啤酒腐败菌耐乙酸乳杆菌种特异性检测体系的建立与应用

啤酒腐败菌耐乙酸乳杆菌种特异性检测体系的建立与应用

论文摘要

以耐乙酸乳杆菌的3个特异性基因为靶标,设计并优化了3对耐乙酸乳杆菌的特异性引物,建立了基于SYBR GREEN实时荧光定量PCR的耐乙酸乳杆菌定性定量检测的标准检测(standard operation procedure,SOP)方法。利用耐乙酸乳杆菌CN247的基因组DNA作为标准品绘制了标准曲线,实现了对耐乙酸乳杆菌的定量检测,耐乙酸乳杆菌的最低检测限可达100 CFU/m L,精度可达10 CFU/m L。大生产样品在培养基中富集培养48 h后即可满足检测的要求,检出率为100%,整个检测时间控制在3 d以内,满足了啤酒企业对出厂产品快速检测的质量控制要求。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 仪器与材料
  •   1.2 本研究中使用的菌株
  •   1.3 引物设计与验证
  •     1.3.1 耐乙酸乳杆菌特异性基因的筛选与引物设计
  •     1.3.2 引物设计
  •   1.4 扩增体系与反应条件
  •   1.5 耐乙酸乳杆菌定性检测
  •     1.5.1 引物特异性验证
  •     1.5.2 混合菌中耐乙酸乳杆菌的定性检测
  •     1.5.3 同种属耐乙酸乳杆菌的检测
  •   1.6 耐乙酸乳杆菌特异性探针的定量检测
  •   1.7 耐乙酸乳杆菌特异性探针的最低检出限
  •   1.8 耐乙酸乳杆菌特异性引物检测实际样品
  • 2 结果与分析
  •   2.1 特异性引物筛选和定性检测
  •     2.1.1 耐乙酸特异性引物的筛选
  •     2.1.2 耐乙酸乳杆菌特异性引物定性检测单一DNA模板的结果
  •     2.1.3 耐乙酸乳杆菌特异性引物定性检测混合DNA模板
  •     2.1.4 耐乙酸乳杆菌特异性引物定性检测同种属其他耐乙酸乳杆菌
  •   2.2 定量检测结果
  •     2.2.1 耐乙酸乳杆菌DNA标准曲线的建立
  •     2.2.2 标曲的重复性和再现性验证
  •     2.2.3 耐乙酸乳杆菌的最低检出限
  •   2.3 实际样品的检测
  • 3 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 曹伟华,罗娜,孙义玄,涂京霞,刘静,王德良,郝建秦,栾春光,包怡红

    关键词: 耐乙酸乳杆菌,特异性引物,定性定量检测,标准检测方法

    来源: 食品与发酵工业 2019年21期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑

    专业: 轻工业手工业

    单位: 东北林业大学林学院,中国食品发酵工业研究院有限公司,广州南沙珠江啤酒有限公司

    基金: 广州市科技计划项目珠江科技新星专项(201610010183),北京市科技新星计划(Z181100006218004)

    分类号: TS262.5

    DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.022197

    页码: 53-59

    总页数: 7

    文件大小: 1805K

    下载量: 78

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