导读:本文包含了气液界面培养论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:界面,上皮细胞,气管,纤毛,柱状,细胞培养,羊膜。
气液界面培养论文文献综述
陈思,肖华,张伟,孔晨,陈长明[1]（2019）在《小鼠气管–支气管上皮细胞的气–液界面培养》一文中研究指出目的建立一种小鼠气管–支气管上皮细胞气–液界面(ALI)培养及纤毛摆动频率测量的方法,最大程度还原气道上皮的生理功能。方法利用1 mg/mLⅪⅤ型链蛋白酶冷消化的方法获取BALB/c小鼠气管–支气管上皮细胞,筛选出最佳消化时长以保证所得细胞的数量及活力。差速贴壁法去除成纤维细胞后,接种于Ⅰ型鼠尾胶原预包被的Transwell小室,用不同培养基进行增殖期和ALI分化期培养。结果采用链蛋白酶冷消化12 h、14 h和16 h所得细胞数目分别为(1.78±0.33)×10~5、(1.93±0.26)×10~5和(2.01±0.28)×10~5,经台盼蓝染色活细胞率分别为(96.86±0.25)%、(94.73±1.63)%和(86.87±5.95)%。1周左右细胞铺满小室,继续ALI培养2～3周后光学显微镜下可见纤毛节律性摆动,电镜及免疫荧光均证实纤毛结构。培养所得细胞纤毛摆动频率与小鼠气管在体纤毛摆动频率与一致。结论本实验建立的气管–支气管上皮细胞分离、ALI培养及纤毛摆动频率测量体系简便、稳定、高效、可靠,为探索气道疾病的致病和治疗机制创造了基础,亦可为其他物种气道上皮和(或)其他器官上皮的培养提供参考依据。(本文来源于《中国呼吸与危重监护杂志》期刊2019年04期）
李茂中,庞立丽,王宏,金玉,段招军[2]（2016）在《人气管上皮细胞的原代分离及气液界面培养》一文中研究指出目的分离人气管上皮细胞,并进行气液界面(air-liquid interface,ALI)培养,为呼吸道病毒研究提供良好的细胞模型。方法采用低温消化法分离人气管上皮细胞,用预包被胶原的0.4μm Transwell培养皿对传代后的气管上皮细胞进行ALI培养。利用倒置显微镜观察细胞生长状态,免疫细胞化学染色和免疫组化鉴定培养细胞的生长和分化情况,同时测定细胞分化过程中的跨上皮电阻(trans epithelial electrical resistance,TEER)。结果分离培养的气管上皮细胞光镜下细胞形态及免疫荧光角蛋白染色阳性,证实培养细胞为气管上皮细胞。ALI培养后的人气管上皮细胞的形态学、MUC5AC蛋白、Ⅳ型β-微管蛋白(β-tubulinⅣ)的表达及紧密连接和假复层的形成情况均与人气管组织结构类似。结论低温消化法可成功分离到活性高的上皮细胞。ALI培养的上皮细胞形态和功能与体内接近,且能较长时间维持其正常形态及功能,为呼吸道相关疾病的研究提供了理想的平台。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2016年01期）
李茂中[3]（2015）在《呼吸道上皮细胞气液界面培养的研究》一文中研究指出呼吸道上皮细胞的体外培养对离体研究呼吸道的生理功能,呼吸道疾病的致病机制以及诊疗都具有重要意义。气液界面培养技术(air-liquid interface,ALI)是一种将气管、鼻息肉等呼吸道组织上的原代上皮细胞分离后,经传代扩增细胞数量后,再接种到预包被胶原的0.4umTranswell培养皿中进行培养,该培养皿的下层加入分化培养基,而培养皿中的细胞上层则暴露于空气。经过一段时间的ALI培养后,上皮细胞经过分化后就能产生纤毛细胞、杯状细胞、基细胞等多种细胞,并由细胞分泌的粘液覆盖,产生类似于体内生理结构和功能的假复层纤毛柱状上皮组织。目前病毒体外培养和增殖方法主要是应用普通的细胞培养、鸡胚和动物模型。动物模型难以筛选和构建,费时耗力而且涉及各种伦理因素,而鸡胚和细胞培养是一种既方便又有效的病毒培养分离方法。但鸡胚培养仅限于有限的病毒种类的培养和扩增,难以开展病毒生物学特性及致病机制的研究。而普通的细胞培养方式使细胞间缺少细胞外基质,中断细胞间的各种连接限制细胞的分化发育,致使细胞并不能真实的反应体内的真实功能特征,也不具有类似机体内细胞的立体结构,更不像机体器官那样包含有多种类型的细胞,这就严重限制了对于这些致病性病原体的致病机制的研究。此外,很多病毒在普通的这种细胞培养体系中不能或难以生长和培养。ALI培养能够模拟细胞在人体内的生长状态,形成具有类似组织结构和生理功能的假复层柱状上皮,是在模拟人体结构方面细胞培养技术的一次飞跃,克服了上述叁种培养体系分离病毒的缺陷。这一技术对研究和探讨上皮细胞的多种生理功能及在病毒致病机制方面具有最要意义。但该种分离和培养病毒体系的技术要求较高,其研究和推广还处在不断完善和发展的过程。近叁十年来,全球新发和再发传染病不断涌现,对人类健康造成巨大威胁。其中一半以上是由病毒引起,如流感病毒(influenza virus)、人博卡病毒(Human Bocavirus, HBoV)、C组鼻病毒(Human rhinovirus C,HRV-C)、人冠状病毒(Human coronavirus)和人偏肺病毒(human Metaenumovirus,hMPV)等,而部分新发病毒(HBoV、HRV-C,HKU1等)的体外培养分离非常困难,从而限制了对其机制的研究。为了实现HBoV等难培养病毒的体外培养增殖,为呼吸道相关病毒的体外致病机制的研究提供一种更有效的细胞体系,本研究建立了一套完整的呼吸道原代上皮细胞的气液界面培养体系,通过搭建体外上皮细胞ALI培养的技术平台,在体外培养环境下最大程度模拟和再现上皮细胞的体外分化,成功培养出假复层纤毛柱状上皮细胞,形成了标准化的上皮细胞ALI培养技术方案,并实现了人博卡病毒等难培养病毒的体外培养增殖,为新发、现存及潜在难培养病毒的体外分离提供了技术支撑和研究平台。本研究的主要结果和结论如下：1、摸索建立了一套完整的原代呼吸道上皮细胞ALI培养方案,体外成功培养获得具有类似组织结构和生理功能的假复层呼吸道柱状上皮细胞。主要包括：(1)建立了适用于ALI培养的原代呼吸道上皮细胞的分离培养方案。体外成功分离和培养(传代)小鼠、猪和人的呼吸道上皮原代细胞,经细胞形态及免疫荧光染色鉴定证实。(2)建立了原代呼吸道上皮细胞ALI培养方案。通过比较不同培养基的培养效果,并进行了多个指标的鉴定后证实本实验ALI培养后的呼吸道上皮细胞的形态学,MUC5AC蛋白,IV型p-微管蛋白(β-tubulinIV),闭合小环蛋白-1(Zona occludens-1)的表达及紧密连接和假复层的形成情况都与气管组织结构类似。2、应用ALI培养的呼吸道上皮细胞成功实现了多种呼吸道病毒的培养和增殖,为深入开展致病机制研究奠定了基础。主要包括：(1)多种病毒实现增殖。在ALI培养的呼吸道上皮细胞接种阳性病毒标本后,包括流感病毒、腺病毒、hMPV和HBoV,荧光定量PCR检测结果显示所有病毒均有良好的增殖效果。(2)细胞接种病毒后出现了明显的免疫反应。细胞因子和趋化因子的测定和分析结果显示,ALI培养的呼吸道上皮细胞接种博卡病毒后多种细胞因子和趋化因子都有升高,包括IL-6、IL-8、IP-10、TNF-α和CCL5。在感染120h时和对照组比较IL-6、IP-10和CCL5的升高最为明显。IL-1β和MIP-1b未反映出变化。综上所述,我们成功建立了叁种动物类型(小鼠、猪和人类)的呼吸道上皮细胞的原代分离培养及ALI培养方案,并利用培养分化的假复层纤毛柱状上皮细胞实现了多种呼吸道病毒的体外培养,为难培养呼吸道病毒的体外细胞培养提供了技术平台,为深入开展呼吸道病毒致病机制的研究奠定了基础。(本文来源于《中国疾病预防控制中心》期刊2015-06-01）
吴丹,管东波,宋宏[4]（2013）在《支气管上皮细胞气液界面暴露培养在环境毒理学研究中的应用》一文中研究指出在气体污染物的体外细胞暴露研究中,由于缺乏合适的气态污染物体外暴露系统,传统的细胞培养方法又无法直接暴露支气管上皮细胞于气态污染物,所以目前国内外关于气态污染物对气道上皮以及肺上皮细胞的体外毒性研究很少。近年来气液界面培养被逐渐用于气态污染物体外毒性研究,气液界面培养系统提供的细胞生长环境与上皮细胞的体内生理条件相(本文来源于《毒理学杂志》期刊2013年02期）
高元妹,徐军[5]（2008）在《小鼠气管上皮细胞的气液相界面培养》一文中研究指出目的通过气液相界面培养将小鼠气管上皮细胞诱导分化成具有纤毛和黏液分泌功能的上皮细胞,从功能和结构上,使其更贴近体内气管上皮细胞的自然生长状态。方法采用低温酶消化法、气液相界面培养、无血清条件培养基培养小鼠的气管上皮细胞,通过扫描电镜以及细胞免疫化学观察和鉴定细胞。结果此方法获得的细胞具有纤毛和黏液分泌功能。细胞角蛋白表达阳性。结论低温酶消化法、小鼠气管上皮细胞气液相界面培养的细胞更贴近生理状态,为进一步研究呼吸系统疾病提供了良好的模型。(本文来源于《广东医学》期刊2008年02期）
王亚冬,刘超,刘翠萍,马鸿泰,黄蓬[6]（2004）在《气液界面培养体外构建角膜上皮的实验研究》一文中研究指出目的:建立气液界面培养体外构建兔角膜上皮的方法。评价体外构建角膜上皮的生物学特性。方法:新西兰白兔15只30只眼,取角膜缘上皮组织。组织块接种原代培养。细胞融合生长后,消化传代。以去上皮细胞人羊膜组织为载体,接种培养传代细胞,细胞融合后,用气液界面培养方法继续培养周。倒置显2微镜对体外构建的角膜上皮进行观察。培养细胞膜片固定,苏木精-伊红(H)E染色;AE1细胞角蛋白单克隆抗体免疫组化染色,光镜观察。常规制作电镜标本,透射电镜观察。以传统培养方法作为对照。结果:倒置显微镜观察,气液界面培养可以形成连续的上皮细胞层,细胞和载体之间连接较牢固。HE染色显示体外构建的角膜上皮具有复层扁平上皮的结构。免疫组化染色有较高的阳性率。透射电镜观察细胞之间有丰富的桥粒样连接。结论:气液界面培养方法可以构建复层鳞状角膜上皮。与传统培养方法比较,构建的角膜上皮组织具有较优越的生物学特性。(本文来源于《中国临床康复》期刊2004年29期）
郭永清,赵小冬,杨占泉[7]（2004）在《气液界面培养的鼻黏膜上皮细胞的纤毛分化》一文中研究指出目的 :建立培养人鼻黏膜上皮 (HNE)细胞的纤毛分化模型。方法 :HNE细胞培养在覆盖Ⅰ型胶原凝胶的支持膜上 ,采用无血清培养液 ,行气液界面 (ALI)培养 ,用扫描电镜及图像分析技术对纤毛面积进行定量分析。结果 :液面下培养 2周的HNE细胞纤毛分化很差 (0 .31% ) ,而行ALI培养 2周的HNE细胞纤毛分化数量明显增加 (8.6 2 % ) ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。 结论 :采用ALI培养 ,提供细胞生长的极性环境 ,可以促进体外培养的鼻黏膜上皮细胞的纤毛分化(本文来源于《临床耳鼻咽喉科杂志》期刊2004年02期）
黄宁,唐彬,吴琦,王伯瑶,潘小玲[8]（2000）在《人气管上皮细胞气液界面无血清培养》一文中研究指出用低温酶消化法分离人气管上皮细胞，具有细胞损伤小，活力及纯度高的优点，成纤维细胞污染低。 人胎盘胶原提高了气管上皮细胞的贴壁性。无血清培养基能促进入气管上皮细胞增殖，分化和成熟。气液界 面培养方式更好地模拟了气管上皮细胞的天然生长环境，细胞在膜上呈复层生长，有利于其分化成熟及功能 表达。光镜下细胞形态及免疫组化角蛋白染色阳性证实培养细胞为气管上皮细胞。本文所建立的人气管上皮 细胞体外气液界面无血清培养方法为研究气管上皮细胞的生理和病理提供了一个十分有用的模型。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2000年02期）
伍时华[9]（1999）在《霉菌培养新方法—膜液界面培养法及其应用》一文中研究指出本文综述了日本学者 Ｏｇａｗ ａ 等人所建立的一种培养霉菌的新方法－ － 膜液界面培养法。该方法是在一简便的培养装置中， 利用一层多孔膜作为分隔， 让霉菌生长在膜表面上， 与空气充分接触，而膜的另一面则与液体培养基接触， 目的产物透过膜孔积累于培养液中。应用该方法培养米曲霉产生中性蛋白酶和曲酸， 实验结果表明， 其目的产物形成量明显高于常规的摇瓶培养法， 并且， 通过定时更换培养基而无须重新接种即可进行长期培养， 分批积累与收获目的产物。(本文来源于《广西工学院学报》期刊1999年03期）
黄宁,吴琦,李胜富,唐彬,王伯瑶[10]（1999）在《利用气液界面无血清培养原代兔气管上皮细胞的研究》一文中研究指出用低温酶消化法分离兔气管上皮细胞,具有细胞损伤小,活力及纯度高的优点,成纤维细胞污染极低。人胎盘胶原提高了气管上皮细胞贴壁性。无血清培养基能促进细胞增殖,分化和成熟。气液界面培养方式更好地模拟了气管上皮细胞的天然生长环境,在膜上呈复层生长,有利于细胞的分化成熟及功能表达。光镜下细胞形态及免疫组化细胞角蛋白染色阳性证实培养细胞为气管上皮细胞。本文所建立的兔气管上皮细胞体外气液界面无血清培养方法为研究气 管上皮细胞的生理和病理提供了一个十分有用的模型。(本文来源于《细胞生物学杂志》期刊1999年01期）
气液界面培养论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的分离人气管上皮细胞,并进行气液界面(air-liquid interface,ALI)培养,为呼吸道病毒研究提供良好的细胞模型。方法采用低温消化法分离人气管上皮细胞,用预包被胶原的0.4μm Transwell培养皿对传代后的气管上皮细胞进行ALI培养。利用倒置显微镜观察细胞生长状态,免疫细胞化学染色和免疫组化鉴定培养细胞的生长和分化情况,同时测定细胞分化过程中的跨上皮电阻(trans epithelial electrical resistance,TEER)。结果分离培养的气管上皮细胞光镜下细胞形态及免疫荧光角蛋白染色阳性,证实培养细胞为气管上皮细胞。ALI培养后的人气管上皮细胞的形态学、MUC5AC蛋白、Ⅳ型β-微管蛋白(β-tubulinⅣ)的表达及紧密连接和假复层的形成情况均与人气管组织结构类似。结论低温消化法可成功分离到活性高的上皮细胞。ALI培养的上皮细胞形态和功能与体内接近,且能较长时间维持其正常形态及功能,为呼吸道相关疾病的研究提供了理想的平台。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
气液界面培养论文参考文献
[1].陈思,肖华,张伟,孔晨,陈长明.小鼠气管–支气管上皮细胞的气–液界面培养[J].中国呼吸与危重监护杂志.2019
[2].李茂中,庞立丽,王宏,金玉,段招军.人气管上皮细胞的原代分离及气液界面培养[J].中国生物制品学杂志.2016
[3].李茂中.呼吸道上皮细胞气液界面培养的研究[D].中国疾病预防控制中心.2015
[4].吴丹,管东波,宋宏.支气管上皮细胞气液界面暴露培养在环境毒理学研究中的应用[J].毒理学杂志.2013
[5].高元妹,徐军.小鼠气管上皮细胞的气液相界面培养[J].广东医学.2008
[6].王亚冬,刘超,刘翠萍,马鸿泰,黄蓬.气液界面培养体外构建角膜上皮的实验研究[J].中国临床康复.2004
[7].郭永清,赵小冬,杨占泉.气液界面培养的鼻黏膜上皮细胞的纤毛分化[J].临床耳鼻咽喉科杂志.2004
[8].黄宁,唐彬,吴琦,王伯瑶,潘小玲.人气管上皮细胞气液界面无血清培养[J].基础医学与临床.2000
[9].伍时华.霉菌培养新方法—膜液界面培养法及其应用[J].广西工学院学报.1999
[10].黄宁,吴琦,李胜富,唐彬,王伯瑶.利用气液界面无血清培养原代兔气管上皮细胞的研究[J].细胞生物学杂志.1999
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