王水秀1,2马云青3
(1南昌大学研究生院医学部江西南昌330006)
(2井冈山大学护理学院江西吉安343009)
(3南昌大学第一附属医院干部科江西南昌330006)
【摘要】目的建立2型糖尿病大鼠动物模型。方法健康清洁级SD雄性大鼠30只，随机分成2组，正常对照组（A组），糖尿病模型组（B组），每组15只。A组给予正常普通饮食；B组给予高糖高脂饮食造模，喂养4周，产生胰岛素抵抗后给予STZ25mg/kg一次性腹腔内注射方法复制2型糖尿病大鼠模型。实验结束时测定空腹血糖、血胰岛素、总胆固醇、甘油三酯。结果2型糖尿病模型组大鼠空腹血糖、血胰岛素、总胆固醇、甘油三酯均较正常对照组明显升高。结论高糖高脂膳食加STZ诱导糖尿病大鼠模型可以用作2型糖尿病动物模型建立的常用方法。
【关键词】2型糖尿病动物模型链脲佐菌素
【中图分类号】R965.1【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）07-0083-02
近年来,随着胰岛素的广泛应用,糖尿病的急性并发症致死率已明显下降,但其慢性并发症如心、脑、肾的并发症已成为致死的主要因素。糖尿病的病因和发病机制迄今尚未完全明了。因此,建立适当的动物模型,才能为研究糖尿病及其并发症的病因、发病机制和病理生理改变提供重要的、可靠的基础保证。
1材料与方法
1.1实验动物和试剂
健康清洁级雄性纯种SD大鼠30只，体质量（180-200）g，由南昌大学动科部提供，实验动物合格证号：SCXK(赣)2005-0001。
1.2实验方法
体质量为（180-200）g的2月龄健康清洁级SD雄性大鼠30只，随机分成2组：正常对照组和2型糖尿病模型组（T2DM组），每组15只。适应性喂养1周后，正常对照组继续给予正常普通饮食T2DM组给予高糖高脂饮食（猪油10%，蔗糖20%，蛋黄3%，基础饲料67%），喂养4周，按照HOMA胰岛素抵抗指数【HOMA=（FPG×FNS）/22.5】判断动物出现胰岛素抵抗后，T2DM组大鼠禁食过夜12h，将链脲佐菌素（STZ）按25mg/kg一次性腹腔注射，正常对照组腹腔内注射等体积柠檬酸缓冲液。1周后，尾静脉采血测定空腹血糖（采血前大鼠禁食过夜12h），以空腹血糖≥16.7mmol/L作为糖尿病造模成功标准。
1.3观察指标和方法
1.3.1一般情况:计算成模率,观察大鼠精神状态、体形、毛色等。
1.3.2血糖：用葡萄糖氧化酶法测定。
1.3.3血清胰岛素:采用放射免疫法测定，以HOMA胰岛素抵抗指数评价胰岛素抵抗程度。
1.4统计方法
SPSS17.0统计软件对所得结果进行处理，计量资料用均数±标准差(x-±s)表示，两组间比较采用t检验，p<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1实验存活大鼠共26只，其中A组15只，B组为11只。2型糖尿病模型造模成功率为73%。T2DM组4只大鼠在造模期间死亡，考虑死亡原因为高血糖、禁食引起的低血糖及感染。实验期间，正常对照组大鼠体重无明显变化，精神状况良好，双目有神，反应敏捷，毛发有光泽；T2DM组大鼠体形开始逐渐变胖，注射STZ后逐渐消瘦，并出现精神萎靡，反应迟钝，毛发晦暗无光泽，伴有多尿、多饮、多食等典型的2型糖尿病临床表现。
2.2各组生化指标结果
与正常对照组比较，T2DM组大鼠FBG、FNS、HOMA-IR、TG、TC水平均明显升高（P＜0.05）。见表1。
3讨论
链脲菌素(streptozocin,STZ)STZ通过对一定种属胰岛β细胞进行选择性破坏,进而导致动物产生糖尿病。因STZ对组织毒性小,动物存活率高,目前成为国内外使用较多的制备糖尿病动物模型的方法之一。腹腔或静脉注射STZ制备2型糖尿病的方法虽然操作简单,但所需时间较长。目前多数将特殊膳食与注射STZ两者相结合,以达到缩短模型出现时间,提高模型成功率的效果。STZ加膳食诱导的模型(STZanddietinduceddiabetes)，通过给予实验动物少量STZ,使得部分胰岛β细胞功能遭受破坏,同时饲以高糖、高脂肪饲料以致外周组织对胰岛素不敏感,两者结合便诱导出病理、生理改变接近于人类2型糖尿病的动物模型[1]。国内外[2-5]有很多报道通过高脂饮食结合STZ构建糖尿病大鼠。
在本实验中，根据我们测的血糖数据发现，大鼠自从腹腔注射STZ3天后，血糖升高最快，并开始出现多饮、多尿症状，这段时间大鼠因血糖太高容易导致酸中毒，而出现死亡率高，注意多给予水，并勤换垫料，必要时给予小剂量胰岛素。持续4-5天后，血糖水平基本稳定，因此，注射STZ后第7天测血糖确定造模是否成功最佳。在实验结束时T2DN组大鼠空腹血糖、空腹胰岛素较正常对照组均明显升高，成功建立了2型糖尿病动物模型。该造模方法简便、造模时间短、特异性高、发病时间整齐和病情严重程度较统一、重复性好可作为建立2型糖尿病模型的常用方法。
参考文献
[1]ZhangM,LvXY,LiJ,etal.TheCharacterizationofHigh-FatDietandMultipleLow-DoseStreptozotocinInducedType2DiabetesRatModel[J].ExpDiabetesRes,2008,2008:7040-7045.
[2]杨亦彬,张翥,苏克亮,等.链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病肾病模型的方法学探讨[J].华西医学,2005,20(2):299-300.
[3]杨架林,李果,张芳林,等.cDNARDA在类似普通2型糖尿病大鼠肾脏组织基因差异表达筛查中的应用[J].中国生物化学与分子生物学报,2003,19(5):667-671.
[4]杨架林,李果,刘优萍,等.长期高脂饮食加小剂量链脲佐霉素建立人类普通2型糖尿病大鼠模型的研究[J].中国实验动物学报,2003,11(3):138-141.
[5]LatipaaPM,PeuhkurinenKJ,HiltunenJK,etal.Regulationofpyruvatedehydrogenaseduringinfusionoffattyacidsofvaryingchainlengthsintheperfusedratheart[J].MolCellCardiol,1985,17:1161-1171.
表1各组大鼠生化指标比较（x-±s）
注：与正常对照组比较，△P＜0.05。