乳酸脱氢酶与葡萄糖脱氢酶偶联催化合成D-苯基乳酸

乳酸脱氢酶与葡萄糖脱氢酶偶联催化合成D-苯基乳酸

论文摘要

D-苯基乳酸(D-phenyllactic acid,D-PLH)是一种理想的天然防腐剂,具有广谱抗菌活性。实验构建了1株乳酸脱氢酶重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET28a-ldh,并对其诱导表达条件进行了优化。在最优条件下(当OD600值达到0.8时,添加乳糖8 g/L,在28℃下诱导8 h),重组乳酸脱氢酶比酶活达到298.8 U/g(干菌体)。建立了乳酸脱氢酶和葡萄糖脱氢酶双酶偶联催化体系,并应用于苯丙酮酸钠还原生成D-苯基乳酸。对反应条件,包括温度、pH值、两重组菌质量比和葡萄糖浓度进行了优化,在最优反应条件下,D-苯基乳酸累积质量浓度达到18.03 g/L,时空产率为162.27 g/(L·d),ee>99%。双酶耦联催化体系是D-苯基乳酸合成的有效工具,显示了良好的应用前景。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料与试剂
  •   1.2 仪器与设备
  •   1.3 乳酸脱氢酶基因克隆
  •   1.4 乳酸脱氢酶重组基因工程菌的构建
  •   1.5 乳酸脱氢酶重组菌诱导表达条件优化
  •   1.6 乳酸脱氢酶/葡萄糖脱氢酶偶联催化体系的构建与反应条件的优化
  •   1.7 双酶耦联催化反应时间进程
  •   1.8 液相检测方法
  •   1.9 ee计算方法
  • 2 结果与分析
  •   2.1 乳酸脱氢酶重组工程菌的构建
  •   2.2 乳酸脱氢酶重组菌表达条件优化
  •   2.3 LDH/GDH偶联催化体系的构建与催化条件优化
  •     2.3.1 pH值对还原反应的影响
  •     2.3.2 温度对还原反应的影响
  •     2.3.3 LDH与GDH重组菌细胞质量比对还原反应的影响
  •     2.3.4 葡萄糖质量浓度对还原反应的影响
  •   2.4 LDH/GDH双酶耦联催化反应时间进程
  • 3 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 罗希,杨泽锋,臧瑜,李宁,王鑫情,付永前

    关键词: 苯基乳酸,乳酸脱氢酶,双酶偶联催化,不对称还原

    来源: 食品与发酵工业 2019年07期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

    专业: 生物学,轻工业手工业

    单位: 台州学院生物质资源研究所

    基金: 浙江省自然科学基金青年项目(LQ19B060003),台州学院培育项目(2017PY035)

    分类号: TS201.3

    DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.019374

    页码: 22-28

    总页数: 7

    文件大小: 2434K

    下载量: 163

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