蒋碧梅[1]2003年在《HSP70抑制过氧化氢所致C_2C_(12)肌原细胞Smac从线粒体释放及细胞凋亡》文中研究指明活性氧(reactive oxygen species,ROS)在心血管疾病发生发展中具有重要作用。大量的实验结果表明，心肌细胞凋亡亦是活性氧所致心肌损伤的重要细胞机制之一。Smac／DIABLO是新发现的一种促凋亡分子。它正常时位于线粒体膜间间隙，在凋亡诱导因素的作用下，可释放入胞浆，依次激活Caspases-9，3，促进细胞凋亡发生。因此，Smac／DIABLO是凋亡线粒体信号传导通路中的重要调节分子。Smac／DIABLO在心肌组织中含量丰富，但活性氧是否导致心肌细胞Smac／DIABLO从线粒体释放以及它是否促进活性氧所致的心肌细胞凋亡发生，目前国内外均未见报道。热休克蛋白对细胞损伤具有保护作用，不少研究表明，多种热休克蛋白如HSP70、HSP90可在Caspase的上游或下游起作用，抑制凋亡的发生。但是，热休克蛋白是否通过干预Smac／DIABLO的释放或作用来抑制凋亡发生，目前还不清楚。 为探讨上述问题，我们采用活性氧过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)处理C_2C_(12)肌原细胞建立细胞凋亡模型，并通过热休克预处理(42℃，1h，恢复12h)诱导热休克蛋白的表达，采用Hoechst 33258染色观察H_2O_2(0.5mmol／L)处理C_2C_(12)肌原细胞不同时间后细胞核形态学改变并计算凋亡核百分率，DNA抽提及琼脂糖电泳观察凋亡特征性”梯状”条带，利用免疫荧光及细胞成分分离后蛋白质印迹分析H_2O_2是否导致Smac／DIABLO从线粒体释放，采用Caspase活性定量检测试剂盒及蛋白质印迹分析Caspase-9，3的活化；转染Smac／DIABLO、HSP70基因，观察Smac／DIABLO、HSP70过表达对H_2O_2所致的C_2C_(12)肌原细胞Caspase-9，3的活化以及凋亡的影响。 结果发现，①H_2O_2处理1h后，Smac／DIABLO从C_2C_(12)肌原细胞 中南大学硕士学位论文 摘要线粒体释放入胞浆，Zh更明显；H刃。处理4h后，Caspase习，3开始活化，12h达高峰；HZO。处理 24h后，C厂；。肌原细胞显示特征性的凋亡形态改变，凋亡核百分率明显升高，DNA 电泳出现明显”梯状”条带。②热休克预处理可诱导 C0；。肌原细胞中 HSP90，HSP叩及。B。晶状体蛋白的表达增高，可抑制SmaC／DIABLO释放、Caspase习，3的活化及细胞凋亡的发生。③与单纯过氧化氢损伤组相比，Smac0IABLO过表达＋过氧化氢损伤组 Caspase习，3的活化、凋亡核百分率的升高及”梯状”条带的出现均更明显；④将Smac／DIABLO与HSP70共转染后，发现HSP70过表达可明显减轻HZO。所致、Smac所促的 C。C1。肌原细胞凋亡，表现为与空载体＋H。O。损伤组以及 Smac过表达＋H0。损伤组相比，Caspase子，3活化减少，凋亡细胞减少，DNA电泳未出现明显”梯状”条带，凋亡核百分率明显降低；⑤HSP70过表达可抑制HZOZ所致的CZC12肌原细胞Sin砒从线粒体向胞浆的释放。 上述结果表明，①线粒体信号通路在HZOZ所致的C2C12肌原细胞凋亡中发挥重要作用；②HZOZ导致Smac／DIABLO从CZC12肌原细胞线粒体释放，线粒体Smac的释放促进Caspase习，3的活化及细胞凋亡的发生；③热休克预处理可抑制H刃。所致的Smac＊IABLO从线粒体向胞浆释放、Caspase习，3的活化及细胞凋亡；④HSP70可通过抑制 Smac从线粒体的释放来抑制 H。O。所致的 C＃。肌原细胞凋亡。
蒋碧梅, 肖卫民, 石永忠, 刘梅冬, 唐道林[2]2004年在《HSP70抑制过氧化氢所致C_2C_(12)肌原细胞Smac/DIABLO从线粒体释放及细胞凋亡》文中进行了进一步梳理目的:Smac/DIABLO是近年发现的一种新的促凋亡蛋白,越来越多的研究表明Smac/DIABLO在肿瘤细胞及淋巴细胞凋亡中起着非常重要的作用。近几年,我们已研究证实Smac/DIABLO可促进活性氧过氧化氢所致C_2C_(12)肌原细胞中caspase-9、caspase-3的活化以及细胞凋亡的发生,热休克预处理可通过抑制H_2O_2导致的Smac/DIABLO从C_2C_(12)细胞线粒体释放,从而抑制caspase-9,caspase-3的活化及细胞凋亡。HSP70是细胞应激时热休克蛋白家族中表达增加最多的成员之一。热休克预处理是否主要通过HSP70在肌原细胞凋亡中起作用,目前还不清楚。本文拟研究HSP70对H_2O_2所致肌原细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:采用活性氧过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)处理C_2C_(12)肌原细胞建立细胞凋亡模型,采用基因瞬时转染技术使
参考文献：
[1]. HSP70抑制过氧化氢所致C_2C_(12)肌原细胞Smac从线粒体释放及细胞凋亡[D]. 蒋碧梅. 中南大学. 2003
[2]. HSP70抑制过氧化氢所致C_2C_(12)肌原细胞Smac/DIABLO从线粒体释放及细胞凋亡[C]. 蒋碧梅, 肖卫民, 石永忠, 刘梅冬, 唐道林. 国际心脏研究会中国分会第八届学术会议暨中国病理生理学会心血管专业委员会第十一届学术会议论文摘要集. 2004