产碱杆菌Alcaligenes sp.P156中龙胆酸1,2-双加氧酶GdoP的研究

产碱杆菌Alcaligenes sp.P156中龙胆酸1,2-双加氧酶GdoP的研究

论文摘要

龙胆酸是芳香族化合物微生物降解的核心代谢产物,龙胆酸降解研究对于芳香族化合物的降解研究具有重要意义。龙胆酸1,2-双加氧酶是催化龙胆酸降解的关键酶。本研究利用双加氧酶催化保守结构域在产碱杆菌P156的基因组上通过多序列比对找到一个龙胆酸双加氧酶基因gdoP;利用分子生物学技术对该基因进行异源表达;并利用重组蛋白对酶学性质和动力学参数进行测定。酶学性质研究表明,GdoP催化反应的最适pH为7.5,最适温度为40℃。GdoP是一个Fe2+依赖型双加氧酶,含有Fe2+离子结合结构域。Fe2+离子能够明显促进GdoP酶活,Cu2+、Cd2+离子对GdoP的酶活有明显抑制。以龙胆酸为底物,GdoP的Km值和Vmax值分别为641μmol/L和23.9U/mg。GdoP具有较强的底物特异性,能够催化龙胆酸开环生成3-马来酰丙酮酸,不能催化5-氨基水杨酸、水杨酸和1-羟基-2-萘酸的转化。本研究系统的研究了龙胆酸1,2-双加氧酶GdoP的酶学性质,有助于更好的研究芳香族化合物的微生物降解过程。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1试剂与仪器
  •   1.2生物信息学分析
  •   1.3 gdoP基因克隆与蛋白表达纯化
  •   1.4 GdoP的酶活测定
  •   1.5 GdoP的酶学性质研究
  •     1.5.1 pH对酶活力的影响
  •     1.5.2温度对酶活力的影响
  •     1.5.3金属离子对GdoP酶活的影响
  •   1.6 GdoP蛋白的催化动力学研究
  •   1.7底物特异性分析
  •   1.8数据处理与分析
  • 2 结果与分析
  •   2.1生物信息学分析
  •   2.2 gdoP基因的克隆与GdoP蛋白纯化、酶活测定
  •   2.3 GdoP的酶学性质
  •   2.4 GdoP的动力学参数
  •   2.5底物特异性分析
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 胡春辉,王菲,郭立忠,于浩

    关键词: 龙胆酸,双加氧酶,产碱杆菌,基因表达,酶学性质

    来源: 青岛农业大学学报(自然科学版) 2019年03期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学,工程科技Ⅰ辑

    专业: 生物学,环境科学与资源利用

    单位: 青岛农业大学中心实验室,青岛农业大学生命科学学院/山东省应用真菌重点实验室

    基金: 国家自然科学基金青年项目(31600086),山东省自然科学基金青年项目(ZR2016CQ06),青岛农业大学人才科研启动基金(6631115052)

    分类号: X172;X592

    页码: 176-182

    总页数: 7

    文件大小: 384K

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