酸化,促进MKP3的表达;下调WT1抑制AKT和ERK的磷酸化,促进MKP3的表达;PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002抑制了STAR和CYP19A1 mRNA的表达,促进了CYP11A1、3β-HSD、MKP3 mRNA的表达和孕酮的分泌;MAPK/ERK信号通路抑制剂U0126促进了STAR、CYP11A1、3β-HSD、CYP19A1 mRNA的表达和孕酮、雌二醇的分泌。综上所述,WT1在卵泡颗粒细胞和膜细胞中均有表达,在卵泡发育和闭锁过程中,颗粒细胞中WT1的表达和类固醇激素生成及相关基因的表达存在相关性。在WT1的两种变体中,-KTS在调控卵泡内类固醇激素生成方面起到了更明显的作用。WT1通过抑制CYP11A1和3β-HSD的表达抑制颗粒细胞和膜细胞孕酮的分泌,在颗粒细胞中WT1通过影响CYP19A1的表达调控雌二醇的分泌,AKT与ERK信号通路参与了该过程。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2019-06-01)

刘卓[8](2019)在《全反式视黄酸对小鼠卵泡颗粒细胞KK-1孕酮合成和分泌的影响》一文中研究指出全反式视黄酸(all-trans-retinoic acid,at RA)是视黄酸的主要活化形式,由视黄醇在酶的作用下脱氢氧化而成,通过与视黄酸受体结合发挥生物学作用。已证实多种组织和器官有at RA合成相关酶和视黄酸受体的表达,at RA的作用不局限于视觉维持,对于细胞增殖和分化、机体生长和胚胎发育十分重要,影响免疫系统、神经系统、消化系统、呼吸系统和生殖系统的功能,并能够预防和治疗癌症。在生殖方面,at RA参与性别决定、精子形成和精子能量代谢,影响卵母细胞成熟、受精和胚胎早期发育等。现有文献表明,卵泡颗粒细胞是卵巢内视黄醇摄取的主要位点,at RA主要在颗粒细胞合成。卵泡颗粒细胞是卵泡结构的组成部分,主要功能为合成分泌激素和细胞因子等,通过参与优势卵泡的选择和卵泡的闭锁来调控卵泡发育。既然颗粒细胞是视黄醇的靶细胞并合成at RA,那么推测at RA可能影响颗粒细胞的功能。本研究以KK-1细胞系为模型,探索了at RA对小鼠卵泡颗粒细胞孕酮合成分泌的影响及作用机制以及at RA对小鼠卵泡颗粒细胞m RNAs和mi RNAs表达图谱的影响。主要研究内容和结果如下:1.小鼠卵泡颗粒细胞KK-1中视黄醇摄取转运、视黄酸合成相关基因及视黄酸受体的表达用q PCR检测KK-1细胞中视黄醇摄取转运相关蛋白STRA6、CRBP1、CRBP2,视黄酸合成相关酶ADH1、ADH2、ADH7、ALDH1A1、ALDH1A2、ALDH1A3,视黄酸受体RARα、RARβ、RARγm RNA的相对表达量。结果显示,以上m RNA均在KK-1细胞中表达。2.at RA对小鼠卵泡颗粒细胞KK-1孕酮合成和分泌的影响使用不同浓度的atRA(0μM、0.01μM、0.1μM、1μM、10μM、30μM)处理KK-1细胞6h、12h、18h、24h,检测at RA对KK-1细胞活力和孕酮合成分泌的影响。结果显示,0.01μM、0.1μM、1μM、10μM的at RA处理KK-1细胞6h、12h、18h、24h均能显着提高细胞活力(P﹤0.05),其中0.1μM、1μM、10μM处理18h效果最佳,叁个浓度间细胞活力无显着差异(P﹥0.05);与对照组相比,用0.1μM和1μM的at RA处理KK-1细胞18h,St AR m RNA表达量显着升高(P﹤0.05);用0.1μM、1μM、10μM at RA处理KK-1细胞6h、12h、18h、24h均能显着提高St AR蛋白表达量(P﹤0.05);0.1μM、1μM、10μM at RA处理KK-1细胞6h、12h、18h、24h,孕酮分泌量显着提高(P﹤0.05)。3.at RA对小鼠卵泡颗粒细胞KK-1 m RNAs和mi RNAs表达图谱的影响使用0.1μM at RA处理KK-1细胞18h,设置空白对照,检测m RNAs和mi RNAs表达图谱的变化并挑选差异表达的m RNA和mi RNA进行q PCR验证。m RNA测序结果显示,与对照组相比,at RA处理组有569个基因差异表达,其中433个基因上调,136个基因下调;选择表达上调的RARβ、VDR、CYP26B1、CD36、Paqr7、AK5和表达下调的BMP4、Ass1、Id1、Ssc5、Tle6、Nos2进行q PCR验证,结果与测序结果相符;mi RNA测序结果显示,与对照组相比,at RA处理组有81个mi RNA差异表达,其中上调34个,下调47个,选择表达下调的mi RNA-6900-5p、mi RNA-181c-3p、mi RNA-6945-3p、mi RNA-3109-5p进行q PCR验证,结果与测序结果相符。4.at RA通过c AMP-PKA-CREB通路对小鼠卵泡颗粒细胞KK-1孕酮合成分泌的影响利用at RA、c AMP激活剂(forskolin)和PKA抑制剂(H-89)处理KK-1细胞,检测CREB磷酸化水平及对孕酮合成分泌的影响。结果表明,与对照组相比,添加at RA、forskolin、at RA+forskolin显着提高CREB的磷酸化水平(P﹤0.05),而添加H-89、at RA+H-89显着降低了CREB的磷酸化水平(P﹤0.05);at RA、forskolin、at RA+forskolin显着提高St AR m RNA的水平(P﹤0.05),H-89,at RA+H-89显着降低了St AR m RNA的水平(P﹤0.05);forskolin、at RA+forskolin显着提高CYP11A1 m RNA的水平(P﹤0.05),H-89、at RA+H-89显着降低了CYP11A1 m RNA的水平(P﹤0.05);forskolin、at RA+forskolin极显着提高St AR蛋白水平(P﹤0.01),H-89、at RA+H-89显着降低了St AR蛋白水平(P﹤0.05);at RA、forskolin、at RA+forskolin极显着提高CYP11A1蛋白的水平(P﹤0.01),H-89,at RA+H-89显着降低了CYP11A1蛋白的水平(P﹤0.05);at RA、forskolin、at RA+forskolin极显着提高孕酮分泌水平(P﹤0.01),H-89、at RA+H-89显着降低了孕酮分泌水平(P﹤0.05)。5.at RA通过RAR对小鼠卵泡颗粒细胞KK-1孕酮合成分泌的影响用at RA、RAR拮抗剂(AGN193109)处理KK-1细胞,检测对孕酮合成分泌和CREB的磷酸化水平的影响。结果显示,与对照组相比,添加AGN193109、at RA+AGN193109显着降低St AR m RNA水平(P﹤0.05),添加at RA、AGN193109、at RA+AGN193109极显着降低CYP11A1 m RNA水平(P﹤0.01);添加AGN193109组、at RA+AGN193109组St AR和CYP11A1蛋白水平极显着降低(P﹤0.01);添加at RA组孕酮分泌水平极显着升高(P﹤0.01),而添加AGN193109组、at RA+AGN193109组孕酮分泌水平极显着降低(P﹤0.01);添加at RA组CREB磷酸化水平显着升高(P﹤0.05),而添加AGN193109、at RA+AGN193109组CREB磷酸化水平极显着降低(P﹤0.01)。综上所述,在小鼠卵泡颗粒细胞KK-1中,有视黄酸合成事件发生;at RA通过与RAR结合,激活c AMP-PKA-CREB通路,影响St AR和CYP11A1的表达,进而影响小鼠卵泡颗粒细胞KK-1孕酮的合成与分泌;at RA改变小鼠卵泡颗粒细胞KK-1中m RNAs和mi RNAs的表达图谱。(本文来源于《吉林大学》期刊2019-06-01)

饶家辉[9](2019)在《RBP-4通过miRNAs影响猪卵泡颗粒细胞增殖的研究》一文中研究指出RBP-4是一个新发现的脂肪因子,在体内广泛分布。大量研究显示:肥胖、Ⅱ型糖尿病、胰岛素抵抗等一系列代谢疾病与RBP-4的表达相关。在卵泡囊肿、PCOS、妊娠期糖尿病、妊娠期高血压疾病、胚胎发育异常等生殖相关疾病的发生过程中RBP-4也发挥着重要作用。目前,有关RBP-4的研究主要聚焦在生理变化和机体显性疾病上,而它与繁殖性能、卵泡发育、促性腺激素的关联,特别是猪卵泡颗粒细胞中RBP-4下游调节表达分子,如miRNAs以及其信号通路和调控网络等几乎没有涉猎。为了阐明这些问题,我们做了如下研究。一是采用免疫组化实验来定位卵泡颗粒细胞中的RBP-4蛋白。实验结果表明,猪卵泡液中存在大量的RBP-4,由颗粒细胞大量表达,卵泡内膜细胞也有表达,但卵母细胞不表达。用PCR对分离的内膜细胞、颗粒细胞和卵母细胞进行检验,结果与其一致。把猪卵巢卵泡按大卵泡(8~12 mm)(n=3),中卵泡(5~7 mm)(n=3)和小卵泡(2~4 mm)(n=3)分成叁组,用qRT-PCR检测RBP-4的mRNA水平。结果表明,大卵泡组和小卵泡组、中卵泡组之间的RBP-4的mRNA表达量有显着差异(P<0.01)。中卵泡组和小卵泡组之间的差异不明显(P>0.05)。分别提取不同大小卵泡中卵泡液蛋白,采用Western blotting的方法检测RBP-4水平,结果显示:随着卵泡体积的增大,蛋白表达升高,但中等大小卵泡和小卵泡两组之间的蛋白表达差异不明显。这些结果表明:猪卵泡RBP-4主要由颗粒细胞产生,随着卵泡的发育,RBP-4的含量会随之增加。当RBP-4浓度为10 ng/mL时,促进颗粒细胞生长,但高浓度RBP-4(≥100 ng/mL)则会抑制颗粒细胞增殖。二是用FSH、LH处理原代培养的猪卵泡颗粒细胞24 h后,用qRT-PCR检测RBP-4的mRNA水平。按0.5 IU/mL、2 IU/mL、4 IU/mL、8 IU/mL、32 IU/mL5个梯度分别外源增加FSH、LH。当FSH浓度达到4 IU/mL,LH浓度达到2 IU/mL时,颗粒细胞中RBP-4的表达最高,即使浓度达到32 IU/mL,RBP-4的表达也不再增加。又分别用10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL叁个浓度梯度的RBP-4处理大中小叁组卵泡颗粒细胞,用Western blotting检测FSHR、LHR表达变化。结果表明:从10 ng/mL到50 ng/mL时,差异显着,FSHR、LHR表达量显着增加;当继续增加到100 ng/mL时,无增加。这表明RBP-4与促性腺激素具有相互作用,二者协同促进颗粒细胞生长。叁是用猪RBP-4基因慢病毒载体转染颗粒细胞过表达RBP-4,提取总RNA进行microRNAs测序。用生物信息学软件进行分析。结果显示:猪卵泡颗粒细胞差异表达miRNAs共81个,其中上调39个,下调42个。挑选与细胞生长功能调节相关差异miRNAs:ssc-miR-148a-5p_R1-21L22、ssc-miR-142-3p_R2-22L22、mmu-miR-1927_R1-15L23、efu-miR-423-9A-G、ssc-miR-193a-3p、bta-miR-149-3p等6个基因进行验证,其中ssc-miR-193a-3p、bta-miR-149-3p、ssc-miR-148a-5p_R1-21L22下调,efu-miR-423-9A-G、ssc-miR-142-3p_R2-22L22、mmu-miR-1927_R1-15L23上调,与miRNAs高通量测序结果相一致。挑选下调的ssc-miR-193a-3p,采用流式细胞技术和qRT-PCR对其功能进行验证。结果表明:转染mimic后抑制细胞增殖,转染inhibitor后促进细胞增殖,细胞周期实验结果与其一致。选取四个基因进行定量分析,其中两个类固醇合成基因CYP19a1、HSD3β,转染mimic后其mRNA表达下调,转染inhibitor后上调。两个增殖基因PCNA、CCNB1,转染mimic后mRNA表达下调,转染inhibitor后上调。这些实验表明,miR-193a能调节卵泡颗粒细胞增殖和类固醇激素合成。RBP-4通过调节miRNAs的表达影响颗粒细胞功能。综上所述,猪卵泡中RBP-4主要在颗粒细胞和内膜细胞表达,RBP-4与促性腺激素有相互促进作用。低浓度RBP-4促进颗粒细胞增殖,高浓度的RBP-4抑制颗粒细胞增殖。RBP-4能通过调节miRNAs表达影响卵泡颗粒细胞增殖和类固醇激素合成。(本文来源于《吉林大学》期刊2019-06-01)

文冬梅[10](2019)在《E_2与FSH对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖和凋亡的影响》一文中研究指出卵泡发育主要是卵泡颗粒细胞(GCs)和内膜细胞(TCs)增殖的结果,卵泡颗粒细胞和内膜细胞的增殖主要依赖于雌二醇(E2)和促卵泡素(FSH)的共同作用。水牛的繁殖率低,超数排卵效果一直很不理想。为提高水牛的超数排卵效果,本研究探讨了E2和FSH对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖和凋亡的影响,以便为建立水牛超数排卵的技术方法奠定理论依据。研究取得结果如下:1.不同浓度FSH对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖的影响采用FSH(0、2、8、14、20、26μg/mL)处理水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞24 h后,检测细胞的增殖情况,结果显示:14、20、26 μg/mL组的细胞增殖水平显着高于对照组、2μg/mL和8μg/mL组(p<0.05),而14、20、26μg/mL叁组间无显着差异(p>0.05)。2.E2和FSH联合作用对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖的影响不同浓度的E2(0、0.5、1、2、4ng/mL)联合FSH(14μg/mL)分别处理水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞24h,E2=0ng/mL、FSH=00μg/mL为对照组,检测细胞的增殖情况,结果发现:E2(1 ng/mL)+FSH组的颗粒细胞增殖水平显着高于对照组、FSH(14 μg/mL)单独处理组和E2(0.5 ng/mL)+FSH组(p<0.05);而E2(1 ng/mL)+FSH组的内膜细胞增殖水平显着高于其余各组(p<0.05)。因此,以下所有试验主要以E2=0ng/mL、FSH=0 μg/mL为对照组,分别对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞进行FSH(14μg/mL)单独处理和E2(1 ng/mL)+FSH(14 μg/mL)联合处理。3.E2和FSH联合作用对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞凋亡的影响24小时后,检测细胞凋亡情况,结果显示:E2+FSH联合处理组的细胞死亡率和早期凋亡率显着低于FSH单独处理组和对照组(p<0.05),而存活率显着高于FSH单独处理组和对照组(p<0.05)。4.E2和FSH联合作用对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞受体基因表达的影响24小时后,检测受体基因的表达情况,结果显示:E2+FSH联合处理组细胞中FSHR、LHR的mRNA表达量显着高于对照组和FSH单独处理组;而颗粒细胞中ER-β的mRNA表达量显着低于对照组(p<0.05),但与FSH单独处理组无显着差异(p>0.05);内膜细胞中ER-β的mRNA表达量显着低于对照组和FSH单独处理组(p<0.05)。5.E2和FSH联合作用对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖基因表达的影响24小时后,检测细胞增殖基因的表达情况,结果显示:E2+FSH联合处理组细胞中PCNA、Cyclin D1、Cyclin D2的mRNA表达量显着高于对照组和FSH单独处理组(p<0.05)。6.E2和FSH联合作用对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞凋亡基因表达的影响24小时后,检测凋亡基因的表达情况,结果显示:E2+FSH联合处理组水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞中Bcl-2的mRNA表达量显着高于对照组和FSH单独处理组,且Bax、Caspase-3和Caspase-9的mRNA表达量显着低于对照组(p<0.05)。以上结果表明,FSH(14 μg/mL)或E2(1 ng/mL)+FSH(14 μg/mL)联合作用均能够促进水牛GC和TC的增殖,并抑制细胞凋亡,但E2+FSH联合作用的效果优于FSH单独处理。E2+FSH的联合作用可能是通过提高激素受体FSHR、LHR mRNA的表达,抑制ER-β mRNA的表达,提高了水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞对FSH和LH的应答能力,从而促进增殖基因PCNA、Cyclin D1、Cyclin D2和凋亡抑制基因Bcl-2的表达,抑制促凋亡基因Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达,最终促进水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖,且抑制细胞的凋亡。因此,在应用FSH对水牛进行超数排卵处理时,注射E2将有望提高水牛的超数排卵效果。(本文来源于《广西大学》期刊2019-06-01)

卵泡颗粒细胞论文开题报告

(1)论文研究背景及目的

此处内容要求:

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例:

随着卵巢卵泡的生长,卵泡内雌激素分泌量逐渐上升,雌激素通过其受体(Estrogen Receptors,Esrs)对卵泡的调节作用也在发生改变。该研究通过手术法获取牛卵巢上不同直径的卵泡颗粒细胞,对颗粒细胞中雌激素受体及相关基因表达进行研究。结果表明:Esr1和Esr2都能在牛卵泡颗粒细胞中表达,且随着卵泡的生长而显着下降(P<0.05);Fshr的表达随着卵泡的生长而显着上升(P<0.05),但在中、大型卵泡颗粒细胞中差异不显着(P>0.05);Lhr在大型卵泡颗粒细胞中的表达量极显着高于小、中型卵泡(P<0.01);随着卵泡的生长,Cox2在颗粒细胞中的表达显着上升(P<0.05),而Hsd17b1的表达则显着下降(P<0.05)。综上所述,随着卵泡生长,卵泡颗粒细胞对Esr1、Esr2作用的依赖性逐渐减弱;大卵泡在排卵前Lhr表达量急剧上升,同时诱导Cox2表达量显着上升而Hsd17b1表达量显着下降,表明大卵泡已启动排卵反应。

(2)本文研究方法

调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

卵泡颗粒细胞论文参考文献

[1].凌英会,朱露,吴昊,陈青,权青.山羊FST慢病毒载体构建及其对卵巢卵泡颗粒细胞增殖的影响[J].畜牧兽医学报.2019

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[3].郭云霞,郝庆红,张英杰,刘月琴.绵羊卵泡期卵泡颗粒细胞FSHR差异剪接体的表达[J].中国兽医学报.2019

[4].李振淼,李文.miR-383通过下调细胞周期相关蛋白的表达抑制小鼠卵泡颗粒细胞的增殖[J].细胞与分子免疫学杂志.2019

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[8].刘卓.全反式视黄酸对小鼠卵泡颗粒细胞KK-1孕酮合成和分泌的影响[D].吉林大学.2019

[9].饶家辉.RBP-4通过miRNAs影响猪卵泡颗粒细胞增殖的研究[D].吉林大学.2019

[10].文冬梅.E_2与FSH对水牛卵泡颗粒细胞/内膜细胞增殖和凋亡的影响[D].广西大学.2019

论文知识图

甾体化合物结构式凋亡信号途径示意图通过调节P450c17裂解酶活性调...鹅卵泡颗粒细胞鉴定结果(100×...小鼠ZP2 mRNA在各级卵泡颗粒细胞1 卵泡颗粒细胞凋亡的荧光观察 (...

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卵泡颗粒细胞论文_凌英会,朱露,吴昊,陈青,权青
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