基于实验设计的抗PD-1/PD-L1单抗报告基因抗体依赖细胞介导的细胞毒效应生物学活性优化及验证方法的建立

论文摘要

目的利用实验设计（design of experiment,DOE）建立抗程序性死亡因子1（programmed cell death 1,PD-1）及其配体（programmed cell death-ligand 1,PD-L1）单抗基于报告基因的抗体依赖细胞介导的细胞毒效应（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC）生物学活性优化及验证方法。方法利用Jurkat-hFcγRⅢa-NFAT转基因细胞系作为效应细胞,分别以293FT-PD-1细胞系和CHO-PD-L1细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(Bright GloTM Luciferase Assay system)建立抗PD-1/PD-L1单抗的ADCC生物学活性检测方法,并运用DOE方法进行试验优化和方法学验证。结果抗PD-1/PD-L1单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程:y=（A-D）/[1+（x/C）B]+D,方法经优化后确定抗体量效范围分别为10 000～4. 833 ng·m L-1和2 000～0. 488 ng·m L-1,效靶比（effect target ratio,E∶T）为分别为6∶1和3∶1,诱导时间均为20 h。该方法具有良好的专属性;抗PD-1单抗4个不同稀释组回收率样本经3次检测,相对效价分别为（51. 74±2. 22）%、（77. 12±3. 14）%、（118. 71±2. 83）%和（156. 20±12. 99）%;对应的回收率分别为（103. 49±4. 44）%、（102. 83±4. 19）%、（94. 96±2. 26）%和（104. 14±8. 66）%,抗PD-L1单抗4个不同稀释组回收率样本经3次检测,相对效价分别为（54. 32±4. 75）%、（75. 24±4. 25）%、（127. 40±2. 43）%和（156. 82±3. 27）%;对应的回收率分别为（108. 64±9. 51）%、（100. 33±5. 67）%、（101. 92±1. 94）%和（104. 55±2. 18）%,上述结果的RSD均小于10%。结论本实验利用DOE设计成功建立基于报告基因的抗PD-1/PD-L1单抗ADCC生物学活性的优化及验证方法,该方法专属性强、重复性好,准确性高,可作为抗PD-1/PD-L1单抗ADCC生物学活性的评价方法。

论文目录

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘春雨,于传飞,崔永霏,肖启东,黄璟,王兰

关键词: 实验设计,单抗,单克隆抗体,生物学活性,报告基因,优化,验证

来源: 中国药学杂志 2019年24期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 药学

单位: 中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室

基金: 国家“重大新药创制”科技重大专项项目资助(2018ZX09101001-003)

分类号: R96

页码: 2010-2017

总页数: 8

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标签：实验设计论文;  单抗论文;  单克隆抗体论文;  生物学活性论文;  报告基因论文;  优化论文;  验证论文;