弓背青鳉胚胎和性腺发育的观察

论文摘要

青鳉属鱼类具有体型小巧、繁殖力强、繁殖周期短、产卵量大、可连续产卵等特点,且由于胚胎发育早期对水质变化敏感,被广泛地应用于发育生物学、分子生物学以及毒理学等研究领域。弓背青鳉（Oryzias curvinotus）在我国广东沿海广泛分布,通过调查发现,其对栖息水域的盐度波动的适应力强,具有开发为环境监测的潜力。鉴于目前对弓背青鳉的基础研究不足,开展如下研究:一、对弓背青鳉胚胎发育做了连续的观察;二、用连续切片技术对弓背青鳉不同发育阶段的组织进行染色观察,获得其雌、雄性腺发育资料;三、通过显微注射技术对原生殖细胞进行活体标记和示踪观察。主要结果如下:1、弓背青鳉胚胎在26℃历时1012天出膜,遵循硬骨鱼发育模型,共经历8个时期;根据各时期形态特征的变化,如胚盘的形成,体节的数量,器官的发生,胚体的大小和运动等,可进一步细分为35个阶段。自发荧光开始出现于12肌节期,由虹彩细胞团内的嘌呤类物质在激发光下产生,主要分布于脑与脊索上方。2、弓背青鳉从出膜到性成熟历时23个月。出膜后510天,性腺分化,雌雄性腺出现结构上的差异。弓背青鳉雌性个体的性腺发育早于雄性个体,根据卵巢组织学分析,其产卵类型属于不同步连续产卵性。3、本研究对弓背青鳉与日本青鳉vasa基因的序列比对分析,发现3’-UTR区一致性达到86%,具有较高的相似性,并利用已经构建成功的日本青鳉vasa基因重组质粒,成功标记了近源种弓背青鳉的原生殖细胞。本研究完整记录了弓背青鳉早期胚胎发育,雌、雄性生殖腺发育及卵子和精子的发生过程,为弓背青鳉种质资源保护和繁殖都具有重要的意义,对于生态保护也有一定的意义。

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摘要

Abstract

1 文献综述

1.1 鱼类胚胎发育和应用的研究进展

1.1.1 胚胎发育早期的发育阶段特点

1.1.2 鱼类胚胎应用

1.2 硬骨鱼类性腺的分化研究进展

1.2.1 性腺分化及分化类型

1.2.2 配子的发生

1.3 原生殖细胞的研究进展

1.3.1 鱼类PGCs的起源

1.3.2 鱼类PGCs形态组织学

1.3.3 原生殖细胞PGC迁移

1.3.4 PGCs的可视化

1.4 弓背青鳉生物学特性

1.4.1 形态与分类

1.4.2 生长和繁殖

1.4.3 野生弓背青鳉的生态环境

1.5 研究目的和意义

2 弓背青鳉胚胎发育及自发荧光的观察

2.1 材料与方法

2.1.1 弓背青鳉的饲养管理与鱼卵收集

2.1.2 实验器材与实验仪器

2.1.3 胚胎发育观察

2.2 结果

2.2.1 胚胎发育过程

2.2.2 自发荧光

2.3 讨论

2.3.1 受精卵油球

2.3.2 Kupffer’s囊

2.3.3 出膜方式

2.3.4 色素细胞

3 弓背青鳉的性腺发育

3.1 材料与方法

3.1.1 鱼苗培育

3.1.2 实验样品收集

3.1.3 实验试剂与器材

3.1.4 实验仪器

3.1.5 石蜡切片制作与观察

3.2 结果

3.2.1 卵巢分化

3.2.2 精巢分化

3.2.3 成熟的性腺

3.3 讨论

3.3.1 弓背青鳉性腺的不对称性

3.3.2 产卵类型

3.3.3 生殖包囊

3.3.4 卵巢腔的形成

4 弓背青鳉原生殖细胞的活体标记

4.1 实验材料与方法

4.1.1 胚胎收集

4.1.2 实验试剂与器材

4.1.3 实验仪器

4.1.4 序列分析

4.1.5 质粒（pVASpf）提取

4.1.6 显微注射

4.2 结果

4.2.1 序列比对

4.2.2 vasa基因示踪结果

4.3 讨论

4.3.1 序列分析

4.3.2 vasa基因是PGC发育后期相关的

4.3.3 vasa基因的功能及弓背青鳉原生殖细胞的起源

5 结论与展望

5.1 结论

5.2 展望

参考文献

致谢

作者简介

导师简介

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 张海瑞

导师: 王中铎

关键词: 弓背青鳉,胚胎发育,性腺发育,原生殖细胞,基因活体标记

来源: 广东海洋大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学,生物学

单位: 广东海洋大学

分类号: Q953

DOI: 10.27788/d.cnki.ggdhy.2019.000047

总页数: 47

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