俞进, 林康, 楼宜嘉[1]2003年在《α-甘草酸对豚鼠肾11β-羟基类固醇脱氢酶活性的影响》文中指出目的 探讨α 甘草酸对豚鼠肾脏 11β 羟基类固醇脱氢酶 (11β OHSD2 )的抑制作用。方法 运用微粒体酶分析技术 ,观察α 甘草酸减小微粒体酶对底物皮质醇的转化率 ,并测定酶的动力学常数。结果 α 甘草酸能够减小微粒体酶对底物皮质醇的转化率 ,和阴性对照、β 甘草酸相比 ,差异均有显着性意义 ;动力学常数Vmax=15 .2 5nmol/mg .h ,Km=1.31μmol/L ,Ki=(2 0 9.2± 17.1) μmol/L。 结论 α 甘草酸能够抑制豚鼠肾脏 11β OHSD2 ,但和 β 甘草酸相比 ,作用较弱
俞进[2]2003年在《α-甘草酸对豚鼠肾11β-羟基类固醇脱氢酶活性的影响》文中指出β-甘草酸(18β-glycyrrhizic acid,β-GA)是甘草的主要活性成分，具有抗炎、抗病毒和抗过敏反应等作用，已知其能够抑制肾脏11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-OHSD_2)。α-甘草酸(18α-glycyrrhizic acid,α-GA)是由β-GA经异构化反应而得到的，比β-GA具有更强的保肝抗炎作用，在临床应用时，可见高血压等不良反应，其机制迄今未明。为论证α-GA是否也能降低11β-OHSD_2的活性，揭示其临床应用时出现高血压等不良反应的机制，本研究采用豚鼠离体和整体实验，研究α-GA对11β-OHSD_2的抑制作用，旨在为临床合理用药提供依据。 1．α-GA对离体11β-OHSD_2的抑制作用。 取花豚鼠肾脏皮质，制成匀浆液并提取微粒体酶11β-OHSD_2，加入底物皮质醇进行反应，以底物皮质醇转化为可的松的百分率为指标，研究了α-GA对11β-OHSD_2的抑制作用。结果表明：(1)肾皮质匀浆物阴性对照组皮质醇的转化率为99％；α、β-GA浓度＜0.8mmol／L时，皮质醇的转化率均＞96％；浓度为1.6mol／L时，α、β-GA组的皮质醇转化率分别为98.55％和90.51％；浓度上升至3.2mmol／L时，皮质醇的转化率分别降为62.59％和38.64％。α、β-GA对11β-OHSD_2的抑制作用呈浓度相关性。(2)GA浓度为0.8、0.4、0.2mmol／L时，11β-OHSD_2对皮质醇转化率(％)α、β-GA组分别为38.99±0.85，21.08±1.5(n=3)：53.37±0.63，33.09±0.19(n=3)；60.41±0.86，44.67±0.33(n=3)。和阴性对照组的转化率(％)70.56±3.03(n=3)比较，皮质醇转化率的减小均有显着性意义(P＜0.05)；计算出α、β-GA的IC_(50)值分别为1140.1 p mol/L，346.4pmol/L，说明a一GA抑制豚鼠肾11p代川SDZ的强度小于p{A。(3)制备叁批花豚鼠肾皮质11日一OHSDZ悬液，每批各进行叁次实验，其皮质醉转化率平均值阴性对照组、Q一GA组、p一GA组分别为70.56%士3.03%、38.9喘士0.85%、21.0既士1.5俄;70.9器士4.6既、38.器士2.2既、21.55%士1.38%;71.80%士2.33%、38.80%士1.9既、21.5既士1.61%。叁批酶之间相应平均值经两两脸验，均无显着性差异(乃0.05):同一批酶各组之间比较，均有显着性差异(只0.05)。提示Q一GA能够抑制离体Hp一OHS山的活性，但强度比p一GA弱。2.11p一OHs加动力学参数测定 取花豚鼠肾皮质微粒体酶H日一OHSDZ，在4个底物浓度时，均加入5个不同浓度a一GA，测定可的松的生成速度，根据MichaeliS一Menten的双倒数方程，求出1 lp一OHSDZ动力学参数。结果:在不同的底物浓度时，a一GA对微粒体酶的抑制作用由双倒数法作图表示，各条直线在Y轴上交于一点，显示Q esGA的竞争性抑制作用;求出吃户15.25 nmol.mg一‘.h一，，龙==l .31p伽1/L。根据Dixon方程，求出尤== 209.2 p mol/L士1 7.1协mol/L。3.花白两种豚鼠np一OHSDZ体外活性的差异 取花、白两种豚鼠，体重相近，同时提取肾皮质微粒体酶np一OHSDZ，加入底物皮质醉进行平行实验，抑制剂选用Q、p一GA，a一甘草次酸，大黄素。结果表明，皮质醉转化率(%)花鼠/白鼠，阴性对照组:70.56士3.03/70.37士1 .42(乃0.05)，a一GA组:38.99士0.85/30.01土1.53(只0.05)，p一GA组:21.08士1.50/16.50士1.15(只0.05，n=3)。说明a、p弓A对白豚鼠11p一OHSDZ的抑制作用强于花豚鼠。a一甘草次酸，大黄素为抑制剂的实验结果与此一致。提示白豚鼠肾脏微粒体酶1 lp一OHSDZ对抑制剂的敏感性明显强于花豚鼠。4.a一以对整体豚鼠1 lp一OHsDZ活性的抑制作用取雄性白色豚鼠，分组，分别腹腔注射生理盐水(SN)，a弓A(75、巧O、300mg/Kg叁个剂量组)和p‘A，连续15日;收集第15天的豚鼠尿液，用高效液相测定其中的可的松(E)含量及可的松/皮质醇(E/F)的比值;第16日取豚鼠血，侧定血清钾离子浓度:取肾皮质，提取微粒体酶1 lp刃HSDZ，测定其活性。结果表明，(l)第巧天尿中，E值:SN/。一GA(75.9/Kg)，一以(75，g/Kg)/a弓A(3(X)。g/Kg)，a一GA(300 mg/Kg)/p一GA(30Om酬Kg)，均有显着性差异(只0.05);E/F值:。一GA(300 mg/Kg)/p‘A(300 mg/Kg)，。一GA(150 mg/Kg)/a一GA(300 mg/Kg)，均有显着性差异(只0.05):(2)肾皮质微粒体酶11日一OHSDZ的活性测定以皮质醇的转化率为指标:和SN组比较，除Q一GA(75mg/Kg)组外，其余组均有显着性差异(只0.05);和p一GA(300 mg/Kg)组比较，各组均有显着性差异(只0.05)。(3)豚鼠血中钾离子浓度，除SN/a弓A(75 mg/Kg)外，其余各组之间均差异显着(代0.05)。提示a一GA能够抑制整体豚鼠肾皮质np一OHSDZ的活性，引起低血钾，尿中可的松含量和可的松/皮质醇比值降低。 综上所述，a一GA能够抑制豚鼠在体和离体的肾皮质1 1 p se0HSDZ活性，降低11p一OHSDZ对皮质醇的转化率，引起低血钾，降低豚鼠尿中可的松含量和可的松/皮质醇比值。Q seGA对np一OHSDZ活性的抑制作用比p弓A弱。白豚鼠肾皮质11p刃HS玩对抑制剂的敏感性明显高于花豚鼠。
参考文献：
[1]. α-甘草酸对豚鼠肾11β-羟基类固醇脱氢酶活性的影响[J]. 俞进, 林康, 楼宜嘉. 中国现代应用药学. 2003
[2]. α-甘草酸对豚鼠肾11β-羟基类固醇脱氢酶活性的影响[D]. 俞进. 浙江大学. 2003