导读:本文包含了真核表达论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基因,蛋白,转染,质粒,因子,病毒,传染性。
真核表达论文文献综述
李君君,廖佩,文锋,罗泽宇,曹翊雄[1]（2019）在《携带TFPI-2基因的真核表达载体对SHI-1细胞生长的抑制作用》一文中研究指出目的:构建人组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)核表达载体,探讨TFPI-2基因对急性单核细胞白血病细胞株(SHI-1)生长的影响。方法:通过基因化学合成的方式得到TFPI-2的cDNA,将TFPI-2基因和线性载体片段进行连接,并插入载体PEGFP-N1多克隆位点处,再将真核表达载体PEGFP-N1-TFPI-2转染SHI-1细胞,在荧光显微镜下观察TFPI-2转染SHI-1细胞的情况;应用MTT法检测TFPI-2基因不同时间段对SHI-1细胞相对生长率的影响;RT-PCR检测TFPI-2转染前后每组细胞中TFPI-2 mRNA表达水平;采用Western blot法检测TFPI-2蛋白表达。将成功转染PEGFP-N1-TFPI-2载体的细胞命名为SHI-1-TFPI-2(实验组),转染空载体pEGFP-N1的细胞和未转染细胞设为对照组,分别命名为SHI-1-V和SHI-1-P。结果:成功构建了人TFPI-2基因真核表达载体PEGFP-N1-TFPI-2;将载体PEGFP-N1-TFPI-2转染SHI-1细胞,24 h后在荧光显微镜下可见荧光细胞,表明载体PEGFP-N1-TFPI-2成功转入SHI-1细胞;48和72 h后荧光细胞数目增多。RT-PCR结果显示:TFPI-2基因与内参β-actin条带灰度比值实验组高于对照组,灰度比值分别为:SHI-1-V组:0.51±0.04、SHI-1-P组:0.52±0.03、SHI-1-TFPI-2组:0.87±0.08;SHI-1-TFPI-2组与SHI-1-V和SHI-1-P组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 :PEGFP-N1-TFPI-2中TFPI-2基因的表达能抑制SHI-1细胞生长,此为未来白血病的基因治疗提供了研究方向。(本文来源于《中国实验血液学杂志》期刊2019年06期）
许会静,刘晴,闫冰,刘微,张磊[2]（2019）在《AQP4真核表达载体的构建和AQP4-M23蛋白在中国仓鼠肺细胞系V79中的表达》一文中研究指出目的:构建水通道蛋白4 (AQP4)真核表达载体pmCherry-N1-hAQP4-M23,检测AQP4-M23蛋白在中国仓鼠肺细胞系V79中的表达。方法:采用PCR方法扩增hAQP4-M23基因,经双酶切后与真核表达载体pmCherry-N1连接,构建pmCherry-N1-hAQP4-M23重组表达质粒。采用脂质体将其转染至V79细胞中,将细胞随机分为对照组(未转染重组质粒的V79细胞)和转染组(转染重组质粒的V79细胞)。利用RT-PCR法和荧光显微镜检测2组细胞中hAQP4-M23基因的表达;取视神经脊髓炎(NMO)患者血清中抗AQP4抗体,与2组细胞结合,采用免疫荧光和水通透性法检测2组细胞中hAQP4-M23的活性。结果:成功构建AQP4真核表达载体;荧光显微镜观察,转染组细胞膜清晰表达红色荧光;免疫荧光检测,转染组细胞膜呈现绿色荧光,表明转染组细胞膜AQP4-M23蛋白可与NMO患者血清成分结合;与对照组比较,转染组细胞中hAQP4-M23活性升高(P<0.05)。结论:成功构建表达AQP4基因的真核表达载体,并在V79细胞系中成功表达hAQP4-M23蛋白。(本文来源于《吉林大学学报(医学版)》期刊2019年06期）
袁园,张愉,张丽华,范文胜,韦天超[3]（2019）在《鸡传染性支气管炎病毒E蛋白真核表达载体的构建及其产物抗原性的鉴定》一文中研究指出以鸡传染性支气管炎病毒(IBV)GX-YL5毒株为模板,PCR扩增其E基因并克隆至融合有His标签的杆状病毒转移载体pFastBac~(TM)/HBM-TOPO,构建重组转移载体pFastBac~(TM)/HBM-TOPO-E,转化DH10Bac~(TM)感受态,经同源重组后转染Sf9细胞,并应用间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot进行鉴定。IFA结果表明融合了E蛋白的表达产物可被抗His标签的鼠单克隆抗体识别,在感染的细胞膜表面呈现强的黄绿色荧光;Western blot结果显示融合了E蛋白的表达产物既可被抗His标签的鼠单克隆抗体识别,也可被GX-YL5株的多抗血清特异性识别,且二者的目的条带大小均为16 ku。说明本研究已成功在Sf9细胞中表达了E蛋白,且表达产物抗原性良好,为进一步探讨IBV E蛋白的生物学功能和构建病毒样颗粒提供了基础。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2019年11期）
曹丁,李学优,昝继清,兰玲峰,甘祥武[4]（2019）在《鸡α干扰素真核表达载体的改造及在毕赤酵母中的分泌表达》一文中研究指出旨在利用毕赤酵母密码子的偏好性和遗传简并性,将鸡α干扰素优化基因片段cIFN-α2连入毕赤酵母表达载体pPIC9k,再经重迭延伸PCR方法去除重组质粒的5′端非翻译区多余的8个核苷酸GGATCCAA,使其与毕赤酵母AOX1(醇氧化酶)的5′端非翻译区的序列完全一致,构建并筛选重组毕赤酵母,并进行摇瓶诱导表达试验。将表达产物用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行检测,并用微量病变抑制法检测其抗病毒效价。抗病毒活性检测结果显示,天然基因、优化基因、质粒5′端非翻译区改造后的优化基因重组质粒表达产物的抗病毒效价分别为10~5、10~6、1.5×10~6 U/mL。鸡α干扰素基因优化后的抗病毒效价提高了10倍,对质粒5′端非翻译区进行进一步改造后,表达蛋白的抗病毒活性提高了50%,从而为鸡α干扰素的工业化生产奠定了基础。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2019年19期）
龚小霞,李超,曹曦月,杨诚诚,黄超[5]（2019）在《人叉头转录因子O亚型6真核表达载体的构建及其对胶质瘤细胞存活的影响》一文中研究指出构建人叉头转录因子O亚型6(forkhead box class O6, FOXO6)基因的真核表达载体,并探究FOXO6对胶质瘤细胞存活的影响。以人神经胶质瘤细胞U251的c DNA为模板,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法扩增FOXO6基因片段,并将其与pRK5-myc载体连接,构建pRK5-myc-FOXO6重组质粒;将构建成功的重组质粒和空载体分别转染至U251细胞中进行表达,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’, 6-diamidino-2-phenylindole, DAPI)染色法分别检测FOXO6对U251细胞中转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator-1α, PGC-1α)转录水平的影响及其对U251细胞存活的影响。经双酶切鉴定及DNA测序表明:pRK5-myc-FOXO6重组质粒构建成功;FOXO6转染组中的PGC-1α转录水平出现了明显的下降,并出现了明显的细胞凋亡现象。上述结果显示,pRK5-myc-FOXO6重组质粒构建成功,体外实验暗示FOXO6可能通过抑制PGC-1α的表达来抑制U251细胞的能量代谢及抗氧化过程,进而诱导U251细胞的凋亡,这为后续深入研究FOXO6在胶质瘤上的作用机制和靶点奠定了基础。(本文来源于《浙江大学学报(农业与生命科学版)》期刊2019年05期）
王孜恒,周敬伟,侯筱宇[6]（2019）在《Bax、Bad基因真核表达质粒构建及转染人胚肾细胞后的翻译水平观察》一文中研究指出目的构建Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2相关细胞死亡因子(Bad)基因真核表达质粒pcDNA3.1-Bax、pcDNA3.1-Bad,并观察两质粒转染至人胚肾293(HEK293)细胞后Bax、Bad的表达。方法采用TRIzol试剂提取大鼠脑组织总RNA,利用反转录—聚合酶链反应(RT-PCR)扩增Bax和Bad的互补DNA(cDNA)序列,将cDNA分别克隆至pcDNA3.1载体上。采用脂质体转染法将序列正确的pcDNA3.1-Bax和pcDNA3.1-Bad真核表达质粒分别转染至HEK293细胞,免疫印迹法鉴定Bax、Bad在细胞中的表达。结果双酶切和DNA测序分析显示Bax和Bad基因片段成功插入pcDNA3.1载体中,并且与其cDNA(Genbank:NM_017059.2和AF031227.1)序列完全一致。免疫印迹显示pcDNA3.1-Bax、pcDNA3.1-Bad真核表达质粒能够在HEK293细胞中高效表达。结论 pcDNA3.1-Bax、pcDNA3.1-Bad真核表达质粒构建成功,Bax、Bad在HEK293细胞中成功过表达。(本文来源于《山东医药》期刊2019年30期）
朱艳平,何勇,刘佳,邢瑞林,常乐凯[7]（2019）在《鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白与幽门螺杆菌铁蛋白基因融合PCR扩增及其真核表达载体的构建》一文中研究指出为获得高活性的鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)VP2蛋白的重组蛋白,本试验对IBDV VP2蛋白基因与能进行自我组装的幽门螺杆菌(Hp)铁蛋白基因进行融合PCR扩增,获得其融合基因。根据成熟VP2蛋白基因cDNA序列和Hp铁蛋白基因的碱基序列,设计合成2对引物,应用融合PCR技术扩增获得融合基因片段VP2-Fe。将目的基因克隆至pMD18-T载体筛选阳性重组克隆质粒,然后将目的基因亚克隆至真核表达载体pPICZaC后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选获得阳性表达质粒。结果显示,通过两轮PCR扩增出长度为1 824 bp的融合基因VP2-Fe,亚克隆至pMD18-T载体,测序结果显示,融合基因无任何碱基的突变,筛选的阳性质粒命名为pMD-VP2-Fe。双酶切回收目的基因大小为1 824 bp,亚克隆至pPICZaC,PCR和双酶切鉴定出现预期大小的片段,将获得的阳性表达质粒命名为pPICZaC-VP2-Fe。本研究为后期利用真核表达载体获得其融合重组蛋白奠定基础。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年10期）
俸云,赵鑫,许洁,余庆,沈朋雷[8]（2019）在《水牛KDM4D基因克隆分析及其真核表达载体的构建》一文中研究指出旨在克隆水牛组蛋白去甲基化酶KDM4D (lysine K-specific demethylase 4D)基因,对其进行生物信息学分析,并构建KDM4D基因的真核表达载体,为研究KDM4D基因在水牛体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)胚胎发育中的作用奠定基础。试验从水牛睾丸组织中提取总RNA,反转录cDNA后, RT-PCR技术克隆KDM4D基因片段,并运用生物信息学软件对序列进行分析;随后将KDM4D基因片段连接至真核表达载体pEGFP-C1,再把重组质粒转染进HEK293T细胞。结果表明,克隆所得的水牛KDM4D基因片段编码区全长1 155 bp,共编码384个氨基酸。水牛KDM4D基因与黄牛、山羊、绵羊、犬、猫、猪、人、小鼠、大鼠的同源性分别为98.4%,96.6%,96.3%,84.9%,84.1%,81.4%,80.4%,77.4%,77.3%。多重比较和进化树分析结果显示,KDM4D基因在不同物种及生物进化中具有较高的保守性。蛋白结构域分析显示,克隆所得的KDM4D蛋白结构特殊,只具有1个JmjN (Jumonji N)和1个JmjC (jumonji C)结构域,与KDM4家族其他成员相比缺少PHD (plant homeodomain)和Tud (tudor)功能域。KDM4D蛋白质叁级结构预测结果显示,水牛、黄牛和人3种物种间具有较高的相似性。转染结果显示,构建的重组质粒可以在HEK293T细胞中表达。本试验成功克隆水牛KDM4D基因,对其进行生物信息学分析,构建了真核表达载体pEGFP-C1-KDM4D,并在HEK293T细胞中成功表达。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2019年10期）
徐丽,温贵兰,管国丹,张升波,李昌红[9]（2019）在《猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白2分段真核表达及其细胞定位分析》一文中研究指出为探讨非结构蛋白2(non-structural protein 2,NSP2)在猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)复制过程中的作用及机制,本研究构建真核重组质粒pc DNA 3.1-5'Flag-NSP2-147-323,并瞬时转染至HEK293T中,同时设置完整NSP2基因序列重组质粒作为对照,转染48 h后分别用不同的抗体进行间接免疫荧光监测。结果显示,转染对照组中细胞核周围可见特异性荧光,而转染真核重组质粒pc DNA 3.1-5'Flag-NSP2-147-323后,不仅在细胞核周围,在细胞核内也可以观察到特异性荧光。本研究成功构建真核重组质粒pc DNA 3.1-5'Flag-NSP2-147-323,并可在HEK 293T细胞中正确表达,为进一步研究NSP2在PRRSV复制过程中的作用提供依据和基础。(本文来源于《中国动物传染病学报》期刊2019年05期）
张寅斌,陈琳,孙诗雨,陈银溪,闫婉君[10]（2019）在《真核表达p27构建胃癌顺铂耐药细胞模型的研究》一文中研究指出目的:构建p27真核表达载体并导入胃癌SGC-7901细胞获得稳定表达p27的稳定细胞株,以研究p27在胃癌SGC-7901细胞顺铂耐药中所发挥的功能。方法:以乳腺文库为模板,PCR扩增出p27编码区,并将其连接到p CDNA 3. 0-Flag载体上,转染293T细胞后分别用定量PCR和Western blot检测其表达情况,并通过Western blot检测SGC-7901细胞过表达Flag-p27稳定细胞株是否构建成功。通过CCK-8药物敏感性实验检测p27在胃癌细胞顺铂耐药中所发挥的功能。结果:双酶切和测序结果表明,pCDNA 3. 0-Flagp27构建成功,并在293T中成功表达,胃癌SGC-7901细胞过表达Flag-p27细胞株建立成功,通过耐药曲线表明过表达p27可以引起SGC-7901细胞顺铂耐药。结论:成功构建了带Flag标签的p27真核表达载体,为进一步研究p27在胃癌耐药中的功能奠定了基础。(本文来源于《现代肿瘤医学》期刊2019年21期）
真核表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:构建水通道蛋白4 (AQP4)真核表达载体pmCherry-N1-hAQP4-M23,检测AQP4-M23蛋白在中国仓鼠肺细胞系V79中的表达。方法:采用PCR方法扩增hAQP4-M23基因,经双酶切后与真核表达载体pmCherry-N1连接,构建pmCherry-N1-hAQP4-M23重组表达质粒。采用脂质体将其转染至V79细胞中,将细胞随机分为对照组(未转染重组质粒的V79细胞)和转染组(转染重组质粒的V79细胞)。利用RT-PCR法和荧光显微镜检测2组细胞中hAQP4-M23基因的表达;取视神经脊髓炎(NMO)患者血清中抗AQP4抗体,与2组细胞结合,采用免疫荧光和水通透性法检测2组细胞中hAQP4-M23的活性。结果:成功构建AQP4真核表达载体;荧光显微镜观察,转染组细胞膜清晰表达红色荧光;免疫荧光检测,转染组细胞膜呈现绿色荧光,表明转染组细胞膜AQP4-M23蛋白可与NMO患者血清成分结合;与对照组比较,转染组细胞中hAQP4-M23活性升高(P<0.05)。结论:成功构建表达AQP4基因的真核表达载体,并在V79细胞系中成功表达hAQP4-M23蛋白。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
真核表达论文参考文献
[1].李君君,廖佩,文锋,罗泽宇,曹翊雄.携带TFPI-2基因的真核表达载体对SHI-1细胞生长的抑制作用[J].中国实验血液学杂志.2019
[2].许会静,刘晴,闫冰,刘微,张磊.AQP4真核表达载体的构建和AQP4-M23蛋白在中国仓鼠肺细胞系V79中的表达[J].吉林大学学报(医学版).2019
[3].袁园,张愉,张丽华,范文胜,韦天超.鸡传染性支气管炎病毒E蛋白真核表达载体的构建及其产物抗原性的鉴定[J].畜牧与兽医.2019
[4].曹丁,李学优,昝继清,兰玲峰,甘祥武.鸡α干扰素真核表达载体的改造及在毕赤酵母中的分泌表达[J].江苏农业科学.2019
[5].龚小霞,李超,曹曦月,杨诚诚,黄超.人叉头转录因子O亚型6真核表达载体的构建及其对胶质瘤细胞存活的影响[J].浙江大学学报(农业与生命科学版).2019
[6].王孜恒,周敬伟,侯筱宇.Bax、Bad基因真核表达质粒构建及转染人胚肾细胞后的翻译水平观察[J].山东医药.2019
[7].朱艳平,何勇,刘佳,邢瑞林,常乐凯.鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白与幽门螺杆菌铁蛋白基因融合PCR扩增及其真核表达载体的构建[J].中国畜牧兽医.2019
[8].俸云,赵鑫,许洁,余庆,沈朋雷.水牛KDM4D基因克隆分析及其真核表达载体的构建[J].中国兽医学报.2019
[9].徐丽,温贵兰,管国丹,张升波,李昌红.猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白2分段真核表达及其细胞定位分析[J].中国动物传染病学报.2019
[10].张寅斌,陈琳,孙诗雨,陈银溪,闫婉君.真核表达p27构建胃癌顺铂耐药细胞模型的研究[J].现代肿瘤医学.2019
论文知识图
