导读:本文包含了苦马豆论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:激素,蛋白,真菌,溶酶体,基因,黄花,内生。
苦马豆论文文献综述
陈璟,黄文颖,赵宝玉,莫重辉[1]（2019）在《发酵时间对黄花棘豆青贮品质及苦马豆素含量的影响》一文中研究指出探究不同发酵时间对黄花棘豆(Oxytropis ochrocephala)青贮品质及苦马豆素含量的影响,进而为黄花棘豆作为优质牧草资源开发利用提供新途径。选择含水量为75%的新鲜黄花棘豆,填充于青贮瓶中压实密封后置避光处室温保存,分别于青贮0、10、20、30……100 d取样,感观检查青贮效果,利用内标气相色谱法测定青贮前后苦马豆素含量,确定黄花棘豆最佳青贮发酵时间。结果表明,黄花棘豆青贮后基本保持黄绿色,质地变软易分离,手抓松散不粘手,并随着青贮发酵时间的延长,散发出酸香味越来越浓,青贮效果较好;苦马豆素质量浓度为0.375 mg/mL～6 mg/mL,苦马豆素质量浓度和me-Gal峰面积呈直线线性关系(R~2=0.999 98),加标回收率84.36%,RSD=0.77%,表明该方法准确度和精密度较好,可用于样品中苦马豆素含量测定;经测定不同青贮发酵时间黄花棘豆中苦马豆素含量,青贮100 d时苦马豆素含量比青贮前下降51.90%。结论,黄花棘豆青贮发酵100 d以上可作为高蛋白饲料利用。(本文来源于《动物医学进展》期刊2019年11期）
王帅,郭亚洲,浮晶晶,郭蓉,苏永霞[2]（2019）在《苦马豆素致大鼠原代肾小管上皮细胞毒性损伤机制研究》一文中研究指出[研究背景]疯草(Locoweed)一词源自于西班牙语"Loco",主要是指豆科黄芪属(Astragalus)和棘豆属(Oxytropis)有毒植物。目前,疯草已成为危害草原畜牧业发展的主要毒草,且广泛分布于世界各地。动物采食后可引起以神经机能紊乱为特征的中毒病,严重者可导致死亡,病理变化主要表现为组织细胞广泛的空泡样病变。此外,疯草中毒对牲畜生殖、内分泌及免疫系统也能产生一定影响,每年均造成巨大的经济损失,严重阻碍草原畜牧业的可持续发展。大量研究表明疯草的主要毒性成分苦马豆素(Swainsonine),可竞争性抑制Ⅱ类α-甘露糖苷酶活性,尤其是溶酶体α-甘露糖苷酶和高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ,最终导致细胞内糖蛋白合成异常和寡糖积累,这是引起疯草中毒的重要原因,但对其分子调控机制仍缺乏深入研究。[研究目的]目前研究表明,苦马豆素可诱导细胞发生程序性死亡,如凋亡,但凋亡与自噬并不是两个完全独立的过程,两者在发生时存在许多交叉信号通路;有资料显示,当自噬过程发生障碍时往往伴随着空泡样病变。本研究以大鼠肾小管上皮细胞(NRK)为模型,探讨苦马豆素对NRK细胞的毒性效应是否是凋亡与自噬的共同作用,以及调节凋亡与自噬的分子机制,以期为苦马豆素毒性及作用机制研究提供理论依据。[试验方法]本研究采用Westemblot技术检测凋亡及自噬相关蛋白表达水平,GFP-LC3-Ⅱ检测LC3-Ⅱ荧光聚点及免疫荧光检测LC3-Ⅱ与溶酶体膜蛋白LAMP-2的共定位,透射电镜观察自噬体结构,以及苦马豆素对溶酶体相关蛋白表达的影响。[试验结果]①苦马豆素引起NRK细胞凋亡:用400μg/mL苦马豆素处理NRK细胞不同时间,通过Western blot检测凋亡相关蛋白的表达,结果显示凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3、Bax、AIF、CytC以时间依赖性方式增加。随后用不同浓度的苦马豆素处理细胞24h,Cleavedcaspase-3、Bax、AIF、Cyt C呈现剂量依赖性方式增加。②苦马豆素诱导NRK细胞自噬:用400μg/mL苦马豆素处理NRK细胞不同时间,通过Western blot检测自噬标志物LC3-Ⅱ的表达,结果显示LC3-Ⅱ的表达以时间依赖性方式增加。随后用不同浓度的苦马豆素处理细胞24 h,LC3-Ⅱ表达以剂量依赖性方式增加,且各处理组中自噬相关蛋白Beclin-1表达量也升高;GFP-LC3-Ⅱ荧光结果显示,随着时间的延长和剂量的升高,荧光聚点增多;透射电镜观察细胞超微结构,可看到处理组细胞中自噬泡数量明显增多;用400μg/mL苦马豆素或10μM CQ单独处理以及苦马豆素与CQ联合处理细胞,结果显示苦马豆素与CQ均可以使LC3-Ⅱ表达显着上升,且联合处理组中LC3-Ⅱ表达呈一定累加效应,Western blot检测自噬底物p62的表达水平发现,p62蛋白水平增加,表明自噬降解可能受阻。③苦马豆素引起NRK细胞溶酶体障碍:自噬降解受阻可能是自噬体与溶酶体融合受阻,也可能是溶酶体降解功能受损。本试验通过检测LC3-Ⅱ与溶酶体膜蛋白LAMP-2的共定位情况,来判断自噬体与溶酶体的融合是否受阻。结果显示苦马豆素处理组LC3-Ⅱ及LAMP-2荧光反应共定位情况明显,但透射电镜观察苦马豆素引起的空泡样病变时发现,在空泡周围有大量溶酶体聚集,同时还存在少量自噬体,证明苦马豆素不影响自噬泡与溶酶体融合;但随着苦马豆素剂量的升高,溶酶体功能相关蛋白TFEB、LAMPI表达降低。[讨论]试验结果表明,苦马豆素引起细胞凋亡的同时也可诱导细胞发生自噬:苦马豆素可导致自噬晚期降解受阻,但不影响自噬体与溶酶体融合;苦马豆素可以使溶酶体相关蛋白表达降低,因此苦马豆素中毒引起的空泡变性很可能与溶酶体功能障碍有关,这与之前研究的结果(苦马豆素抑制甘露糖苷酶活性)相一致。本试验结果为深入探讨苦马豆素中毒机制研究提供新的线索。[结论]以上结果表明,苦马豆素在引起细胞凋亡的同时也可诱导NRK细胞发生自噬,同时可能引起溶酶体功能障碍,导致自噬降解被抑制,最终引起细胞死亡。(本文来源于《陕西省毒理学会防控毒物危害与优化生态环境研讨会论文集》期刊2019-11-16）
王毅,赵宝玉,吴晨晨[3]（2019）在《苦马豆素致N-聚糖加工异常对小鼠生殖激素及其受体的影响》一文中研究指出[目的]疯草的主要有毒成苦马豆素是一种α-甘露糖苷酶抑制剂,会引起N-聚糖加工过程失调。前期课题组研究得出:苦马豆素致糖蛋白激素糖基化位点上糖链结构发生改变,引起促性腺激素功能发生改变且含量下降。而苦马豆素中毒对家畜生殖激素分泌的调节机制尚不明确。[方法]通过苦马豆素腹腔注射对小鼠进行染毒,收集妊娠期和分娩期小鼠的血液、垂体和卵巢组织,检测单糖水平、糖基转移酶蛋白表达量、生殖激素水平及其受体蛋白表达水平,类固醇限速酶蛋白表达量。[结果]表明:苦马豆素致显着抑制N-聚糖加工过程关键糖基转移酶蛋白表达(P<0.05);染毒组小鼠生殖激素受体蛋白表达量显着低于对照组(P<0.05);染毒组小鼠类固醇激素合成限速酶蛋白表达量显着低于对照组(P<0.05)。[结论]苦马豆素可使N-聚糖加工异常,同时降低生殖激素受体和性类固醇激素限速酶的表达量,引起性类固醇激素分泌下降,导致生殖激素分泌紊乱,最终结果导致繁殖性能下降。(本文来源于《陕西省毒理学会防控毒物危害与优化生态环境研讨会论文集》期刊2019-11-16）
毛彦妮,余永涛,赵清梅,何生虎,李金荣[4]（2019）在《疯草内生真菌苦马豆素合成相关基因及其研究方法的进展》一文中研究指出豆科棘豆属(Oxytropis)和黄芪属(Astragalus)有毒植物统称为疯草。疯草的营养价值丰富,是潜在的优良牧草。但家畜长期或过量采食后,可发生以神经机能紊乱为特征的慢性中毒病,称之为疯草中毒病[1]。中毒家畜表现为共济失调、瘫痪、流产、不孕、出生缺陷和死亡等。疯草导致动物中毒的主要因素是疯草中的吲哚里西啶类生物碱—苦马豆素,它能特异性地抑制参与糖蛋白分解代谢的溶酶体α-甘露糖苷酶、高尔基α-甘露糖苷酶Ⅱ,破坏细胞内膜系统[2-(本文来源于《中国兽医学报》期刊2019年09期）
郝宝成,宋向东,高艳,王学红,刘宇[5]（2019）在《产苦马豆素疯草内生真菌Alternaria SectionUndifilum oxytropis的诱变筛选》一文中研究指出【背景】疯草是黄芪属和棘豆属有毒植物的统称,疯草内生真菌Alternaria Section Undifilum oxytropis是从疯草中分离获得的一种具有产生苦马豆素(swainsonine,SW)能力的真菌。因其产物SW一方面体现出良好的抑制肿瘤细胞生长、浸润和转移作用及潜在的抗艾滋病病毒等多种药用活性,另一方面牛羊因大量误食疯草能导致中毒,对草原畜牧业健康发展造成了严重的危害,受到研究人员的广泛关注。但由于疯草内生真菌Alternaria Section Undifilum oxytropis产苦马豆素生物合成机制尚不清楚,严重制约了后续通过生物发酵大量获得SW用以抗肿瘤机制研究与临床应用,以及通过基因工程手段对疯草进行脱毒育种,使疯草成为牛羊可食用、无毒的天然牧草。【目的】利用有效的研究手段,阐明Alternaria Section Undifilum oxytropis产苦马豆素生物合成机制。【方法】以Alternaria Section Undifilum oxytropis为出发菌株,分别采用紫外辐照诱变、亚硝基胍化学诱变、紫外辐照与亚硝基胍复合诱变的3种诱变方式,在不同诱变时间、诱变剂量等条件下对其进行了诱变筛选研究。通过测定不同诱变方式和作用条件下对菌株的致死率,经发酵培养、连续5代传代培养、并采用α-甘露糖苷酶活性分析法检测诱变菌株产苦马豆素含量变化,优化确定了不同诱变方式下最佳诱变条件,并将优势突变菌株接种马铃薯葡萄糖琼脂培养基(potato dextrose agar,PDA)和改良察式液体培养基,连续培养32 d,测定并绘制了突变菌株D4和UD1的生长周期曲线。【结果】经上述3种诱变方式处理后,分别获得1株产苦马豆素含量变化较大、能稳定连续传代培养的突变菌株U4、D4、UD1。其优化的诱变条件,紫外辐照为辐照处理160 s,亚硝基胍化学诱变为亚硝基胍诱变剂量6μL、诱变处理时间5 min,紫外辐照与亚硝基胍复合诱变为紫外辐照20 s,亚硝基胍诱变剂量2μL,诱变处理时间5 min。突变菌株U4、D4、UD1较原始菌株,菌落形态偏小、中间凸起,菌落颜色呈微粉色或白色,且其产苦马豆素含量均有显着变化,其中U4突变菌株产苦马豆素量平均增加16.02%(P<0.01)、D4突变菌株产苦马豆素量平均降低23.58%(P<0.01),UD1突变菌株SW产量平均增加21.87%(P<0.01),但D4、UD1突变菌株生长周期与出发菌株一致,均为24 d。【结论】通过紫外辐照诱变、亚硝基胍化学诱变、紫外辐照与亚硝基胍复合诱变方法,成功筛选出产苦马豆素含量变化较原始菌株差异较大的3株突变菌株U4、D4、UD1,这为后续利用高通量测序等分子生物学手段,在分子水平上阐释疯草内生真菌Alternaria Section Undifilum oxytropis关键基因、关键酶在其生物合成苦马豆素机制关系方面奠定研究基础。(本文来源于《中国农业科学》期刊2019年15期）
王毅,彭铭,高欣,赵宝玉,吴晨晨[6]（2019）在《苦马豆素致糖基转移酶活性改变对小鼠生殖激素分泌的影响》一文中研究指出苦马豆素是疯草主要有毒成分,抑制α-甘露糖苷酶的活性,引起N-聚糖加工过程失调。笔者课题组前期研究得出:苦马豆素致糖蛋白激素(促卵泡素和促黄体素)糖基化位点上糖链结构发生改变,引起促性腺激素功能发生改变。而苦马豆素中毒对家畜生殖激素分泌的调节机制尚不明确。苦马豆素腹腔注射对小鼠进行染毒,收集妊娠期和分娩期小鼠的血液、子宫和卵巢组织,检测糖基转移酶活性、生殖激素水平及其受体mRNA和类固醇限速酶蛋白质表达量。结果表明:在妊娠和分娩期,苦马豆素致子宫内膜固有层大量低聚糖蓄积,显着抑制N-聚糖加工过程关键糖基转移酶的活性(P<0.05);染毒组小鼠血液的生殖激素包括促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)、雌激素(E2)和孕酮(P4)水平显着低于对照组(P<0.05)。在整个妊娠周期,染毒组小鼠4种激素受体mRNA的表达量显着低于对照组(P<0.05)。在妊娠后期,染毒组小鼠3-β羟基类固醇脱氢酶(3-βHSD)和芳香化酶(CYP19A1)蛋白表达量显着低于对照组(P<0.05)。苦马豆素可使N-聚糖加工紊乱,引起促性腺激素分泌降低,进一步降低生殖激素受体和性类固醇激素限速酶的表达量,致使性类固醇激素分泌下降,导致生殖激素分泌紊乱,最终结果造成机体繁殖性能下降。(本文来源于《生态毒理学报》期刊2019年03期）
李欣[7]（2019）在《基于转录组对Alternaria oxytropis中苦马豆素合成相关基因的筛选与分析》一文中研究指出小花棘豆是世界草原危害较大的毒草之一,它可产生一种有毒的吲哚里西啶类次生代谢产物-苦马豆素(swainsonine,SW)。SW能抑制动物细胞α-甘露糖苷酶Ⅰ和高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ的活性,使细胞空泡变性,失去正常功能,中毒严重者甚至会死亡。在医学领域,SW一直被作为研究糖蛋白N-寡糖合成的工具药,上世纪80年代时又发现其具有良好的免疫调节和抗肿瘤作用,成为关注热点。课题组前期研究发现SW由小花棘豆内生真菌Alternaria oxytropis合成,而酵母氨酸还原酶(酵母氨酸脱氢酶)在真菌SW合成中具有重要作用。利用同源重组技术敲除该内生真菌的酵母氨酸还原酶基因(sac),获得缺失突变株M1,发现其SW水平降低。鉴于Alternaria oxytropis内生真菌SW合成途径中很多细节未知,故本研究对该内生真菌的野生株OW7.8和突变株M1进行了高通量转录组测序(RNA-Seq),基于测序结果我们筛选了与SW生物合成相关的Unigene,对所选Unigene的表达模式进行了qRT-PCR检测分析,继而从候选基因中选择可能与SW合成的关键基因进行克隆,为研究内生真菌中SW的合成途径及分子机制提供基础数据。另外,探索了不同光照及培养基条件对OW7.8与M1生长速率及SW水平动态变化的影响。研究结果如下:1.利用新一代高通量测序技术Illumina HiSeq~(TM) 4000分别对培养20d的OW7.8和M1转录组测序分析,共得到4791万条高质量序列读取片段(Clean Reads),进行de novo组装得到45634条Unigene,其可信度较高。其中5个基因上调、11213个基因下调。转录组数据的各项指标均表明测序质量较好。2.利用GO、KEGG等公共数据库信息进行比对分析,共鉴定出41个可能与SW生物合成相关的Unigene,从中推测了与真菌SW生物合成途径相关的酶,包括3个酵母氨酸脱氢酶、3个哌啶酸氧化酶、2个吡咯啉-5-羧酸还原酶及多个与羟化反应相关的CoA。3.推测了内生真菌SW生物合成的途径,认为包括P6C和P2C途径,其中Δ1-哌啶-2-羧酸还原酶、赖氨酸6-脱氢酶和糊精氧化酶/L-哌啶酸氧化酶参与到P6C中,1-吡啶-2-甲酸酯/1-吡啶-2-羧酸还原酶和Δ1-哌啶-2-羧酸还原酶参与到P2C中,酵母氨酸还原酶参与到两条途径的代谢中。认为1-酮基-吲哚里西啶是合成SW的直接前体,由羟甲基戊二酰CoA裂解酶(hydroxymethylglutaryl-CoA lyase)催化其羟化反应,最终合成SW。4.克隆了羟甲基戊二酰CoA裂解酶基因(Alhmgcl-1)的cDNA,并进行了生物信息学预测,为后期进行基因功能分析提供基础数据。5.OW7.8在CDA培养基上在暗培养条件下时生长最快(2.57±0.17mm/d),而M1在PDA培养基上在暗培养条件生长最快(4.93±0.10mm/d)。相同条件下的OW7.8的SW水平高于M1;不同菌株在相同培养条件、相同菌株在不同培养条件的SW水平达最大值的时间不同;相同菌株在不同的光照和培养基条件下,其SW水平差异不显着(P>0.05),而不同菌株在相同培养条件下,其SW水平差异显着(0.01<P<0.05)。(本文来源于《内蒙古师范大学》期刊2019-06-03）
赵利娜,卢萍[8]（2019）在《酵母氨酸还原酶影响真菌中苦马豆素的合成》一文中研究指出指出了苦马豆素(swainsonine,SW)是一种有毒生物碱,可抑制α-甘露糖苷酶活性,牲畜采食含SW的疯草会引起中毒。前期研究发现疯草小花棘豆的SW由其内生真菌合成,在α-氨基己二酸半醛+谷氨酸+NADPH+H~+酵母氨酸+NADP~++H_2O反应中真菌酵母氨酸还原酶为双向酶,逆反应催化酵母氨酸生成α-氨基己二酸半醛,经一系列反应生成SW,故酵母氨酸还原酶是合成SW代谢途径中的关键酶之一。对真菌SW合成途径中sac对SW合成代谢的影响进行了综述,旨在为研究真菌SW的生物合成分子机制提供基础数据,对草原上疯草的防治以及SW合理利用具有重要意义。(本文来源于《绿色科技》期刊2019年10期）
刘蒙蒙[9]（2019）在《围产期暴露苦马豆素对小鼠海马和嗅球神经发生的影响》一文中研究指出海马齿状回颗粒细胞下层(subgranular zone,SGZ)及室管膜侧脑室下区(subventricular zone,SVZ)是哺乳动物中两个终生存在的神经发生区域。其中,SGZ的神经发生对海马的结构以及学习和记忆功能的正常发挥都起关键作用。而SVZ的神经发生对嗅球的结构和功能有重要的作用。在神经发生(包括神经干细胞增殖、迁移、分化以及与其他神经元建立联系等)的过程中,任何的一个环节的异常都可能影响神经系统的功能。疯草俗称醉马草,是豆科棘豆属和黄芪属的有毒植物的统称。动物采食这类疯草后会出现“疯草病”,轻则影响自身的生长发育和生产性能,重则会导致其死亡。因此,疯草已成为世界范围内危害草原畜牧业最为严重的一类毒草。而苦马豆素(swainsonine,SW)是一种来自疯草的主要有毒物质;动物一旦疯草中毒后,会出现昏昏欲睡、厌食以及消瘦,并伴有精神沉郁和共济失调等神经性症状,甚至会出现癫痫等神经系统疾病。研究表明SW的毒性虽然是慢性且累积性的,但是其对神经系统的损伤不易修复,甚至可能导致永久性神经功能紊乱。此外,本实验室之前的研究表明SW影响成年小鼠的空间学习和记忆。因此,探究SW对神经系统的影响这一重要研究刻不容缓。本研究通过建立SW暴露的母鼠中毒模型,使用活体电穿孔,并结合BrdU标记、免疫荧光染色、western blot以及显微拍照等技术,研究SW对新生小鼠海马齿状回和嗅球早期神经发生的影响,结果如下:1.在建立母鼠SW中毒模型的过程中,母鼠的体重以及新生小鼠的体重和脑重均无明显改变。2.母体暴露SW,研究其对新生子代小鼠齿状回出生后的早期发育的影响。结果发现SW抑制齿状回神经祖细胞的增殖能力,导致新生颗粒细胞存活数量的减少;也引起颗粒细胞树突总长度和分支数降低。而且Sholl分析显示SW使颗粒细胞树突和同心圆之间的交叉点数量(代表树突的复杂程度)明显减少。在8.4 mg/kg SW处理组,齿状回门区NeuN~+和Reelin~+细胞数量均明显增加。此外,通过western blot发现,SW引起海马中小棘蛋白(spinophilin)和NeuN蛋白的表达水平明显降低,从而对海马的发育造成影响。3.母体暴露SW,研究新生子代小鼠嗅球早期发育的影响。SW使SVZ中神经干细胞的增殖能力下降和嗅球中新生细胞的存活数量减少、导致CR~+和TH~+中间神经元数量显着增加以及RMS中新生细胞形态和极性的异常,并使得新生颗粒细胞树突的总长度和分支数以及复杂性显着降低。综上所述,SW对海马齿状回和嗅球的生后早期神经发生都有一定程度的影响。SW能影响神经干细胞的增殖能力,改变中间神经元的数量以及颗粒细胞树突的复杂性。这些结果进一步证明了SW对神经系统的损害作用,可为降低或减少疯草(SW)对草原畜牧业的危害提供一定的参考。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2019-05-01）
宋润杰[10]（2019）在《金龟子绿僵菌合成苦马豆素SwnR基因功能研究》一文中研究指出目前研究表明,疯草类有毒植物的毒性成分-苦马豆素(Swainsonine)主要由叁类真菌产生,即豆类丝核菌(Rhizocronia leguminicola)、金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)和棘豆蠕孢菌(Alternaria oxytropis),而有关苦马豆素生物合成通路及催化酶基因尚不清楚。鉴于此,本试验以金龟子绿僵菌为研究对象,通过PEG介导的方法对金龟子绿僵菌合成苦马豆素疑似催化酶基因SwnR进行敲除并验证其功能,旨在探讨SwnR基因在金龟子绿僵菌苦马豆素生物合成通路中的作用,为深入研究苦马豆素生物合成通路及相关催化酶基因奠定理论基础。试验结果如下:1.根据GeneBank上的标准序列设计SwnR基因引物,以金龟子绿僵菌cDNA为模板,高保真扩增SwnR基因,PCR产物测序结果与SwnR基因序列BLAST比对同源性为99%。2.以pUC19载体为骨架,通过无缝克隆的方法构建含有苯菌灵抗性基因的金龟子绿僵菌SwnR基因的敲除载体,SwnR上游基因序列和下游基因序列分别连在苯菌灵抗性基因的两端。经PCR和测序鉴定,成功构建载体。3.选用不同发酵时间的金龟子绿僵菌菌丝,在不同的酶解组合及不同酶解时间下对金龟子绿僵菌原生质体的制备条件进行筛选。结果显示,金龟子绿僵菌在CS培养基震荡培养3d,菌丝由1%纤维素酶、1%蜗牛酶和0.5%溶壁酶处理并放置于30℃100rpm孵育3h,原生质体制备效果最佳。4.通过PCR将同源片段进行扩增后,利用PEG转化法将纯化后的片段转化至原生质体。再经苯菌灵筛选获得SwnR基因突变菌株,提取突变菌株DNA并进行PCR验证,SwnR基因敲除菌株构建成功。5.将上述试验获得的突变型与野生型菌株进行发酵培养,经Q Exactive高分辨质谱仪检测野生型与突变型菌株发酵液中苦马豆素的含量分别为119.652μg/mg和11.831μg/mg;采用RT-qPCR技术分析后,发现突变型菌株SwnR基因表达显着下调。本研究成功获得了金龟子绿僵菌SwnR基因敲除菌株,并证明SwnR基因在金龟子绿僵菌苦马豆素生物合成通路中起重要调控作用,这为后续SwnR基因在疯草棘豆蠕孢菌苦马豆素合成中的作用及家畜疯草中毒病防控研究提供重要理论参考。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2019-05-01）
苦马豆论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
[研究背景]疯草(Locoweed)一词源自于西班牙语"Loco",主要是指豆科黄芪属(Astragalus)和棘豆属(Oxytropis)有毒植物。目前,疯草已成为危害草原畜牧业发展的主要毒草,且广泛分布于世界各地。动物采食后可引起以神经机能紊乱为特征的中毒病,严重者可导致死亡,病理变化主要表现为组织细胞广泛的空泡样病变。此外,疯草中毒对牲畜生殖、内分泌及免疫系统也能产生一定影响,每年均造成巨大的经济损失,严重阻碍草原畜牧业的可持续发展。大量研究表明疯草的主要毒性成分苦马豆素(Swainsonine),可竞争性抑制Ⅱ类α-甘露糖苷酶活性,尤其是溶酶体α-甘露糖苷酶和高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ,最终导致细胞内糖蛋白合成异常和寡糖积累,这是引起疯草中毒的重要原因,但对其分子调控机制仍缺乏深入研究。[研究目的]目前研究表明,苦马豆素可诱导细胞发生程序性死亡,如凋亡,但凋亡与自噬并不是两个完全独立的过程,两者在发生时存在许多交叉信号通路;有资料显示,当自噬过程发生障碍时往往伴随着空泡样病变。本研究以大鼠肾小管上皮细胞(NRK)为模型,探讨苦马豆素对NRK细胞的毒性效应是否是凋亡与自噬的共同作用,以及调节凋亡与自噬的分子机制,以期为苦马豆素毒性及作用机制研究提供理论依据。[试验方法]本研究采用Westemblot技术检测凋亡及自噬相关蛋白表达水平,GFP-LC3-Ⅱ检测LC3-Ⅱ荧光聚点及免疫荧光检测LC3-Ⅱ与溶酶体膜蛋白LAMP-2的共定位,透射电镜观察自噬体结构,以及苦马豆素对溶酶体相关蛋白表达的影响。[试验结果]①苦马豆素引起NRK细胞凋亡:用400μg/mL苦马豆素处理NRK细胞不同时间,通过Western blot检测凋亡相关蛋白的表达,结果显示凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3、Bax、AIF、CytC以时间依赖性方式增加。随后用不同浓度的苦马豆素处理细胞24h,Cleavedcaspase-3、Bax、AIF、Cyt C呈现剂量依赖性方式增加。②苦马豆素诱导NRK细胞自噬:用400μg/mL苦马豆素处理NRK细胞不同时间,通过Western blot检测自噬标志物LC3-Ⅱ的表达,结果显示LC3-Ⅱ的表达以时间依赖性方式增加。随后用不同浓度的苦马豆素处理细胞24 h,LC3-Ⅱ表达以剂量依赖性方式增加,且各处理组中自噬相关蛋白Beclin-1表达量也升高;GFP-LC3-Ⅱ荧光结果显示,随着时间的延长和剂量的升高,荧光聚点增多;透射电镜观察细胞超微结构,可看到处理组细胞中自噬泡数量明显增多;用400μg/mL苦马豆素或10μM CQ单独处理以及苦马豆素与CQ联合处理细胞,结果显示苦马豆素与CQ均可以使LC3-Ⅱ表达显着上升,且联合处理组中LC3-Ⅱ表达呈一定累加效应,Western blot检测自噬底物p62的表达水平发现,p62蛋白水平增加,表明自噬降解可能受阻。③苦马豆素引起NRK细胞溶酶体障碍:自噬降解受阻可能是自噬体与溶酶体融合受阻,也可能是溶酶体降解功能受损。本试验通过检测LC3-Ⅱ与溶酶体膜蛋白LAMP-2的共定位情况,来判断自噬体与溶酶体的融合是否受阻。结果显示苦马豆素处理组LC3-Ⅱ及LAMP-2荧光反应共定位情况明显,但透射电镜观察苦马豆素引起的空泡样病变时发现,在空泡周围有大量溶酶体聚集,同时还存在少量自噬体,证明苦马豆素不影响自噬泡与溶酶体融合;但随着苦马豆素剂量的升高,溶酶体功能相关蛋白TFEB、LAMPI表达降低。[讨论]试验结果表明,苦马豆素引起细胞凋亡的同时也可诱导细胞发生自噬:苦马豆素可导致自噬晚期降解受阻,但不影响自噬体与溶酶体融合;苦马豆素可以使溶酶体相关蛋白表达降低,因此苦马豆素中毒引起的空泡变性很可能与溶酶体功能障碍有关,这与之前研究的结果(苦马豆素抑制甘露糖苷酶活性)相一致。本试验结果为深入探讨苦马豆素中毒机制研究提供新的线索。[结论]以上结果表明,苦马豆素在引起细胞凋亡的同时也可诱导NRK细胞发生自噬,同时可能引起溶酶体功能障碍,导致自噬降解被抑制,最终引起细胞死亡。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
苦马豆论文参考文献
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