导读:本文包含了转座酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:Tn5转座酶,RNA-seq,文库构建
转座酶论文文献综述
许昊,刘小亮,胡玲,于海礼,黄毅[1]（2019）在《基于工程化转座酶的少量细胞RNA-seq文库构建的研究》一文中研究指出目的优化Tn5转座酶纯化和组装过程,建立少量细胞高质量转录组深度测序文库(RNA-Seq)的构建策略。方法构建Tn5转座酶表达载体pSUMO-Tn5,优化Tn5转座酶表达、亲和纯化和组装过程,比较不同组装方式的Tn5转座酶构建少量RAW264.7细胞RNA-seq文库效率。结果 pSUMO-Tn5转化细菌高效表达可溶性Tn5转座酶,亲和纯化获得高纯度Tn5蛋白,超滤纯化的Tn5转座体显着降低少量细胞RNA-Seq中的无效数据(P<0.05)。结论成功表达和纯化Tn5转座酶,超滤后Tn5转座体可降低少量细胞RNA-seq文库构建中的非特异扩增,建立一种高效的少量细胞RNA-Seq策略。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2019年09期）
周万飞,黄银久,秦中强,谈燚[2]（2019）在《睡美人转座酶对小鼠肝内胆管癌动物模型成瘤率的影响》一文中研究指出目的利用水流动力学质粒转染方法建立小鼠肝内胆管癌(ICC)动物模型,比较两种睡美人(SB)转座酶SB100与SB13对ICC动物模型成瘤率的影响。方法利用水流动力学注射方法将表达myr-Akt基因的转座子,NICD1转座子分别与SB100(A组)、SB13(B组)质粒溶液通过小鼠尾静脉注射入肝脏。注射NICD1和myr-Akt质粒作为C组,注射等量生理盐水作为D组。注射4周后处死,行病理学检查。免疫组织化学检测CK19和HA作为胆管细胞性肝癌诊断指标。结果 A组小鼠成癌率100%(20/20),B组小鼠成癌率70%(14/20),病理结果及免疫组织化学表明小鼠形成肿瘤为胆管细胞性肝癌,其中A组CK19强阳性表达率为55%,HA强阳性表达率为60%;B组CK19强阳性表达率为60%,HA强阳性表达率为65%;C、D组均无阳性表达。结论 SB100较SB13可显着提高成瘤率。(本文来源于《重庆医学》期刊2019年02期）
张孟思,朱德康,汪铭书[3]（2018）在《细菌插入序列中的转座酶和转座机制》一文中研究指出插入序列(insertion sequence, IS)是细菌中最简单的移动遗传因子,由两端的反向重复序列(inverted repeats, IR)和中间的转座酶(transposase)编码序列组成。在细菌中,因为插入序列的转座酶催化活性中心氨基酸序列不同,所以将其转座酶分为DDE转座酶、DEDD转座酶、HUH转座酶和丝氨酸转座酶。在转座过程中,根据插入序列是否有复制,将插入序列的转座分为复制型转座(replicative transposition)和非复制型转座(non-replicative transposition),而将形成夏皮罗中间体(Shapiro intermediate)的非复制型转座称为保守型转座(conservative transposition)。此外,插入序列通过不同的转座机制插入到基因编码区导致基因突变、缺失和倒置;或者插入到基因上游,通过自身启动子或与基因形成杂交启动子来影响插入序列下游基因的表达,从而帮助细菌抵抗复杂的环境变化。本文主要围绕细菌插入序列的特征、转座酶、转座机制和转座影响展开综述,以期为进一步研究插入序列的机制和插入序列在细菌中所起的作用提供参考。(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2018年10期）
赵茜[4]（2018）在《密码子优化后的金鱼Tgf2转座酶的原核表达、纯化及其酶活性研究》一文中研究指出转座子(transposon)是一类可以在基因组中改变插入位置的遗传因子,能够通过水平转移(horizontal transfer)的方式在自然界的不同物种间扩散传播。转座子所编码的活性转座酶能够启动其在生物体内的转座过程,然而脊椎动物中的一些转座子由于突变等原因大多数均已失去活性,成为了非自主性转座子,从而不能完成整个转座过程。2008年,在不同的金鱼品系中通过筛选,最终获得金鱼Tgf2转座子,它是继第一类具有自主转座活性的青鳉Tol2之后的第二类具有自主转座活性的转座子,属于hAT(hobo-AC-Tam)超家族。Tgf2转座子能够编码完整、具有自主转座活性的转座酶,在鱼类转基因、基因捕获等方面具有广阔的应用前景。本实验室从金鱼胚胎中分离得到了7种不同的Tgf2转座子mRNA转录本,同时得到了叁种氨基酸长度分别为686、650和577的Tgf2转座酶。目前这叁种长度的转座酶均已在E.coli中表达,为了进一步提高表达量及其表达稳定性,依据大肠杆菌对密码子的偏好性和简并性对686长度的转座酶密码子进行了优化。本研究目的则是利用pET28a(+)作为质粒载体,E.coli BL21(DE3)作为宿主菌,表达出密码子优化后的686长度Tgf2转座酶,并研究能够保存纯化后的转座酶稳定性的方法。同时用含有不同重复序列数目的探针研究其DNA结合活性及特异性,从而为构建具有更高活性的转座酶提供帮助。本实验主要分为四个部分。第一部分为重组表达载体的构建,首先依据大肠杆菌对密码子的简并性和偏好性对金鱼Tgf2转座酶的密码子进行优化,优化后的Tgf2转座酶命名为Tgf2-TPase~(83)。用限制性内切酶Bam I和XholI分别对含有Tgf2-TPase~(83)基因序列的克隆载体和表达载体pET28a(+)双酶切,用T_4 DNA连接酶将它们连接起来。根据转座酶和载体的特点设计合适的引物,PCR检测,用基因测序方法鉴定连接后的序列,序列对比结果表明,重组表达载体pET28a(+)-Tgf2-TPase~(83)构建成功。第二部分为重组载体pET28a(+)-Tgf2-TPase~(83)的原核表达、纯化和质谱鉴定。本实验中选择BL21(DE3)作为表达的宿主菌,使得重组载体质粒在BL21(DE3)中表达,表达条件为温度30℃、IPTG浓度1.0 mM、诱导时间6 h、转速150 rpm,用SDS-PAGE(SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳)分析。实验结果表明,在蛋白分子量大约为79.6 kDa处不但有相应的条带出现,而且表达后此处的蛋白条带有明显加深,所以目的蛋白表达成功。在SDS-PAGE中可以表达出可溶性蛋白,故我们采用反复冻融、超声破碎、离心取上清的方法用His Trap~(TM) HP柱子对重组蛋白纯化,分别用20 mM、40 mM、500 mM的咪唑对目的蛋白进行洗脱,将最终收集的纯化样品用SDS-PAGE分析,割胶并进行质谱鉴定。结果表明,密码子优化后的Tgf2-TPase~(83)表达量提高到了6.3%,纯度提高到了85%。同时,质谱结果表明,重组蛋白Tgf2-TPase~(83)即为金鱼Tgf2转座酶。第叁部分为重组蛋白Tgf2-TPase~(83)的保存稳定性研究。本实验中选取了四种不同的保存方法,分别为:加入20%甘油、直接冻干、加入冻干保护剂8%蔗糖和4%甘露醇后冷冻干燥,均置于-80℃中进行保存。用质粒pTgf2-EF1α-EGFP检测分别保存7 d和14 d后Tgf2-TPase~(83)的DNase活性,用琼脂糖凝胶电泳检测,通过BandScan扫描,将质粒的变化情况进行量化处理,得到不同的消化速度。结果表明,以新鲜酶液的DNase活性作为对照,20%甘油有助于保存Tgf2-TPase~(83)酶活性,其他叁种保存方法都没有20%甘油的保存效果好。第四部分为重组蛋白Tgf2-TPase~(83)的DNA结合活性及其特异性研究。首先,对用20%甘油保存的Tgf2-TPase~(83)酶进行DNA结合活性研究;其次,金鱼Tgf2转座子的重复序列包括5’AGTAA3’和5’GTACT3’,我们从Tgf2转座子左臂末端设计了四种含有不同重复序列数目的探针,分别为P_H,P_(M1),P_(M2),P_L,其中探针P_L中包含有与原始重复序列不同的碱基为5’GGTAA3’。实验中我们用葡聚糖凝胶层析来判断Tgf2-TPase~(83)是否具有DNA结合活性,主要是根据蛋白与探针结合后的紫外吸收值是否有增加。同时,用蛋清溶菌酶作为阴性对照,判断Tgf2-TPase~(83)的DNA结合活性是否具有特异性。结果表明,用20%甘油保存7 d、14 d、30 d时的Tgf2-TPase~(83)酶是具有DNA结合活性的;含有不同重复序列数目的探针与重组蛋白Tgf2-TPase~(83)的DNA结合活性是不同的,重复序列数目越多,其结合活性越高。另外,阴性对照实验结果表明,Tgf2-TPase~(83)的DNA结合活性是具有特异性的。通过密码子优化后的Tgf2转座酶不仅增加了其表达量(>6.3%),而且纯化后其纯度(>85%)也得到了提高。采用原核表达系统获得的可溶性重组蛋白Tgf2-TPase~(83)不仅为鱼类转基因提供了更加有效的手段,而且也促进了转座子基因捕获、基因捕获和鱼类遗传育种等方面的应用。(本文来源于《上海海洋大学》期刊2018-04-01）
司蕊蕊,赵茜,卢梦琪,邹曙明,蒋霞云[5]（2017）在《金鱼Tgf2转座酶的原核表达及其DNA结合活性》一文中研究指出金鱼Tgf2转座子基因属于Hobo/Activator/Tam3(hAT)超家族,其编码的活性转座酶能在多种鱼类转座中介导基因插入及诱变,因此在鱼类重要性状主控基因的筛选、功能解释及育种等方面具有重要的应用前景。鉴于Tgf2转座酶基因(JN886591)存在众多稀有密码子,本研究依据大肠杆菌对密码子的偏好性,对金鱼Tgf2转座酶基因进行密码子优化,所得Tgf2转座酶基因连接原核表达载体p ET-28a(+),将重组载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)细胞。该大肠杆菌细胞在培养温度37℃、OD600≈0.5时用IPTG诱导获得高效表达,即菌体中含有8.8%的重组蛋白,上清液中含有4.0%重组蛋白。采用亲和层析纯化从菌体上清液中分离得到分子量约70 ku的可溶性重组蛋白,经MALDI-(TOF)/TOF串联质谱鉴定其为重组Tgf2转座酶。进而采用分子排阻色谱法研究转座酶的DNA结合活性,结果表明:所得重组Tgf2转座酶能识别并结合含Tgf2转座子特异性亚末端重复序列的DNA探针,即启动转座。采用原核表达体系高效获得重组Tgf2转座酶,为其作为工具酶应用于鱼类生物学研究奠定必要的基础。(本文来源于《上海海洋大学学报》期刊2017年03期）
司蕊蕊[6]（2017）在《金鱼Tgf2转座酶的原核表达、纯化及体外活性研究》一文中研究指出转座子是一类能够在基因组中移动的片段,其过程叫做转座。随着多个基因组测序计划的进行,原核和真核生物界陆续发现众多转座子,转座子因此被认为是自然界变异和进化的重要推动力之一。自主的DNA转座子能编码活性转座酶以介导转座过程,但由于受到来自宿主的钝化作用,到目前为止在自然界生物体内发现的具有天然活性的转座子很少,Tgf2是发现的第二个具有天然活性的脊椎动物转座子。Tgf2属于h AT超家族,它首先在我国的金鱼(Carassius auratus)中发现,能编码完整、具有活性的转座酶,能够介导转座,是有潜力的鱼类遗传学工具之一,因此在鱼类重要性状主控基因的筛选、功能解释及育种等有的广泛的应用。本研究室得到的Tgf2转座子能够编码3种Tgf2转座酶。目前这3种不同长度的转座酶在E.coli Rosetta1(DE3)内得到表达。鉴于E.coli BL21(DE3)菌株表达外源蛋白有更高的效率和稳定性,所以本研究根据大肠杆菌的密码子偏好性,优化并合成了金鱼Tgf2转座酶编码区基因,与p ET-28a(+)载体重组,采用E.coli BL21(DE3)作为宿主菌株,以期获得Tgf2转座酶的高效表达。本研究实验分为五个部分。第一部分内容为Tgf2转座酶的生物信息学分析。通过SOPMA、I-TASSER服务器,分析模拟转座酶的二级结构、结构域以及叁级结构,找到转座酶的催化元件,分析与转座酶活性相关的功能域。第二部分内容为金鱼Tgf2转座酶原核表达载体的构建。根据大肠杆菌的密码子偏好性,优化并合成了金鱼Tgf2转座酶编码区基因Tgf2TP Plus,对Tgf2TP Plus基因序列所在的克隆载体p UC57-simple-Tgf2TP Plus和表达载体p ET-28a(+)进行Bam HI和XhoI位点的双酶切,回收之后通过T4DNA连接酶连接,转化到E.coli DH5α细胞内,根据重组载体序列设计合适的引物,通过PCR扩增,Bio Edit测序比对。结果显示,成功构建了重组载体p ET-28a(+)-Tgf2TP Plus。第叁部分内容为重组蛋白的诱导表达。从E.coli DH5α细胞内提取重组质粒p ET-28a(+)-Tgf2TP Plus,转化到大肠杆菌BL21(DE3)细胞。通过IPTG诱导表达重组蛋白。结果显示,在低吸光度(OD600=0.3-0.4)和低温(22℃)的条件下没有重组蛋白的表达,在37℃、OD600为0.5条件下,才会有重组蛋白的表达。之后,对时间、IPTG浓度和温度进行优化。结果表明,在诱导时间0-6 h之间,重组蛋白的表达量随着时间的增长而逐渐增加;在6 h-10 h之间,重组蛋白的表达量随着时间的增长并没有明显的变化,并且由于6 h时菌体的浓度较高,所以本实验采取诱导时间为6 h。诱导剂浓度为1.0 mmol/L时目的蛋白的表达量最高,本实验采取常规表达诱导剂浓度1.0 mmol/L。在28℃-37℃温度范围内,重组蛋白的表达在28℃和30℃表达量较高,由于30℃菌体浓度较大,所以本实验采取30℃诱导表达。因此,本实验选择30℃、OD600=0.5,1.0 mM IPTG浓度诱导表达6 h。SDS-PAGE电泳分析,在约70 kDa处有很深的蛋白条带,和预测的已知分子量接近。第四部分内容为重组蛋白的纯化和鉴定。通过SDS-PAGE分析确定E.coli BL21(DE3)菌株能够表达出可溶的重组蛋白。表达的重组蛋白带有His?Tag标签,可以利用镍柱亲和层析的方法将重组蛋白纯化出来。因此,收集诱导表达菌体,细胞破碎后上清液通过镍柱纯化,收集的目的组分进行SDS-PAGE分析。结果表明,得到了较高纯度的重组蛋白,并且重组蛋白的分子量与预测的已知分子量接近。通过MALDI-(TOF)/TOF串联质谱鉴定,确定表达的重组蛋白即为金鱼的Tgf2转座酶。第五部分内容为金鱼Tgf2转座酶体外活性的研究。主要包括DNA结合活性和消化活性。对于DNA结合活性,本实验采取了葡聚糖凝胶层析的方法,DNA结合活性的判断是根据转座酶和DNA探针结合的复合物,使紫外吸收值发生变化。消化活性是通过质粒和转座酶混合反应,利用琼脂糖凝胶电泳检测,观察质粒的变化。实验采用Tgf2左臂的末端重复序列作为DNA探针。结果表明,金鱼的Tgf2转座酶和探针能够发生特异性结合,且结合活性不受探针浓度的影响;金鱼的Tgf2转座酶具有体外切割活性。采用原核表达体系不仅获得高效重组Tgf2转座酶,也为其作为工具酶应用于鱼类生物学研究奠定了必要的基础,并且为得到高活性的转座酶提供了可能。(本文来源于《上海海洋大学》期刊2017-05-01）
齐淑圆,Majid,ESHAGHI,Deying,SUN,何靖,杨小杭[7]（2016）在《piggyBac转座酶的瞬时表达对莱茵衣藻体内piggyBac转座子的作用》一文中研究指出piggy Bac转座系统作为一种遗传修饰的工具,在很多生物体如哺乳动物、昆虫、酵母中已经得到了广泛应用。然而,目前piggy Bac转座系统在绿藻—莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardti)中是否有活性很少有人研究。本研究构建含有一个拷贝或多个拷贝并且能够稳定表达piggy Bac转座元件的莱茵衣藻藻株。然后在含有转座元件的藻株中瞬时表达普通的piggy Bac转座酶和密码子优化后的piggy Bac转座酶,通过限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)分析piggy Bac转座元件的转座现象。转座酶转入莱茵衣藻细胞内一周和两周之后与转入之前的RFLP图谱对比,有很明显的差异。转入转座酶一周后的TR1藻株原有的1.5 kb大小的片段消失,同时出现了3条新的片段:2.8、4.2和6.5 kb。两周之后,这3条片段又发生了变化,表明转座现象存在并且持续发生。转入密码子优化后转座酶一周后的TR3藻株中,1.5、3和4 kb大小的片段没有发生改变,但是6.5 kb大小的片段消失了,与此同时新出现了一个2.8 kb大小的片段。两周之后,TR3的限制性片段多态性图谱并没有发生变化。为了检测转座酶是否成功转入细胞中,我们在新的接头序列两侧进行侧翼PCR,同时对PCR产物进行序列比对分析,结果显示,piggy Bac转座子偶尔会在非常规性位点5'-TTT-3'和5'-ACGCAG-3'处发生剪切,而常规性剪切位点发生在5'-TTAA-3'处。研究结果表明,piggy Bac转座酶对莱茵衣藻体内piggy Bac转座子具有转座作用,piggy Bac转座系统可以用于莱茵衣藻的遗传学修饰。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2016年11期）
曹守莹,白长存[8]（2016）在《PiggyBac转座酶转基因斑马鱼模型的初步建立》一文中研究指出目的构建Piggy Bac转座酶转基因斑马鱼模型。方法利用Cytomegalovirus(CMV)启动子驱动Piggy Bac转座酶基因与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因共表达,通过显微注射后绿色荧光蛋白的表达筛选Piggy Bac转座酶转基因斑马鱼。结果建立了能够传代的Piggy Bac转座酶转基因斑马鱼模型,通过对增强型绿色荧光蛋白(EGFP)进行定期观察确定了Piggy Bac转座酶的时间和空间表达方式。提取转基因斑马鱼基因组DNA,PCR鉴定确定转基因斑马鱼基因组DNA中有Piggy Bac转座酶基因片段插入。结论初步建立了Piggy Bac转座酶转基因斑马鱼模型,为PB转座子在斑马鱼中的应用提供了重要的工具资源。(本文来源于《牡丹江医学院学报》期刊2016年04期）
齐淑圆[9]（2016）在《piggyBac转座酶瞬时表达对莱茵衣藻体内piggyBac转座子的作用》一文中研究指出piggyBac (PB)转座子系统是一个有效的遗传修饰工具,它是通过剪切-粘贴机制来发挥作用的。其作用已经在很多生物体内被证实,比如哺乳动物、昆虫和酵母。然而在绿色微藻一莱茵衣藻体内是否有活性,却很少有人研究。为了解决这一疑问,本课题首次构建了能在莱茵衣藻体内稳定表达的PB转座子元件,并且获得了体内含有一个或多个PB转座元件的莱茵衣藻藻株。我们在含有PB转座元件的藻株内瞬时表达莱茵衣藻体内原始的转座酶和密码子优化后的转座酶,并且用限制性片段长度多态性分析手段来检测PB元件的转座效果。通过限制性片段长度多态性分析图谱上不同大小片段的消失和出现,来判别PB转座现象是否发生。通过连续接种的方法来检测转座现象是否可以持续发生。实验结果表明,将含有普通转座酶和密码子优化后的转座酶表达盒转化进入细胞体内一周和两周之后,PB元件的限制性多态性图谱会有不同程度的改变。同时我们发现非常规性的剪切会发生在短的重复序列5'-TTT-3'和5'-ACGCAG-3',常规性的剪切位点是5'-TTAA-3'。在常规性位点发生剪切的细胞不会存活,非常规性剪切使得部分细胞能够存活下来。以上结果可以说明,在莱茵衣藻中,转座酶对细胞内PB转座元件的表达具有诱导作用。因此,PB转座系统可以用于莱因衣藻遗传修饰的研究。(本文来源于《浙江大学》期刊2016-05-01）
沈晓丹[10]（2016）在《金鱼Tgf2转座酶功能性结构域的研究》一文中研究指出转座子是基因组中存在的一种可从一个位点“跳跃”到另一个位点的特殊序列,在非同源基因之间也可完成“跳跃”过程的DNA片段。转座子可分为两个大种类:反转录转座子和DNA转座子。反转录转座子在自然界中广泛存在,但在高等植物中的存在更为丰富。另一类别为DNA转座子,以DNA-DNA方式存在的转座子(class II TEs),它可以通过DNA复制或者直接剪切来获得“跳跃”片段,再插入到DNA序列中。此类转座子又细分为两类,分别是自主转座子和非自主转座子。本实验中的主要实验对象Tgf2转座子,正是class II TEs转座子中的自主性DNA转座子。Tgf2转座子在金鱼中首次被发现,隶属于hAT超家族,是目前发现的第二例在脊椎动物中具有自主转座活性的DNA转座子。该转座子全长为4720bp,包含有四个开放阅读框,可转录出最长686氨基酸的转座酶蛋白。转座子发挥功能需要两个必要条件的参与,要有特异性不对称的末端重复序列,以及具有活性的转座酶。因此Tgf2转座子,作为一种具有自主活性的转座子,转座酶在其发挥功能的过程当中发挥了至关重要的作用,它是催化DNA断裂和重组的关键元件。在本文中,针对Tgf2转座酶的功能性结构展开了一系列预测与研究。(1)首先利用SWISS-MODEL蛋白分析、Phyre2蛋白分析系统,对Tgf2转座酶蛋白同源建模和折迭识别建模,进行蛋白质结构分析预测。通过对其氨基酸序列的全序列和部分序列比对,得到在Tgf2转座酶接近N端的部分具有一个锌指BED结构域(65-120aa)的结构,在与模板的比对得到C2H2关键位点,该锌指结构域与顺式调控元件的识别、结合有关;在锌指结构下游具有一个“螺旋-转角-螺旋”(HTH)结构(153-213aa),起到转座酶聚合形成二聚体的作用;而在HTH的下游发现一个较长的结构域,类RNase H催化结构域(211-683aa)。类RNase-H催化结构域中一般存在具有高度保守的活性位点,因此利用Clustal X 1.83比对了Tgf2转座酶与其他此家族的序列得到了叁个保守的位点DDE(228aa、295aa、648aa)。利用cNLS mapper分析Tgf2转座酶氨基酸全序列,预测到一段长度为15aa的单分型核定位信号llfspkrarldtnnf。(2)为研究tgf2转座酶蛋白质的核定位信号情况,利用已有的tgf2转座酶cdna全长序列tgf2tp,根据核定位信号一般研究方法,得到叁种缺失突变的序列,分别是删除了tgf2转座酶n端锌指bed结构域tgf2tp△120n;c端31个氨基酸tgf2tp△31c;以及保留了cnlsmapper预测的序列tgf2tp△16c,即删除预测结果下游剩余的16个氨基酸。将不同长度的dna序列构建入带有egfp绿色荧光蛋白的质粒pegfp-c1中,分别通过脂质体转染瞬时转染入293t细胞中。结果表明,完整的tgf2转座酶具有一定的核定位倾向,39.93%的比例完全进入到细胞核中,细胞质中无荧光表达;切除了n端锌指bed结构域的tgf2转座酶结果与完整tgf2转座酶相似,38.33%的蛋白完全进入到细胞核中,说明锌指bed结构中不含有影响蛋白定位的结构;当转染pegfp-c1-tgf2tp△31c,没有细胞可以单独完全的在细胞核中表达荧光,仅有67.17%细胞其荧光弥散分布在整个细胞中,说明荧光蛋白无法完全定位入细胞核中;但是转染pegfp-c1-tgf2tp△16c即保留了预测的核定位序列后,40%细胞可在细胞核中独立表达即细胞质中则无荧光表达。因此得到结论,tgf2转座酶具有进入细胞核的能力;cnlsmapper的预测的序列llfspkrarldtnnf,是可以影响tgf2转座酶蛋白定位倾向的条件。(3)为探究tgf2转座酶中类rnaseh催化结构域中的活性中心dde是否会影响转座体系的效率。在实验中,设立两个对照组,阳性对照为原始的tgf2转座酶pcs2-tgf2tp体外转录的mrna与供体质粒ptgf2-ef1α-egfp注射胚胎;阴性对照为仅注射供体质粒ptgf2-ef1α-egfp。实验组为,利用点突变方法将叁个关键氨基酸突变为d228n、d295n、e648q;并得到叁种辅助质粒pcs2-tgf2tpd228n、pcs2-tgf2tpd295n、pcs2-tgf2tpe648q,将其体外转录为mrna,分别同相同的供体质粒dna(ptgf2-ef1α-egfp)一同打入到1-2细胞器的斑马鱼胚胎中。分别观察12小时、24小时和出膜后平游期斑马鱼的荧光表达情况。在观察中可以发现突变后的mrna削弱了介导供体质粒在斑马鱼中表达绿色荧光的水平,出膜后其身体的荧光表达仅在其背部肌肉上少量表达,与可以通体表达的原始tgf2转座酶mrna形成明显对比,表达更接近于阴性对照组。将饲养的实验鱼提取dna,利用pcr检测egfp标记基因的阳性率,叁种点突变的整合率均与阴性对照组相一致,阳性率相比原始转座酶差异明显。可以说明,点突变后的Tgf2转座酶蛋白的功能发生了变化,并造成转座效率明显下降;进一步验证类RNase-H催化结构域的活性中心DDE对转座体系的高效率转座具有重要意义。(本文来源于《上海海洋大学》期刊2016-04-01）
转座酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的利用水流动力学质粒转染方法建立小鼠肝内胆管癌(ICC)动物模型,比较两种睡美人(SB)转座酶SB100与SB13对ICC动物模型成瘤率的影响。方法利用水流动力学注射方法将表达myr-Akt基因的转座子,NICD1转座子分别与SB100(A组)、SB13(B组)质粒溶液通过小鼠尾静脉注射入肝脏。注射NICD1和myr-Akt质粒作为C组,注射等量生理盐水作为D组。注射4周后处死,行病理学检查。免疫组织化学检测CK19和HA作为胆管细胞性肝癌诊断指标。结果 A组小鼠成癌率100%(20/20),B组小鼠成癌率70%(14/20),病理结果及免疫组织化学表明小鼠形成肿瘤为胆管细胞性肝癌,其中A组CK19强阳性表达率为55%,HA强阳性表达率为60%;B组CK19强阳性表达率为60%,HA强阳性表达率为65%;C、D组均无阳性表达。结论 SB100较SB13可显着提高成瘤率。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
转座酶论文参考文献
[1].许昊,刘小亮,胡玲,于海礼,黄毅.基于工程化转座酶的少量细胞RNA-seq文库构建的研究[J].第叁军医大学学报.2019
[2].周万飞,黄银久,秦中强,谈燚.睡美人转座酶对小鼠肝内胆管癌动物模型成瘤率的影响[J].重庆医学.2019
[3].张孟思,朱德康,汪铭书.细菌插入序列中的转座酶和转座机制[J].中国生物化学与分子生物学报.2018
[4].赵茜.密码子优化后的金鱼Tgf2转座酶的原核表达、纯化及其酶活性研究[D].上海海洋大学.2018
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