杨洪伟[1]2003年在《caveolin-1在非小细胞肺癌中的表达及其意义的研究》文中认为目的 肿瘤的发生和发展是一个基于多种基因变化的多阶段的过程。原癌基因的激活和抑癌基因的失活最终通过对信号转导，细胞周期和凋亡的影响而导致肿瘤发生发展。正常情况下细胞的信号转导是个具有高度组织性的过程。近年研究发现，细胞表面的特异性微内陷结构Caveolae富含脂质，膜受体和大量的信号分子，在脂类代谢以及信号转导过程中都发挥重要作用。 Caveolin是一种分子量为21-24kD的膜结合蛋白，是Caveolae的主要成分。Caveolin家族包括caveolin-1、caveolin-2和caveolin-3。目前的研究发现，caveolin-1和caveolin-2存在于血管内皮细胞，脂肪细胞，平滑肌细胞和成纤维细胞等多种细胞内，而caveolin-3特异的存在于心肌细胞和骨骼肌细胞中。其中caveolin-1是Caveolae的主要结构蛋白。 由于caveolin-1在肿瘤发生，发展及肿瘤血管形成中都发挥重要的作用，已经受到越来越多的重视。但目前在不同肿瘤细胞系及组织中的研究结果存在较大差异，甚至矛盾。而且尚无对caveolin-1在非小细胞肺癌肿瘤组织中的研究报道。本实验采用免疫组化S-P方法，对60例具有完整随访资料的非小细胞肺癌组织中caveolin-1的表达情况进行研究，并探讨其与临床病理因素及患者预后之间的关系。 材料与方法 1 材料 辽宁省鞍山肿瘤医院1蛇0－2001年手术切除之原发性非小细胞肺癌标本60例，按WHOO）赠标准鳞癌34例（高分化6例，中分化13例，低分化15例入腺癌26例（高分化8例，中分化8例，低分化10例）依据国际抗癌联盟（UICC厂997年修订的肺癌P－TNM分期标准J期二例／期10例，ill期47例／V期1例。所有标本均有术后随访和淋巴结转移情况记录。生存期的计算从手术日期到随访日期，或由于复发、转移而死亡的日期为止。 2．主要试剂 鼠抗人抗caveolin－二多克隆抗体由 Doctor e Jun（ROBERTC．BYRD HEALTH SCINECES CENTER，West Virginia University）赠予。SP染色试剂盒刀AB显色液为福州迈新公司产品。 3．实验方法 3．l免疫组织化学检测 采用链酶菌素抗生物素蛋白－过氧“化物酶免疫组化法门S－P法人结果判定：在细胞胞浆或胞膜内出现棕黄色颗粒着色为阳性表达。caveolinJ在正常支气管粘膜上皮细胞和1型肺泡细胞，血管内皮细胞为阳性染色，作为内部阳性对照。按阳性肿瘤细胞占肿瘤细胞百分率分为：阳性瘤细胞数忐90％为表达降低，＞叨酌为表达正常，阴性表达和表达降低归为异常表达。 3．2微血管密度（MVD，zaoascular density）测定： ①与邻近的微血管、肿瘤纲哪其它结缔组织成弧相连的，标记清晰的内皮细胞及内皮纲胞簇均可作为一个可计数的微血管。②可能源于同一微血管的内皮细胞，如染色清晰且相互分离，也可作为单独的微血管计数。③对肿瘤区内的硬化区、肿瘤细胞稀疏区及邻近良性组织区域内的血管不进行计数。④，对管腔直 ·2· 径大于8个红细胞或管壁有平滑肌存在的血管不进行计数。 计数方法：盲法，每张切片由两名医师分别计数。方法：在光 镜下先以40或100倍视野选择微血管染色最丰富区（热点X然后 在200倍下计数3个视野中的血管数，最后的平均数即为MVD。 4统计学分析 采用 SPSS for Windows 10．0统计分析软件进行分析，对 cave－ olin叫表达与临床病理特征的关系采用卡方检验和确切概率法。 用Cox模型进行多因素分析。caVeon—l与微血管密度的关系采 用 t检验。P＜0．05为有统计学意义。 实验结果 NSCLC中caveolin－1正常表达率为50．0％（30／60）。34例 鳞癌和26例腺癌中caveolin－二的正常表达率均为50．0％门／ 34，二306），无明显差异（P＞o刀5）。1、1二期肺癌和111、IV期肺癌 中caveolin－1正常表达率分别为66．7％（8／12）和45．8啪（22／ 4幻，无明显差异（P＞0．05八 高分化及中、低分化＊SCu中， 。aveolin一1正常表达率分另为78．6畅（11／14）和41．3呢（19／ 46人有明显差异（P＜o．05人有淋巴结转移No例）和无淋巴结 转移（20例川SCLC中caveolin－二正常表达率分别为37．5畅（15／ M）和75畅（二5／ZO），有明显差异（P＜o．05）。 cav。lin－1表达正常与c。eolin－1表达异常的NSCLC中， MVD值分别为 8．100 ig．099和 15．933。12．779。caveolin－l表 达正常组织中微血管密度明显低于表达异常组织汀＜o．05八 caveolin－二表达正常的病例平均生存期为 28．3 t 22．48月， 明显长于 c。eolin－1表达异常病例的 15．27 2 10．16月（P＜0． ·3·of人但Cox模型分析表明：6aveolin－二表达不是影响NSCLC预后的独立危险因素汀二0．4
刘春晓[2]2015年在《TRIM29蛋白在非小细胞肺癌增殖、侵袭及顺铂化疗过程中的作用》文中提出目的：肺癌是当今世界上最常见的恶性肿瘤之一。肺癌的临床治疗包括外科手术、化学治疗、放射治疗及分子靶向治疗等多学科综合治疗。对肺癌发生发展分子机制的研究能为肺癌的治疗提供新的靶点。以往的研究表明，TRIM29在多种肿瘤组织中表达异常增高，但对其具体作用的研究仍较少。本课题旨在研究TRIM29在非小细胞肺癌增殖、侵袭及顺铂化疗过程中的作用，为肺癌的治疗提供新的靶点。方法：(1)采用免疫组化的方法检测TRIM29在非小细胞肺癌组织及癌旁正常肺组织中的表达，并分析TRIM29在两者之间的差异，及其与临床病理因素之间的关系。(2)将针对TRIM29的siRNA导入NCI-H520细胞；用Real time PCR和Western blotting法检测TRIM29基因及蛋白的表达情况；MTT法和Transwell小室法检测细胞的增殖和侵袭能力。(3)利用siRNA干扰NCI-H520细胞中TRIM29的表达，Western blotting法检测促凋亡因子Bax、凋亡抑制因子Bcl-2的变化情况；流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果：(1) TRIM29在癌旁正常肺组织中呈阴性表达，而在非小细胞肺癌组织中的阳性率为63%(63/100)。TRIM29的高表达在不同年龄及性别之间无统计学差异(P＞0.05)，而与组织类型、TNM分期以及区域淋巴结转移密切相关，差异具有统计学意义(P＜0.05)。(2)将特异性siRNA(siRNA1、siRNA2、siRNA3)及阴性对照siRNA(siRNANC)转入NCI-H520细胞中，RT-PCR和Western blotting分别检测siRNA干扰TRIM29后在基因水平和蛋白水平的表达变化。结果显示：与空白对照组、NC组相比，siRNA处理组NCI-H520细胞的TRIM29的mRNA及蛋白表达量均明显下降。并且发现TRIM29siRNA3干扰的特异性及效率更高，我们选择siRNA3作为TRIM29siRNA进行后续的实验。我们采用MTT法检测细胞在五天内的增殖情况，并绘制生长曲线，结果显示：与空白组及对照组比较，TRIM29siRNA转染组NCI-H520细胞生长明显减慢。采用Transwell小室法检测细胞的侵袭能力，结果显示：与空白组及对照组比较，TRIM29siRNA转染组NCI-H520细胞侵袭能力明显减弱。(3)我们使用siRNA干扰TRIM29的表达后，用Annexin-V/PI双凋亡法检测细胞的凋亡率，之后再使用浓度为5mg/L的顺铂刺激NCI-H520细胞24小时，再次用Annexin-V/PI双凋亡法检测细胞的凋亡率。结果显示，siRNA干扰TRIM29表达可诱导NCI-H520细胞出现凋亡，加入顺铂后，细胞凋亡明显增加，NCI-H520细胞受顺铂作用后的凋亡率为0.22±0.026，使用阴性对照siRNA后NCI-H520细胞的凋亡率为0.20±0.015，二者没有显着差异；而使用siRNA干扰TRIM29后，加入顺铂，NCI-H520细胞凋亡率为0.32±0.005，与空白组及对照组相比存在显着差异。我们运用Westernblotting技术观察不同处理组细胞促凋亡因子Bax、凋亡抑制因子Bcl-2的变化情况，进一步研究siRNA干扰TRIM29表达促进NCI-H520细胞凋亡的可能机制，结果显示：TRIM29表达下降后，Bax的表达量上调，Bcl-2表达量下调。结论：本实验系统的研究了TRIM29在非小细胞肺癌中的表达及其在肺鳞癌NCI-H520细胞增殖、侵袭和顺铂化疗过程中的作用。研究表明：TRIM29在非小细胞肺癌组织中的过表达与非小细胞肺癌的组织类型、临床分期及淋巴结转移有关；siRNA干扰能特异、高效地抑制TRIM29的表达，在NCI-H520细胞中，抑制TRIM29的表达，能降低癌细胞的增殖及侵袭能力；siRNA干扰TRIM29的表达，可以使促凋亡因子Bax的表达量上调，凋亡抑制因子Bcl-2的表达量下调，并提高NCI-H520细胞对顺铂化疗的敏感性。TRIM29可能成为肺癌治疗的新靶点。
参考文献：
[1]. caveolin-1在非小细胞肺癌中的表达及其意义的研究[D]. 杨洪伟. 中国医科大学. 2003
[2]. TRIM29蛋白在非小细胞肺癌增殖、侵袭及顺铂化疗过程中的作用[D]. 刘春晓. 首都医科大学. 2015