沈世林[1]2004年在《扶正抑瘤颗粒抗肿瘤作用及其机制的研究》文中认为1 目的 通过动物实验和临床病例观察，探讨扶正抑瘤颗粒(FYK)的抗肿瘤作用及其机理。 2 方法 动物实验用H_(22)瘤株移植昆明种小鼠，造成腹水瘤和实体瘤，分为FYK大剂量组(D)、FYK小剂量组(X)、天仙胶囊阳性对照组(T)、荷瘤模型组(M)。等体积灌胃给药，用瘤体重量计算FYK的抑瘤率，用半数存活时间计算生命延长率。用流式细胞仪测定FYK对肿瘤组织NF-κB、细胞周期的影响及凋亡率；用激光共聚焦显微镜观察细胞内游离Ca~(2+)浓度的变化；用流式细胞仪测定肿瘤组织的p53、Bcl-2基因表达和外周血T淋巴细胞Fas／FasL蛋白表达。临床观察选择食道癌和乳腺癌病例，分为FYK治疗组和对照组，用流式细胞仪观察服FYK后肿瘤患者的T细胞亚群、NK细胞和NF-κB、细胞周期、凋亡率，用血流变仪检测全血粘度。 3 结果 动物实验表明：(1) FYK的抑瘤率和生命延长率较模型组明显提高，以FYK大剂量组作用最优，分别为51.72％和51.61％。(2) 模型组细胞G_(0/1)期比例最低，S期比例最高，用药各组的细胞G_(0/1)期比例明显上升(P＜0.01)，S期比例明显下降(P＜0.01)；FYK大剂量组NF-κB表达为26.51％，较模型组显着上升(P＜0.001)。(3)治疗各组细胞内[Ca~(2+)]i和凋亡率显着升高，与模型组相比较有显着差异(P＜0.001)。(4)治疗各组与模型组相比，外周血T淋巴细胞的Fas表达下降(P＜0.001)，FasL表达上升(P＜0.001)。(5)用药后肿瘤细胞p53表达较模型组增加(P＜0.001)，Bcl-2表达较模型组下降(P＜0.01)。 临床观察表明：(1)食管癌患者，治疗组CD4、CD4／CD8、NK细胞均高于对照组(P＜0.05)，全血粘度低于对照组(P＜0.05)。化疗组中服用FYK患者外周血白细胞数量较对照组明显升高(P＜0.05)。(2)食管癌患者，治疗组的NF-κB表达较对照组升高(P＜0.05)；治疗组较对照组肿瘤细胞G_(0/1)期比率明显上升(P＜0.05)，S期比较明显下降(P＜0.05)，凋亡率显着升高(P＜0.001)，具有显着性差异。(3)乳腺癌患者，治疗组与对照组相比CD4、CD4／CD8、NK细胞值明显升高(P＜0.005)，全血粘度明显下降(P＜0.005)。(4)乳腺癌患者，治疗组与对照组相比，NF-κB表达明显升高(P＜0.01)，G_(0/1)期比例明显上升(P＜0.01)，S期比例及细胞增殖指数(PI)明显下降(P＜0.01)。 4 结论 FYK具有抗肿瘤作用，以FYK大剂量组作用最为明显。FYK抗肿瘤的机理，与提高机体的免疫功能，抑制活化诱导的T细胞凋亡，降低全血粘度，影响与肿瘤增殖和凋亡相关的基因转录，影响细胞周期，调节细胞内钙离子信号转导，促进肿瘤细胞凋亡等作用相关。
程卫东[2]2005年在《扶正抑瘤颗粒（FYK）诱导H_（22）瘤细胞凋亡调控分子机制的研究》文中认为1 目的通过整体及离体实验,探讨扶正抑瘤颗粒(FYK)诱导 H22瘤细胞凋亡的分子调控机制。2 方法整体实验:观察扶正抑瘤颗粒(FYK)全方及拆方诱导 H22瘤细胞凋亡及其机制。接种 H22瘤细胞的昆明种小鼠随机分为 8 组:扶正组、抑瘤组、FYK 大剂量组、FYK 中剂量组、FYK 小剂量组、天仙胶囊组、环磷酰胺组、模型组和空白对照组。等体积灌胃给药,原位末端标记法(TUNEL 法)检测瘤细胞凋亡,免疫组织化学方法检测瘤组织中 Bax、Bcl-2 及 Caspase-3 的蛋白表达,电镜观察肿瘤细胞的形态学变化。离体实验:扶正抑瘤颗粒(FYK)全方分为空白组、FYK 大、中、小剂量组和天仙组共 5 组,制备中药含药血清并作用体外培养的 H22细胞。台盼兰染色计数法观察活细胞数量变化并绘制细胞生长曲线;MTT 法检测体外培养细胞的生长抑制率;流式细胞术检测细胞增殖周期;流式细胞术和原位末端标记(TUNEL)等方法检测细胞凋亡;免疫细胞化学 SABC 法观察凋亡相关蛋白 Bcl-2 和 Bax、P53 以及 Fas、FasL 和 Caspase-3的表达;激光共聚焦显微镜检测细胞内[Ca2+]的变化。3 结果整体实验结果:(1)FYK 全方的抑瘤效果显着高于拆方组(P<0.05);(2)FYK 显着诱导瘤细胞凋亡,增强巨噬细胞的吞噬能力;(3)FYK 显着激活 bax, caspases 基因,上调相应促凋亡蛋白(Bax,Caspase-3)的表达,同时下调抑制凋亡的 Bcl-2 蛋白表达。离体实验结果:(1)FYK 不同剂量组含药血清对 H22细胞的增殖活力有显着的抑制作用,与相应对照组比较有显着性差异(P<0.05);FYK 大、中、小剂量组对细胞的增殖抑制率分别为 79.3%,54.6%,31.3%,剂量越大,其对 H22细胞的抑制作用越明显,细胞抑制率越高,其抑制率与 FYK 剂量呈正相关;(2)流式细胞术结果表明,FYK 含药血清增加 G0/G1期细胞,减少 S 期细胞和 G2/M期细胞,细胞增殖指数(PI)降低,尤以中、大剂量组变化最为明显(P<0.05);(3)TUNEL 法检测,FYK 含药血清显着增加 H22细胞的凋亡率,流式细胞术检测,FYK 作用 72h 后,各用药组的 G0/G1期前出现凋亡峰,且存在量效、时效关系,用药剂量越大、作用时间越长,细胞凋亡率越高;各剂量组可见细胞 G0/G1期增多,S 期细胞和 G2/M 期细胞减少,尤以中、大剂量组变化为显着(P <0.01);
张武德[3]2014年在《扶正抑瘤汤诱导人肝癌裸鼠移植瘤细胞凋亡及自噬效应研究》文中研究说明目的：采用BALB/C-nu裸鼠建立两种人肝癌裸鼠移植瘤动物模型(Hu-7、HepG-2);以赵健雄教授临床抗癌经验方扶正抑瘤汤,灌胃治疗18天;同时给予注射用5-氟尿嘧啶及生理盐水腹腔注射进行对照。观察肿瘤生长曲线、抑瘤率；Tunel染色检测凋亡细胞；透射电镜(TEM)检测自噬体形成情况；Western blot检测自噬相关蛋白(Beclin1、Bnip3及LC3)表达变化等指标。观察和探讨扶正抑瘤汤诱导肿瘤细胞凋亡及自噬的分子生物学效应。方法：100只裸鼠分为10组,即空白组(生理盐水对照组),扶正抑瘤汤高、中、低剂量组,5-Fu组；每组10只,建立人肝癌细胞HepG-2和Hu-7移植瘤裸鼠模型；待肿瘤体积到约100mm3时开始用药,扶正抑瘤汤灌胃给药(每日一次),5-Fu组(每周两次)和生理盐水对照组采用腹腔注射(每日一次)；给药18天,于停药第二天各组处死裸鼠,剥离肿瘤称重,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率；留取肿瘤组织,Tunel染色检测扶正抑瘤汤对移植瘤细胞凋亡的作用；透射电镜(TEM)检测自噬体形成情况；Western blot检测自噬相关蛋白(Beclin1、Bnip3及LC3)表达变化。结果：扶正抑瘤汤高、中、低剂量组抑瘤率分别是49.9%,21.6%,8.2%；5-Fu组抑瘤率为74.2%;与空白组比较,扶正抑瘤汤高(0.6g)、中剂量组(0.3g)与5-Fu组均能抑制肿瘤生长,其中以高剂量组和5-Fu组效果最佳,扶正抑瘤汤低剂量组差异不明显(p>0.01);Tunel染色发现,与空白组比较,扶正抑瘤组和5-Fu组均可见到大量凋亡肿瘤细胞,其中以扶正抑瘤高、中剂量组诱导肿瘤细胞凋亡效果最佳,扶正抑瘤汤低剂量组和空白组比较则无明显差异；电镜结果显示：扶正抑瘤组和5-Fu组均可见到自噬小体增多,随着药物浓度降低自噬小体减少,之间呈正相关,其中以高剂量组效果最佳,空白组未发现自噬小体；Western-blot检测结果显示：与空白组比较,扶正抑瘤组和5-Fu组均可使自噬相关蛋白Beclin1、Bnip3及LC3表达上调,且与药物的浓度呈相关性,其中以扶正抑瘤高剂量组效果最佳。结论：扶正抑瘤汤对人肝癌HepG2和Hu-7裸鼠移植瘤细胞均具有抑制肿瘤细胞生长,诱导肿瘤细胞凋亡的作用,并且可激活肝癌HepG2和Hu-7细胞Beclin1、Bnip3及LC3蛋白的表达,从而诱导肿瘤细胞发生自噬,其中以药物高剂量组效果最佳。说明扶正抑瘤汤通过激活自噬是其发挥抗肿瘤的效应的机制之一。
王秀英[4]2007年在《固本抑瘤Ⅱ号对乳腺癌抑瘤作用及其机制的实验研究》文中认为乳腺癌是危害妇女健康的恶性肿瘤之一,居女性各类恶性肿瘤发病率和死亡率之首。乳腺癌成年女性发病约1‰,每年约有7.9万新病例发生,呈逐年增加趋势,因此乳腺癌的预防与治疗研究已经成为刻不容缓的任务。传统的手术及放、化疗过程对病变组织和正常组织的选择性较差,会引起各种并发症和后遗症,并造成机体的气血耗伤,使患者的生存质量及行为状态均较差,因此具有一定的局限性。中医药在乳腺癌治疗中所起的作用越来越不可替代。中医认为乳腺癌主要是由于脏腑虚损、血瘀痰凝毒结而成。癌症患者,尤其是中晚期癌症患者普遍存在血瘀证或气虚血瘀证,应对证采用益气活血法治疗。益气活血法属于“扶正祛邪”范畴,具有益气不留寇,驱邪不伤正的功效。固本抑瘤II号(GYⅡ)是北京市中医医院治疗气虚血瘀证肿瘤患者的有效方剂,常配合化疗应用。临床资料表明该方能够改善患者生活质量,减轻化疗的毒副作用。研究目的:探讨固本抑瘤Ⅱ号治疗乳腺癌的作用机制,为临床治疗乳腺癌提供理论依据。实验:1.固本抑瘤II号及联合化疗对MCF-7人乳腺癌细胞作用的实验研究制备GYⅡ水提物及GYⅡ的含药鼠血清。采用MTT法检测GYⅡ、表阿霉素(EPI)、GYⅡ+EPI及20%、10%、5%浓度的GYⅡ的含药鼠血清对MCF-7人乳腺癌细胞生长的影响。结果显示:GYⅡ对MCF-7人乳腺癌细胞生长表现为抑制作用,GYⅡ对MCF-7人乳腺癌细胞生长抑制达到30%、50%时的生药浓度分别是1.22mg/ml、3.25mg/ml;EPI随着浓度的增加对MCF-7人乳腺癌细胞生长的抑制作用增强,EPI的IC30、IC50的浓度分别为0.095μg/ml、0.228μg/ml;GYⅡ与EPI联合用药指数q值在0.85～1.25之间,提示两药联合应用有相加作用;20% GYⅡ的含药鼠血清在作用24h和48h后,对MCF-7细胞生长抑制率分别达到20.84%和23.91%,均大于20%,说明含药血清有细胞毒活性。2.固本抑瘤II号单独及联合化疗对EMT-6小鼠乳腺癌治疗作用的研究80只体重(19±1)g BALB/C雌性小鼠复制EMT-6小鼠乳腺癌动物模型。随机分为生理盐水对照组[Control]、EPI组[EPI](3mg/Kg腹腔注射)、GYⅡ低剂量组[S(GYⅡ)](13.7g/Kg·d灌胃)、GYⅡ中剂量组[M(GYⅡ)](27.3g/Kg·d灌胃)、GYⅡ高剂量组[H(GYⅡ)灌胃](54.6g/Kg·d)、GYⅡ低剂量+EPI组[S(GYⅡ)+ EPI]、GYⅡ中剂量+EPI组[M(GYⅡ)+ EPI]、GYⅡ高剂量+EPI组[H(GYⅡ)+ EPI]共8组,每组10只。观察GYⅡ单独及联合EPI对EMT-6小鼠乳腺癌移植瘤及转移瘤的作用。结果显示:H(GYⅡ)、EPI、H(GYⅡ)+ EPI平均出瘤时间的延迟率分别为22.45%、24.49%、28.57%;S(GYⅡ)、M(GYⅡ)、H(GYⅡ)组抑瘤率分别为13.6%、17.4%、34.38%,H(GYⅡ)组瘤重(1.722±0.555g)与对照组瘤重(2.624±0.582g)有显着差异(p<0.01),各给药组也不同程度地缩小了实体瘤的体积;S(GYⅡ)+ EPI组、M(GYⅡ)+ EPI组的q值均在0.85～1.15范围内,说明联合用药有相加作用;GYⅡ单独及EPI单独应用,对小鼠EMT-6小鼠乳腺癌自发性肺转移没有明显影响,S(GYⅡ)+ EPI组、M(GYⅡ)+ EPI组肺转移灶(分别为2.9±1.0个、2.7±1.3个)与对照组(5.5±1.5个)差异显着(p<0.05)。3.固本抑瘤II号对EMT-6荷瘤小鼠免疫功能的影响复制EMT-6小鼠乳腺癌动物模型。随机分为生理盐水对照组Control、EPI、M(GYⅡ)、H(GYⅡ)、M(GYⅡ)+ EPI 5组,每组10只。血球计数仪测量小鼠外周血的血常规,流式细胞仪测量外周血T细胞亚群水平;称量脾及胸腺的重量,计算脾指数及胸腺指数;取腹腔冲洗液中性红染色法测量巨噬细胞吞噬功能,用脾细胞采用MTT法检测荷瘤小鼠NK细胞活性、T淋巴细胞增殖功能。结果显示:GYⅡ可增加外周血RBC数量Hb的含量,改善肿瘤的贫血状态,对WBC的影响不明显;GYⅡ能增加EMT-6荷瘤小鼠胸腺指数,对脾指数影响不大;GYⅡ单独及联合EPI均能增加EMT-6荷瘤小鼠NK细胞活性,巨噬细胞吞噬功能,T淋巴细胞的增殖能力;GYⅡ能增加外周血CD3、CD4、CD8的水平;M(GYⅡ)组、M(GYⅡ)+ EPI组的EMT-6荷瘤小鼠的平均活存时间分别为33.3±7.3d和33.5±6.3d,与对照组23.6±6.87d比较,生存时间明显延长(p<0.05)。4.GYⅡ单独及联合EPI对荷瘤MCF-7人乳腺癌裸鼠实体瘤细胞周期和凋亡的影响48只体重(17±1)g BALB/C雌性裸鼠复制MCF-7人乳腺癌动物模型。待肿瘤直径生长至0.6cm左右时,随机分为6组,分别为Control、EPI(2mg/kg)、M(GYⅡ)、H(GYⅡ)、M(GYⅡ)+ EPI、M(GYⅡ)+ EPI,每组8只。给药25天后处死小鼠,摘取瘤组织称重后计算抑瘤率;流式细胞仪测量小鼠实体瘤组织的凋亡指数和细胞周期。结果显示:H(GYⅡ)的瘤重(1.59±0.39g)与对照组瘤重(2.49±1.35g)有显着差异(p<0.05),H(GYⅡ)+ EPI瘤重(0.70±0.55g)与对照组及EPI组瘤重(1.04±0.73g)均有显着差异(p<0.05);联合用药的q值均在0.85～1.15,提示其在抑瘤方面有相加作用。GYⅡ对乳腺癌瘤组织的细胞周期有一定的影响,GYⅡ随着剂量的增加肿瘤细胞在G0/G1期的分布有增加趋势,且H(GYⅡ)组的G0/G1值(54.74±2.11)与对照组(50.71±2.07)比较有统计学差异(p<0.05),而G2/M期的分布有减少趋势,对S期的影响不明显,联合用药组对肿瘤细胞周期的分布影响不明显。GYⅡ单独及联合EPI均显着促进瘤组织凋亡。结论:GYⅡ及含药鼠血清在体外能抑制MCF-7人乳腺癌细胞的生长,具有抑瘤和化疗增效作用;GYⅡ对EMT-6乳腺癌移植瘤及MCF-7乳腺癌移植瘤的生长有抑制作用,对EPI有化疗增效作用;并能提高荷瘤小鼠的免疫功能,改善贫血,延长荷瘤存活时间,能将肿瘤细胞阻滞在G0/G1期,促进实体瘤的细胞凋亡;GYⅡ联合EPI能减少自发性肺转移灶,而单独用药对自发性肺转移灶的作用不明显。
程卫东, 陈弘, 赵健雄, 王学习[5]2005年在《扶正抑瘤颗粒抗肿瘤作用的研究》文中指出目的:探讨复方扶正抑瘤颗粒(FYK)的抑瘤作用。方法:采用体内动物实验观察FYK对H2 2 小鼠的抑瘤作用,细胞凋亡的形态学变化,TUNEL法检测凋亡细胞。结果:FYK对接种H2 2 小鼠抑瘤率分别为36 .99% (小剂量)、4 6 .5 2 % (中剂量)、5 8.2 4 % (大剂量) ;FYK各治疗组凋亡指数与模型组相比较有显着差异(P <0 .0 1)。结论:FYK有明显的抑瘤作用,可诱导H2 2 瘤细胞凋亡来发挥抑瘤效率。
明海霞[6]2016年在《黄芪多糖联合顺铂对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用及机制研究》文中提出肺癌是目前发病率和死亡率均居首位的恶性肿瘤,其中以非小细胞肺癌为多见,约占肺癌所有病例的80%-85%。近二十年,肺癌的发病率每年以11%左右的速度递增,以此预计,我国肺癌的患者将在2025年达到世界“第一”。由于肺癌具有很强的侵袭、转移能力,所以是恶性度较高的肿瘤之一,且具有多种多样的生物学特性,致使早期诊断困难,大多数就诊时已是晚期,因此预后极差。在临床上,早期的手术治疗和晚期的化疗始终是肺癌最主要的治疗手段。顺铂(DDP)是多种恶性肿瘤的临床常用铂类化疗药物,能破坏DNA的结构和功能,产生抗肿瘤效应。但由于不同个体对该药物的敏感性不同,尤其是其对正常细胞的毒性作用,包括抑制骨髓的造血系统,肾脏毒性、神经毒性、耳毒性、肝毒性以及多药耐药性(MDR)等特点,限制了该类药物的应用。如果能在化疗的同时配合中医、中药,进行全身性的调理,则可以降低化疗对机体的毒副作用,提高肿瘤患者的生活质量。目前临床常采用联合用药的方式,这样即可降低化疗药物的给药剂量,又能减轻化疗药物的各种毒副作用,延缓MDR的产生,并可增强抗肿瘤疗效。近年研究证实,许多中药具有通过整体调节功能,增强免疫系统的作用,以促使肿瘤细胞死亡或诱导凋亡,从而抑制肿瘤的生长、转移等过程。甘肃道地药材黄芪是传统的扶正固本中药,归肺经,是补气药之一。黄芪多糖(APS)是其最重要的天然有效活性成分,是含量最多、免疫活性最强的一类物质,具有调节免疫、补益肺气、抗炎、增强巨噬细胞活性、抗肿瘤等多方面作用。因此,本研究根据中医扶正治疗的原则,初步探讨APS提高免疫功能、抗肿瘤、抗转移的分子机制及对顺铂的增效减毒机制。本课题分体外(细胞)、体内(动物)实验两部分进行研究。(1)体外实验通过噻唑蓝比色法(MTT)观察了不同浓度的APS对小鼠Lewis肺癌细胞(LLC)生长的影响;激光共聚焦显微镜(LSCM)下检测不同浓度的APS对LLC细胞骨架、线粒体膜电位(MMP)及细胞内Ca2+浓度的动态变化。(2)动物实验部分主要通过LLC荷瘤小鼠模型,以低、中、高剂量APS及与减半剂量的DDP联合使用后对其进行干预,在计算抑瘤率的基础上,计算荷瘤小鼠的瘤质量、体质量、有效体质量等变化,并运用酶联免疫吸附法(ELISA)、荧光定量聚合酶链反应(Q-PCR)、免疫组织化学(SP)、蛋白免疫印迹(WB)等方法研究其对瘤组织细胞生长、细胞因子及DDP所致免疫功能低下的影响;核因子-κB(NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的信号通路相关分子表达的影响;肿瘤组织Caspase-9、Bcl-2、Bax、Fas L等凋亡相关基因和蛋白表达的影响;血清Ⅳ型胶原蛋白(Col4)和透明质酸(HA)含量等表达的影响。1.MTT显示:终浓度为50μg/ml~400μg/ml的APS各时间点均可不同程度的抑制小鼠LLC的增殖(P<0.05),以APS 200μg/ml作用最显着。2.LSCM显示:(1)APS各剂量组中LLC的微管、微丝排列早期出现分布变化,晚期数量减少,断裂、塌陷,荧光着色变浅(P<0.05)。(2)APS各剂量组在24、48、72h的时间点上,均可以明显降低小鼠LLC的MMP、升高细胞内Ca2+浓度(P<0.05),两者均在24 h内变化最明显,即早期作用显着。这可能是其促进肿瘤细胞发生凋亡的机制之一。3.中、高剂量APS及联合用药各组对Lewis肺癌小鼠均有显着的抑瘤作用(P<0.05),并可明显改善Lewis肺癌小鼠的体质量、有效体质量、瘤质量(P<0.05),以联合用药组作用更为显着。q值在0.85~1.15之间,提示APS与减半剂量的DDP联合使用,疗效具有相加效应。4.APS及联合用药各组可提高Lewis肺癌小鼠血清中细胞因子IL-2、IL-6、IL-12、TNF-α的水平(P<0.05);提高实验小鼠的胸腺指数和脾脏指数,说明APS能增强DDP所致免疫功能低下小鼠的免疫功能,对免疫器官有一定的保护作用。5.Q-PCR和WB显示:(1)APS中、高剂量组肺癌移植瘤组织NF-κBp65、P53的表达明显降低(P<0.05或P<0.01);但对p38MAPK基因和蛋白的表达影响不明显。联合用药低、中剂量组降低NF-κBp65、P53及P38表达的作用弱于DDP组(P<0.05或P<0.01),但高剂量组作用与DDP组接近(P>0.05)。(2)APS高剂量组及联合用药各组中,肺癌移植瘤组织Bcl-2、Fas L明显下降,而促凋亡蛋白Bax的表达明显升高(P<0.05);联合用药低、中剂量组,对Bcl-2/Bax、Fas L的影响不及DDP组(P<0.05),而联合用药高剂量组与DDP组间无统计学差异(P>0.05)。提示APS可能通过下调肿瘤组织中NF-κB、P53基因和蛋白的表达,下调Bcl-2、Fas L等抗凋亡基因的表达,上调Bax等促凋亡基因的表达,使Bcl-2/Bax比例降低,诱导肿瘤细胞凋亡,这可能是APS发挥抑瘤、抗转移作用的分子机制之一。6.SP提示:APS中、高剂量组肺癌移植瘤组织Caspases-9的表达明显增强(P<0.05或P<0.01);联合用药低、中剂量组的作用弱于DDP组(P<0.05或P<0.01),而高剂量组作用接近DDP组(P>0.05)。提示APS可能通过提高移植瘤组织中Caspases-9的表达,诱导肿瘤细胞的凋亡。7.APS各剂量组及联合用药组均可降低小鼠血清中Col4和HA含量,联合用药组作用更明显(P<0.05或P<0.01)。提示APS可能通过阻止肺癌移植瘤细胞与基质的黏附、减少基底膜降解,从而抑制小鼠肺癌移植瘤的侵袭和转移。8.上述作用在APS与减半剂量的DDP联合使用时,可增强DDP化疗效果,从而降低DDP毒性,对DDP具有增效减毒作用。
曹治云[7]2013年在《扶正抑瘤颗粒对消化道肿瘤围化疗期免疫调节的基础与临床研究》文中研究指明目的：在临床应用及计算机分子对接模拟基础上推断FYG具有免疫调节功效,首先利用动物模型确认了FYG的免疫调节作用,继而在细胞水平进行了部分作用机制的探讨；回归临床评估扶正抑瘤颗粒(Fuzheng Yiliu Granules, FYG)影响消化道肿瘤患者围化疗期免疫调节及生活质量的临床疗效。方法：1.建立H22小鼠肝癌细胞的皮下移植瘤模型,然后随机分配到对照组(Vehicle,灌胃生理盐水),5-FU组(10mg/kg),5-FU+FYG组(10mg/kg+18g/kg)和FYG组(18g/kg),给药5天后测量肿瘤重量和体积,检测CD3、CD4、CD8、Treg、NK细胞的百分含量、血清中白介素2(interleukin-2, IL-2)和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor α, TNF-α)的浓度,肿瘤组织的凋亡情况及相关凋亡因子蛋白和基因的表达(Bax、Bcl-2、p53、C-myc)及5-FU靶酶胸苷酸合成酶(Thymidylate Synthase, TS)的表达水平。培养人肝癌细胞HepG2, FYG生药单独给药及联合5-FU给药后,噻唑蓝(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, MTT)检测细胞活力。SD大鼠灌胃FYG7天(高剂量组：25.2g/kg;中剂量组：12.6g/kg;氐剂量组：6.3g/kg),取含药血清后检测工L-2和TNF-α的浓度,含药血清干预HepG2细胞后检测细胞活力、细胞增殖及凋亡情况。2.按标准入选胃癌、大肠癌患者患者85例,按最小化随机分为治疗组50例、对照组35例；治疗组给予益气养阴中药联合FOLFOX4化疗方案,对照组给予安慰剂联合FOLFOX化疗方案。定期评估体力状况、生存质量、安全性。于基线期、化疗后第4周、第8周、研究结束时检测外周血T淋巴细胞及亚群(CD3、CD4、CD8、调节T细胞(Regulatory T cells, Treg)及CD4/CD8),自然杀伤细胞(Natural killing cells, NK),免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)及补体(C3、C4)浓度。结果：1.FYG单独使用表现出一定的抗肿瘤功效和诱导凋亡作用(与对照组相比P＜0.05),肿瘤组织中Bax基因表达明显上调(P＜0.05),FYG+5-FU组小鼠肿瘤组织中野生型p53基因表达显着上调(P＜O.05)。FYG联合5-FU给药后显着抑制了小鼠皮下移植瘤的生长且诱导肿瘤组织发生凋亡(与对照组相比P＜0.0l,与5-FU或FYG组相比P＜0.05),但未体现协同作用。FYG联合5-FU后上调了胸腺指数(与对照组相比P＜0.05)。,FYG上调了被5-FU抑制的WBC及LY细胞数量(FYG+5-FU vs5-FU, P<0.01; FYG vs vehicle, P<0.01)。FYG组与对照组相比显着增加外周血中CD3(R0.01),CD4(P＜0.01)及NK(P＜0.01)细胞的水平,抑制了Treg细胞的表达(P＜0.01)。FYG联合5-FU后增加了CD3和CD4的百分含量(与对照组相比P＜0.01),增加了CD3和NK细胞的百分比(与5-FU组相比＜0.05),降低了Treg的百分含量(与对照组相比P＜0.01,与5-FU组相比P＜0.01)。FYG组和FYG+5-FU组与对照组相比显着升高了血清中TNF-α的浓度(P＜0.01)上调肿瘤组织中Bax基因表达(与对照组相比P<0.05, P<0.01); FYG+5-FU组小鼠肿瘤组织中野生型p53基因表达显着上调(与对照组相比P＜0.05,P＜0.01)。2.FY复方中多糖含量约占其干重的63%,FY单独或联合5-FU使用体外均未表现明显的抗肿瘤功效。FYG含药血清与对照组血清相比含有更高浓度的IL-2和TNF-α(P＜0.01,P＜0.05),剂量依赖性的抑制肿瘤细胞活力(P＜0.01),诱导肿瘤细胞凋亡(P＜0.01)、将肿瘤细胞阻滞在S期(P＜0.01),抑制肿瘤细胞增殖(P＜0.05)。3.临床共入组病例85例,3例出组,可评价疗效病例82例,其中治疗组48例、对照组34例;治疗前二组基线资料分布均衡(P＞O.05)。治疗组相较对照组治疗后体力状况改善率提高了29.8%(P=0.025)；总生活质量评分提高(P=0.040)；二组间症状领域中疲劳、纳差项目评分下降有显着差异(P＜0.05)；治疗期间未见明显益气养阴中药相关的不良反应。治疗组治疗后CD3、CD4、CD4/CD8、IgG、IgA、IgM、C3、NK细胞均有明显提高(P＜0.05),CD8、C4无明显提高(P>0.05)：Treg明显降低(P＜0.05)。与对照组相比,CD3、CD4、CD4/CD8、IgG、IgA、C3、NK细胞差异均有统计学意义(P＜O.05)。结论：1.FYG显着改善小鼠肝癌模型接受化疗药物后的免疫功能状态,促进肿瘤组织的凋2.FYG需经体内代谢后才具有抑制肿瘤细胞增殖及促进凋亡的作用。3.FYG改善化疗期胃癌、大肠癌患者临床症状,使生理状况好转,减轻疲倦、纳差症状。提高患者的免疫功能,改善其免疫抑制状态,具有双向调节作用。
杨佳妹[8]2014年在《以肝癌为目标的扶正化瘀解毒方的筛选与研究》文中指出肝癌是严重威胁人类生命健康的恶性疾病,全球每年新发肝癌病例数达100万人以上,防治肝癌是医学界面临的重要问题。近年来,由于中医药治疗肝癌的整体调节作用及副作用较小等特点,受到世界医药界的广泛关注。在中医理论指导下,从中药中寻找开发有效、安全的抗肝癌药是一条新的途径。本课题通过以下实验进行抗肝癌中药复方的组方筛选与研究。第一部分基于复杂网络的治疗肝癌常用中药的用药规律分析运用复杂网络的方法,对2002年-2013年中医药治疗肝癌的文献进行总结分析,研究治疗肝癌中药的用药规律并发现新的中药复方。结果发现,治疗肝癌的常用中药主要以清热解毒药、活血化瘀药、补益药为主,常用的中药主要有白术、黄芪、茯苓、甘草、白花蛇舌草等。常用的经典方剂主要有四君子汤、逍遥散等。发现了以清热解毒、益气健脾等不同功效为主的四个核心组方。第二部分以肝癌为目标的扶正化瘀解毒方的组方筛选采用H22肝癌荷瘤小鼠模型,首先根据前期实验结果,比较清热解毒中药石见穿与半枝莲、白花蛇舌草的抑瘤作用。结果发现,同等剂量时,石见穿的抑瘤率达到了45.7%,明显强于白花蛇舌草的0.4%和半枝莲的30.3%。表明石见穿对H22肝癌小鼠的肿瘤生长具有较强的抑制作用。在此基础上,根据文献数据挖掘的结果,我们以黄芪、石见穿、女贞子、姜黄组成扶正化瘀解毒方,通过正交试验,对复方组成药物进行药量和配比的筛选与优化。结果发现,扶正化瘀解毒方的最佳配比组方是：黄芪45g、石见穿20g、女贞子20g、姜黄30g。第叁部分扶正化瘀解毒方提取工艺的优化应用正交试验设计,通过考察溶剂浓度、溶剂倍数、提取时间、提取次数四个因素,以药物的主要成分含量作为评价指标,对扶正化瘀解毒方的四味中药分别进行提取工艺的优化。最终确定的工艺为：姜黄的提取工艺为80%乙醇8倍量回流提取1小时,提取两次；黄芪的提取工艺为65%乙醇8倍量回流提取3小时,提取两次；女贞子的提取工艺为65%乙醇4倍量回流提取1小时,提取两次；石见穿的提取工艺为60%乙醇10倍量回流提取3小时,提取两次。工艺确定后,采用H22肝癌荷瘤小鼠模型,以抑瘤率为指标比较了扶正化瘀解毒方新工艺与简单醇提物之间的差异,实验表明扶正化瘀解毒方新工艺的抑瘤率可达55%,明显高于之前简单醇提物的38%的抑瘤率。第四部分扶正化瘀解毒方对H22肝癌荷瘤小鼠的影响采用H22肝癌荷瘤小鼠模型,研究扶正化瘀解毒方最优工艺对H22荷瘤小鼠肿瘤生长的影响。两次实验表明,扶正化瘀解毒方中剂量组(15g生药/kg)的平均抑瘤率可达46.9%,远高于金龙胶囊的18.3%。表明工艺优化后的扶正化瘀解毒方可明显抑制H22荷瘤小鼠肿瘤生长。采用H22肝癌腹水小鼠模型,观察扶正化瘀解毒方对小鼠生存期的影响。实验结果显示,扶正化瘀解毒方中剂量组(15g生药/kg)的生命延长率可达23.56%,低剂量组(7.5g生药/kg)可达42.79%,远高于环磷酰胺的20.94%和金龙胶囊的11.52%。表明工艺优化后的扶正化瘀解毒方可明显延长肿瘤小鼠的生存期。通过以上实验研究,本课题在中医药理论指导下,以肝癌为目标,通过数据挖掘与实验研究,初步筛选出了一个治疗肝癌的中药复方-扶正化瘀解毒方。
吉利[9]2009年在《健脾理气方药对Hca-F肝癌小鼠肿瘤细胞干预的机制研究》文中研究说明目的:原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一,发展速度快、恶性程度高、预后差、生存期短,严重威胁到人类的身心健康。随着现代医学治疗手段的发展,癌肿局部治疗方面的优势已非常突出,但在综合评估患者生存质量、生存期和远期疗效等方面仍然不尽人意。因此,着眼于整体以及整体病机对肿瘤形成和演变的影响,日益受到重视。越来越多的证据表明,中医药在改善肝癌患者的免疫状态、提高生存率方面有着独特的疗效。在中医药防治肝癌的临床实践中,应用与研究较多的为健脾理气法。健脾理气方药是我院临床多年来一直应用的一种有效的抗癌方剂,由人参、黄芪、云苓、白术、升麻、陈皮、柴胡、当归八味中药组成。从动物实验入手,探讨该方剂对肝癌细胞的干预机制可为中医药治疗肝癌提供可靠的科学依据。方法:建立小鼠脾虚肝郁的动物模型,再选用小鼠Hca-F腹水型肝癌细胞株,制作移植瘤动物模型。造模形成实体瘤后将小鼠随机分成荷瘤对照组、健脾理气方药组、环磷酰胺组和健脾理气方药+环磷酰胺组,各组分别以生理盐水、健脾理气方药、环磷酰胺、健脾理气方药+环磷酰胺灌胃。另设正常对照组,以生理盐水灌胃。停药后24小时取材。应用光镜技术观察健脾理气方药对Hca-F肝癌小鼠肿瘤细胞形态学的影响;应用流式细胞术检测健脾理气方药对Hca-F肝癌小鼠外周血T淋巴细胞亚群CD4~+、CD8~+以及CD4~+/CD8~+的影响:应用光镜-酶细胞化学染色法检测健脾理气方药对Hca-F肝癌小鼠外周血淋巴细胞Mg~(2+)-ATP酶与G-6-P酶活性的影响;应用电镜技术与TUNEL法检测健脾理气方药对Hca-F肝癌小鼠肿瘤细胞凋亡的影响:应用原位杂交法检测健脾理气方药对Hca-F肝癌小鼠肿瘤细胞端粒酶活性的影响;应用免疫组化法检测健脾理气方药对Hca-F肝癌小鼠肿瘤细胞突变型p53、Bcl-2、C-myc基因蛋白表达的影响。结果:1.光镜下观察,各实验组与肿瘤对照组比较,癌细胞排列较规整,体积变小。病理性核分裂较少,染色质浓缩,密度增高。间质可见较多的淋巴细胞等炎性细胞浸润,毛细血管内肿瘤细胞少见。周围坏死灶面积增大。2.健脾理气方药组抑瘤率为26.8%,健脾理气方药+环磷酰胺组抑瘤率为38.8%。说明健脾理气方药可以抑制肿瘤生长,且与环磷酰胺合用后抑瘤效果明显增强。3.流式细胞术检测结果表明,各治疗组在用药后CD4~+T细胞、CD4~+/CD8~+与荷瘤对照组相比均有明显升高,CD8~+T细胞较用药前降低,差异均有统计学意义(P＜0.05),健脾理气方药组、健脾理气方药+环磷酰胺组与环磷酰胺组相比,其治疗效果均无显着性差异(P＞0.05)。4.光镜-酶细胞化学染色法结果表明,与荷瘤对照组比较,各治疗组外周血淋巴细胞内Mg~(2+)-ATP酶、G-6-P酶活性明显增强,Mg~(2+)-ATP酶、G-6-P酶阳性细胞率与荷瘤对照组比较差异显着(P＜0.01),各治疗组之间上述两种指标无统计学差异(P＞0.05)。5.电镜下观察,可见细胞凋亡的特异性标志——凋亡小体形成。6.TUNEL法检测结果显示,各治疗组与荷瘤对照组相比凋亡细胞明显增多,凋亡指数增高,差异显着(P＜0.01),尤以健脾理气方药+环磷酰胺组增多最为明显。环磷酰胺组与健脾理气方药组之间凋亡指数无明显差异(P＞0.05),而健脾理气方药+环磷酰胺组与健脾理气方药组之间的凋亡指数具有统计学差异(P＜0.05),说明健脾理气方药与环磷酰胺合用在促进肿瘤细胞凋亡方面具有协同作用。7.原位杂交法结果表明,与荷瘤对照组相比,各治疗组端粒酶活性降低,差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),各治疗组之间端粒酶活性无统计学差异(P＞0.05)。8.免疫组化法结果表明,各治疗组的突变型p53、Bcl-2和C-myc基因蛋白的阳性表达率均低于肿瘤对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),各治疗组之间上述叁种基因蛋白的阳性表达率无统计学差异(P＞0.05)。结论:1.健脾理气方药具有抑制Hca-F肝癌小鼠肿瘤细胞增殖的作用,且与环磷酰胺合用后抑瘤效果明显增强。2.健脾理气方药具有增强Hca-F肝癌小鼠外周血淋巴细胞Mg~(2+)-ATP酶以及G-6-P酶活性的作用,具有调节Hca-F肝癌小鼠外周血T淋巴细胞亚群CD4~+、CD8~+以及CD4~+/CD8~+的作用,从而改善荷瘤小鼠的免疫状态。3.健脾理气方药具有降低Hca-F肝癌小鼠肿瘤细胞端粒酶活性的作用,从而促进肝癌细胞凋亡。健脾理气方药与环磷酰胺合用在促进肿瘤细胞凋亡方面具有协同作用。4.健脾理气方药具有降低Hca-F肝癌小鼠肿瘤细胞突变型p53、Bcl-2、C-myc基因蛋白的阳性表达率的作用。
张培影[10]2010年在《白花蛇舌草对宫颈癌细胞增殖、凋亡和Ki-67mRNA影响的实验研究》文中研究表明研究背景宫颈癌是一种发生在子宫颈上皮的恶性肿瘤,也是全球中仅次于乳腺癌的严重威胁女性健康和生命的恶性肿瘤。在我国其发病率占女性恶性肿瘤的首位,据世界卫生组织估计,我国每年新发病例13.1万,约占世界宫颈癌新发病例的28.8%。各个年龄段的女性都有可能患上子宫颈癌,然而,发病率及死亡率最高的人群集中在相对年轻的45岁至50岁的女性当中。近年来年青宫颈癌患者有明显上升趋势,保留生育功能及提高生活质量势在必行。宫颈癌好发于社会经济地位低下的妇女,可能和性卫生、HPV感染、早婚、吸烟等有关。发展中国家宫颈癌的发生率是发达国家的6倍,而且由于宫颈癌的早期筛查尚未普及,80%的患者在确诊时已经发展为浸润癌。目前对于宫颈癌早期主要采用手术治疗或放射治疗,对于中晚期以及复发、转移的宫颈癌患者多采用放射治疗结合全身化疗的治疗手段。临床发现,不同患者之间,其放化疗敏感性存在差异,导致治疗效果亦有很大不同。提高放化疗的剂量虽然在一定程度上可以提高疗效,但是不同患者的耐受性不同,并且毒副作用明显增加,严重降低患者生活质量。白花蛇舌草为茜草科一年生草本植物,具有清热解毒、活血化瘀、利尿通淋等功能。现代研究表明,白花蛇舌草主要化学成分有熊果酸、免疫多糖、乌索酸、白花蛇舌草素等,这些主要的有效成分具有增强免疫活性和抗肿瘤活性。临床观察发现白花砣舌草对宫颈癌疗效显着。Ki-67是一种核增殖标志基因,在宫颈癌等多种肿瘤高表达,这种高表达状态与肿瘤的发生、发展、复发以及对放化疗产生的抵抗性密切相关。研究目的本实验拟利用高表达Ki-67蛋白的宫颈癌细胞株Hela为研究对象,利用动物血清学的原理,研究白花蛇舌草对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及Ki-67基因的表达,探究白花蛇舌草对宫颈癌抑制作用及可能的分子生物学机制,为白花蛇舌草的进一步研究及临床应用提供实验依据，奠定理论基础。实验方法1.选用人宫颈癌Hela细胞培养24,36,72h后,MTT法检测细胞增殖,TNUEL法检测细胞的凋亡,采用RT-PCR检测Ki-67mRNA表达,免疫组化检测Ki-67蛋白表达。2.建立裸鼠人宫颈癌细胞移植模型及采用胃内灌药。取Hela细胞接种于雌性、4-6周龄BALB/C/nu裸鼠背部皮下组织内。当肿瘤生长至直径10mm时随机分为两组(n=10),对照组：荷瘤鼠不加以治疗,继续饲养到实验结束；给药组：白花蛇舌草水煎液灌胃,然后处死全部动物,取肿瘤分别称重,计算抑瘤率,肿瘤组织行免疫组化染色检测Ki-67蛋白的表达,TUNEL法检测细胞凋亡。实验结果1.白花蛇舌草对宫颈癌细胞有显着的抑制作用并可诱导Hela肿瘤细胞凋亡(P<0.05),Ki-67mRNA的表达下降(P<0.05),呈剂量和时间依赖性。2.白花蛇舌草对Hela细胞移植瘤生长有明显抑制作用,并可诱导Hela细胞凋亡,Ki-67蛋白的表达下降(P<0.05),并明显延长荷瘤小鼠的平均生存时间(P<0.05)。主要结论白花蛇舌草对宫颈癌Hela细胞具有明显抑制,诱导细胞凋亡,并抑制Ki-67基因的表达,这可能是其抑制肿瘤生长的分子生物学机制。白花蛇舌草清热解毒、软坚散结作用与其抑瘤增殖和诱导、促进肿瘤细胞凋亡有关。
参考文献：
[1]. 扶正抑瘤颗粒抗肿瘤作用及其机制的研究[D]. 沈世林. 北京中医药大学. 2004
[2]. 扶正抑瘤颗粒（FYK）诱导H_（22）瘤细胞凋亡调控分子机制的研究[D]. 程卫东. 北京中医药大学. 2005
[3]. 扶正抑瘤汤诱导人肝癌裸鼠移植瘤细胞凋亡及自噬效应研究[D]. 张武德. 兰州大学. 2014
[4]. 固本抑瘤Ⅱ号对乳腺癌抑瘤作用及其机制的实验研究[D]. 王秀英. 北京中医药大学. 2007
[5]. 扶正抑瘤颗粒抗肿瘤作用的研究[J]. 程卫东, 陈弘, 赵健雄, 王学习. 中医研究. 2005
[6]. 黄芪多糖联合顺铂对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用及机制研究[D]. 明海霞. 甘肃农业大学. 2016
[7]. 扶正抑瘤颗粒对消化道肿瘤围化疗期免疫调节的基础与临床研究[D]. 曹治云. 福建中医药大学. 2013
[8]. 以肝癌为目标的扶正化瘀解毒方的筛选与研究[D]. 杨佳妹. 北京中医药大学. 2014
[9]. 健脾理气方药对Hca-F肝癌小鼠肿瘤细胞干预的机制研究[D]. 吉利. 辽宁中医药大学. 2009
[10]. 白花蛇舌草对宫颈癌细胞增殖、凋亡和Ki-67mRNA影响的实验研究[D]. 张培影. 南京中医药大学. 2010
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