融合蛋白基因与抗体基因电转染CHO-S细胞的条件摸索优化

融合蛋白基因与抗体基因电转染CHO-S细胞的条件摸索优化

论文摘要

旨在对编码融合蛋白和抗体的重组质粒转染CHO-S细胞的转染条件进行摸索优化,提高外源基因的转染效率,从而增加外源蛋白的表达。应用Amaxa Nucleofector-II电转仪,从电转染程序、质粒用量及细胞用量三方面着手,最终发现编码融合蛋白的重组质粒的最佳电转条件为:电转程序U-030,质粒用量20μg/孔,细胞用量1×107个/孔;编码抗体的重组质粒的最佳电转条件为:电转程序U-024,质粒用量15μg/孔,细胞用量1×107个/孔;实验结果进一步显示抗体重组质粒电转染CHO-S细胞的效果要优于融合蛋白重组质粒,利用高通量细胞筛选仪Clone Pix对转染后重组细胞的阳性克隆数进行统计,证实了该抗体重组质粒的转染效率更高。这为以后的抗体及融合蛋白重组质粒电转染CHO-S细胞提供了一定的数据支持,同时提示不同类型的细胞及外源基因,都需要设计相应的电转染实验进行条件优化,进而为获得高产稳定的生产用细胞株奠定基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 质粒与细胞
  •     1.1.2 主要试剂及仪器
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 转染质粒的提取及线性化
  •     1.2.2 细胞传代培养
  •     1.2.3 重组质粒电转条件的摸索
  •     1.2.4 转染效率的检测
  • 2 结果
  •   2.1 重组表达质粒提取及线性化结果
  •   2.2 电转染条件摸索试验结果
  •   2.3 融合蛋白重组质粒和抗体重组质粒电转CHO-S细胞的效果对比
  •   2.4 半固体培养间接检测重组表达质粒的转染效率
  • 3 讨论
  • 4 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 邓晓芬,杨晓佳,易天红,冯英,柯潇,赖维莉

    关键词: 融合蛋白,抗体,电转染,转染效率

    来源: 生物技术通报 2019年04期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,农业科技

    专业: 生物学

    单位: 成都康弘药业集团股份有限公司产品技术中心

    基金: “十三五”重大新药创制科技重大专项(2018ZX09733001-001-005)

    分类号: Q78

    DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0700

    页码: 223-228

    总页数: 6

    文件大小: 2651K

    下载量: 202

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