导读:本文包含了组成型表达载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:嗜酸乳杆菌,启动子,组成型表达载体
组成型表达载体论文文献综述
王雪,尚晓敏,李桂玲,刘琼[1]（2018）在《植物乳杆菌高表达组成型表达载体构建》一文中研究指出乳酸菌宿主对表达载体的启动子具有高度的选择性,本研究利用PCR技术扩增嗜酸乳杆菌表面蛋白SlpA基因启动子,以诱导型表达载体pSIP409为基本框架删除其诱导型启动子,采用能快速连接的无缝克隆技术将SlpA基因启动子连接到gusA基因上游,获得重组质粒409SlpA电转化至植物乳杆菌NC8中,Western Blot定性测定的gusA表达情况,同时利用MRS-X-gluC培养基特异性显色反应来鉴定阳性重组子表达gusA的活性,为利用该启动子表达外源蛋白研制新型基因工程微生态制剂奠定基础。(本文来源于《吉林畜牧兽医》期刊2018年05期）
鞠珑株[2]（2014）在《组成型乳酸菌表达载体的构建及表达效果的比较》一文中研究指出pPG612是一种乳酸菌和大肠杆菌穿梭表达载体,但因其拷贝数较低,而且需要添加诱导剂才能诱导蛋白表达,不方便在生产中进行应用,因此本实验在pPG612表达载体的基础上加以改造,预期得到一个可高水平表达外源蛋白、不需添加诱导物的组成型表面表达载体。产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)是引起各种动物坏死性肠炎、肠毒血症、人畜创伤性气性坏疽及人类食物中毒的主要病原菌之一,该菌的致病因子是其所产生的外毒素。各型产气荚膜梭菌均产生α毒素(C.perfringens alpha-toxin, CPA),它是产气荚膜梭菌最重要的致病毒素之一,利用构建的组成型乳酸菌表达载体对去毒后的α毒素进行表达,筛选高表达量的组成型乳酸菌表达载体系统,为构建新型重组乳酸菌活菌疫苗防治该病提供物质基础。本实验中,构建了一个无需诱导的可表面表达a毒素蛋白的干酪乳杆菌组成型表达载体。以pPG612载体质粒为基本框架,将其原有表达元件替换为HCE启动子、PgsA anchor、 rrnBT1T2终止子,改造后载体命名为pPG-PPT,将α毒素基因片段插入到表达载体pPG-PPT中,获得重组表达质粒pPG-PPaT,并将其电转化入干酪乳杆菌L.casei393中,获得了表面表达α毒素蛋白的重组干酪乳杆菌。重组菌经过Western blot、间接ELISA、间接免疫荧光及激光共聚焦等实验分析,结果表明α毒素蛋白获得了表面表达。为了进一步优化已构建的干酪乳杆菌组成型表达载体,以提高翻译过程中mRNA的稳定性及蛋白表达量,尝试在已构建载体的启动子下游分别插入两种已应用于原核及真核蛋白表达的翻译增强子T7g10及Q增强子,这两种增强子根据相关文献报道由生工生物工程(上海)股份有限公司合成获得,构建成两种新的重组干酪乳杆菌pPG-Ω-PPα T/L.casei393和pPG-T7g10-PP a T/L.casei393表达系统,并通过Western blot、间接ELISA、荧光定量PCR、流式细胞术、间接免疫荧光及激光共聚焦等实验分析,将其与原载体pPG-PPaT中α毒素蛋白表达量进行比较。由Western blot结果得出,重组菌pPG-T7g10-PPaT/L.casei393的α毒素蛋白表达量最高,表达效果最稳定；由间接ELISA结果分析可知,叁种重组菌与对照菌之间均存在极显着差异(P<0.01),重组菌pPG-Ω-PP α T/L.casei393的a毒素蛋白表达量约是重组菌pPG-PP a T/L.casei393的2倍,重组菌pPG-T7g10-PP α T/L.casei393的a毒素蛋白表达量约是重组菌pPG-PP a T/L.casei393的11倍；由荧光定量PCR结果可知,重组菌pPG-Ω-PP α TIL.casei393和pPG-T7g10-PPα T/L.casei393相对于重组菌pPG-PPα T/L.casei393中的mRNA含量,二者均出现极显着差异(P<0.01),通过REST2009软件分析,重组菌pPG-Ω-PP α T/L.casei393中a毒素蛋白表达量约是pPG-PP α T/L.casei393的2倍,重组菌pPG-T7g10-PP α T/L.casei393约为pPG-PP a TIL.casei393的9倍；经流式细胞术结果分析,从P2区采集到有荧光信号的菌体数占总菌数的百分比,pPG-PPT/L.casei393、pPG-PP α T/L.casei393、pPG-Ω-PP a T/L.casei393pPG-T7g10-PPα T/L.casei393分别为0.7%、8.5%、10.9%、15.8%,叁种重组菌依次增加,α毒素蛋白在三种重组菌菌体表面的表达量也依次增多,并且在重组菌pPG-T7g10-PPα T/L.casei393中a毒素蛋白表达量最大,叁种重组菌与空载体对照菌pPG-PPT/L.casei395相比,a毒素蛋白表达量差异均极显着(P<0.01)；间接免疫荧光结果显示出,重组菌pPG-T7g10-PPα T/L.casei393表面观察到的黄绿色荧光最多。间接免疫荧光与激光共聚焦结果都显示出叁种重组菌均为表面表达a毒素蛋白。在本研究中还制备了鼠抗PgsA anchor的多克隆抗体,用于与PgsA anchor融合表达的a毒素蛋白的Western blot检测,抗体效价为1：51200。通过对叁种重组菌中a毒素蛋白表达效果的比较分析,以上结果均表明,重组干酪乳杆菌pPG-T7g10-PPaT/L.casei393的α毒素蛋白表达量最高,表达效果最稳定。上述结果表明,重组干酪乳杆菌表达系统pPG-PPaT/L.casei393虽然获得了α毒素蛋白的表达,但是其表达效果并不理想,蛋白表达量较低而且表达效果不够稳定,但在插入了翻译增强子T7g10及Q增强子的表达载体pPG-Ω-PPaT和pPG-T7g10-PPaT中,α毒素蛋白的表达量得到了显著提高,而且插入T7g10增强子的重组质粒表达载体在L.casei393中稳定性较高且蛋白表达情况比较理想,但插入Ω增强子的表达载体相比较而言,其稳定性较差。综上所述,重组干酪乳杆菌pPG-T7g10-PPT/L. casei393表达系统可为用于蛋白表面表达无需添加诱导剂诱导的外源蛋白组成型表达系统的建立提供参考。该重组干酪乳杆菌也可通过发酵罐培养获取大量表达的外源蛋白,而且与诱导型表达系统相比,其操作简单,可降低工业生产成本,应用前景更为广阔。(本文来源于《东北农业大学》期刊2014-06-01）
张永正,温俊柳,王燕,魏海婷,涂健[3]（2013）在《毕赤酵母组成型表达载体的构建及报告蛋白表达评价》一文中研究指出目的构建毕赤酵母(Pichia pastoris)组成型分泌表达载体,并表达报告蛋白葡萄球菌核酸酶(staphylococcus nuclease,SNase,NucA),以评价其表达外源蛋白的能力。方法从巴斯德毕赤酵母GS115基因组中PCR扩增毕赤酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase promoter,pGAP)片段,克隆至载体pPIC9K中,构建组成型分泌表达载体pGHKα;从金黄色葡萄球菌基因组中PCR扩增编码报告蛋白金黄色葡萄球菌NucA成熟肽的序列nucA,克隆至载体pGHKα中,构建重组表达质粒pGHKα-nucA,经SacⅠ和BglⅡ依次酶切线性化后,电转化至毕赤酵母GS115中;PCR及TB-D平板法筛选阳性重组酵母菌;Tricine-SDS-PAGE检测表达产物;琼脂扩散法检测重组酵母菌表达上清液的核酸酶活性。结果组成型分泌表达载体pGHKα经PCR鉴定,证明构建正确;重组表达质粒pGHKα-nucA经PCR及测序鉴定,证明nucA基因片段正确插入载体pGHKα中;重组酵母菌GS115/pGHKα-nucA经PCR及TB-D平板法检测证明构建成功;表达的目的蛋白相对分子质量约为17 000,表达量约占上清总蛋白的42%,且具有显着的核酸酶活性。结论成功构建了毕赤酵母组成型分泌表达载体pGHKα,其能正确表达报告蛋白NucA,且表达的蛋白能分泌到细胞外,表达效率高,为异源蛋白在毕赤酵母中的安全高效表达奠定了基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2013年10期）
秦思[4]（2013）在《基于短乳杆菌SlpA启动子的组成型表达载体构建及其活性分析》一文中研究指出乳酸菌的安全性及多种益生特点使其成为外源基因表达和口服疫苗研制的理想候选宿主。但乳酸菌表达系统与其他原核或真核表达系统比较而言，相对不够成熟，主要表现在外源蛋白的表达量较低、乳酸菌某些遗传背景不够清楚、操作比较繁琐、表达条件不够稳定等。而乳酸菌表达系统外源蛋白的表达量主要与乳酸菌表达载体启动子的活性密切相关。相关的研究表明乳酸菌宿主对表达载体的启动子要求比大肠杆菌（E.coli）更为严格，具有高度的选择性，因此在乳酸菌表达系统中，很少使用外源启动子。目前可用于构建乳酸菌表达载体的启动子数量相对较少，其中大多数乳酸菌表达载体的启动子活性不高，且需要诱导，这不仅降低了外源蛋白表达的效率，也使操作变得繁琐，更重要的是限制了乳酸菌的实际应用。而组成型启动子不需诱导等特殊条件即可在菌体存活期持续不断地表达外源基因，从而简化了操作过程、且具有相对较高的安全性，因此更适合在实际生产中应用。针对乳酸菌表达量低和诱导型启动子在实际应用方面限制等问题，本项研究构建了一株乳酸菌组成型启动子表达载体，并分离和测定了在食品和医药中广泛应用的短乳杆菌S层蛋白启动子的启动活性，为进一步构建乳酸菌组成型表达载体，拓展乳酸菌表达载体的应用范围奠定了基础。为了研究短乳杆菌S层启动子的活性，本研究以短乳杆菌全基因组DNA为模板，扩增出大小为357bp的S层启动子片段，以pPG612作为表达载体，分别以TGEV的N基因、大肠杆菌STa-LTB-STb-FaeG（简称SLSF）基因片段，构建了重组乳酸菌表达质粒pPG612-SlpA-N/pPG612-SlpA-SLSF，并电转化至四种乳酸菌—干酪乳杆菌L.casei393、植物乳杆菌L.plantarum、副干酪乳杆菌L. paracasei、乳酸乳球菌L.lactis中， SDS-PAGE结果显示，在干酪乳杆菌、植物乳杆菌及副干酪乳杆菌叁种重组乳酸杆菌中均有大小约54ku和58ku的蛋白表达，所表达蛋白的大小与理论值相符；在乳酸乳球菌中则目的蛋白没有表达。Westernblot鉴定结果表明，叁种重组乳酸杆菌表达的蛋白均可以被TGEV单抗上清以及LTB单抗上清所识别，证实了两种目的蛋白在叁种乳酸杆菌中确实得到了表达。证明了S层启动子在这叁种乳酸杆菌中具有活性，而在乳酸乳球菌中没有活性。为了探讨S层启动子的启动活性，在静止培养条件下，对叁种不同宿主菌分别在不同时段（8h、12h、16h、20h、24h）取样，进行western blot鉴定分析，表明该启动子能够持续的启动蛋白表达，且在16h时表达量最大。同时，在最佳表达时间时对叁种不同的重组菌分别取样，进行western blot鉴定分析，结果表明S层启动子在植物乳杆菌中活性最好，在干酪乳杆菌中活性稍差，在副干酪乳杆菌中活性最弱；而此前实验表明S层启动子在乳酸乳球菌中不表现活性。以上结果表明，短乳杆菌S层启动子在菌体生长过程中能够持续的表达外源蛋白，且具有严格的宿主选择性，在亲缘性较近的乳酸杆菌中活性相对较好。在此基础之上，我们利用发酵罐的培养方式对叁种不同重组菌进行培养，更深程度的探讨了发酵罐中稳定的酸碱环境条件及更高的菌体密度对S层启动子的启动活性的影响。首先我们对在发酵罐培养条件下的菌体OD值进行了测定，结果表明在发酵罐培养条件下OD值能够达到静止培养条件下OD值的叁到四倍；然后我们将pH值调定为不同的固定值，通过western blot鉴定分析，结果表明在pH5.5时，叁种重组菌中的S层启动子的活性相对较好。而过酸及偏碱的环境都能不同程度的抑制启动子活性，且偏碱的培养基环境比过酸的环境更能够抑制启动子的活性。本实验前期研究的基础上，以外源功能性蛋白作为报告基因，利用S层蛋白启动子构建了重组乳酸杆菌组成型表达系统，证实启动子具有良好的活性，为进一步研究该启动子在不同宿主菌中调控外源蛋白表达的功能，鉴定和筛选组成型启动子奠定基础。(本文来源于《东北农业大学》期刊2013-06-01）
郭红敏,谷新晰,张玉兰,田洪涛,郭兴华[5]（2011）在《利用组成型表达载体pMG36e电转化德式乳杆菌保加利亚亚种的研究》一文中研究指出以典型的乳酸菌组成型表达质粒pMG36e为载体,德式乳杆菌保加利亚亚种为受体,采用电转化方法研究受体菌株的生长状态与细胞壁处理方式、质粒浓度、电转化参数、复苏培养基组成与复苏培养时间、受体菌株的限制修饰作用对电转化效率的影响,探讨电转化的最适条件,以提高电转化效率。结果表明:选择含2.5%甘氨酸的SMRS培养基培养受体细胞至对数中期,收获制成感受态细胞,在电场强度12kV/cm、电阻200Ω、电容25μF条件下电击转化,以含20mmol/LMgCl2、CaCl2的SMRS培养基复苏培养2h,涂板筛选得到较高的电转化效率。特别是采用受体菌株修饰的质粒进行电转化,转化效率提高30倍以上,达到6.3×104cfu/μgDNA。本研究结果为进一步构建乳酸菌组成型高效表达系统和食品级基因工程乳酸菌株提供试验依据。(本文来源于《中国食品学报》期刊2011年02期）
张玉兰,柯晓静,郭红敏,谷新晰,田洪涛[6]（2010）在《利用组成型表达载体pMG36e电转化乳酸乳球菌ML23的研究》一文中研究指出为了探明乳酸菌电转化的最适条件,提高电转化效率,本试验以大肠杆菌-乳酸菌穿梭型质粒pMG36e为载体,以乳酸乳球菌ML23为受体,利用电转化方法研究了受体菌株的生长状态与细胞壁处理方式、质粒浓度、电场强度、复苏培养基组成与复苏培养时间、受体菌株的限制修饰作用对电转化效率的影响。结果表明:含2%甘氨酸和0.5 mol/L蔗糖的MRS培养基培养至对数生长中期的细胞,在电场强度11.0 kV/cm、电阻200Ω、电容25μF下电击转化,转化后细胞在SMRS培养基中培养2 h,获得了较高的电转化效率。采用受体菌株修饰的质粒进行电转化,转化效率又提高了15倍以上,达1.05×105CFU/μg DNA。(本文来源于《河北农业大学学报》期刊2010年04期）
杨志如,云锦凤,魏建华,徐春波[7]（2009）在《诱导型和组成型表达的冷诱导转录因子CBF1基因表达载体的构建》一文中研究指出为研究冷诱导转录因子CBF1(C-repeat-binding-factor)基因对我国优良豆科牧草——苜蓿的抗寒性的改良作用,试验从拟南芥(Arabidopsis thaliana)中利用PCR方法分离了CBF1基因及其启动子,分别构建了CaMV 35S启动子和来源于拟南芥的CBF1启动子驱动的农杆菌介导的植物转化表达载体,为下一步研究利用CBF1基因改良苜蓿抗逆性奠定了基础。(本文来源于《华北农学报》期刊2009年03期）
刘明坤,刘昌财,许志茹,魏志刚,阎秀峰[8]（2009）在《一种快速构建35S组成型植物双价表达载体的方法》一文中研究指出通过对几种常用植物表达载体的35S和Tnos序列进行比对,设计带有酶切位点的引物35S和Tnos,通过PCR克隆了同时带有35S和Tnos序列的目的基因片段,通过定向的酶切、连接获得双价表达载体。此方法简化了植物双价表达载体构建过程,具有明显时间短、效率高、不需要中间载体、检测简单等特点,而且引物对于多数常用35S组成型植物表达载体是通用的,为快速构建35S组成型植物双价表达载体提供了一种新方法。(本文来源于《生物技术通报》期刊2009年02期）
包晓兰,王和平,包力高,周平,蔺日胜[9]（2007）在《β-甘露聚糖酶基因重组整合组成型表达载体的构建》一文中研究指出应用PCR方法从P.pastorisGS115染色体中扩增了GAP启动子(PGAP),大小为500bp左右,以其取代诱导型表达载体pPIC9K上的AOX1启动子(PAOX1),构建了组成型表达载体pGAP;再从野生型酵母菌JSY4染色体中扩增出25S rDNA保守序列,大小为1 700bp左右,以其取代组成型表达pGAP上的组氨酸脱氢酶基因(H IS4)片断,构建了整合组成型表达载体pGAP-rDNA。再双酶切重组质粒pT002M anⅠ得编码β-甘露聚糖酶的ManⅠ基因片断插入pGAP-rDNA的多克隆位点(MCS),获得含有目的基因ManⅠ的重组整合组成型表达载体pGAP-rDNA-ManⅠ。CaC l2法转化感受态大肠杆菌DH5α,对阳性克隆进行质粒PCR鉴定和单、双酶切鉴定。结果表明:成功构建了重组组成型表达载体pGAP-rDNA-ManⅠ,为下一步野生型酵母菌JSY4中β-甘露聚糖酶的组成型表达打下基础。(本文来源于《内蒙古农业大学学报(自然科学版)》期刊2007年04期）
包晓兰[10]（2007）在《β-甘露聚糖酶基因整合组成型表达载体的构建及整合体的筛选》一文中研究指出为实现在野生酵母菌株JSY4中组成型表达β-甘露聚糖酶,首先采用PCR方法从毕赤酵母GS115基因组DNA中扩增出500bp的叁磷酸甘油醛脱氢酶基因启动子(PGAP),以其取代分泌型表达载体pPIC9K的诱导型启动子(PAOX1)片断,构建了组成型载体pGAP;再从野生型酵母JSY4基因组DNA中扩增出1700bp的25S rDNA保守序列,以其取代pGAP载体上的HIS4片断,构建了整合组成型载体pGAP-rDNA;然后将重组质粒pT002-ManⅠ中的ManⅠ片断插入pGAP-rDNA的多克隆位点,获得含有目的基因ManⅠ的整合组成型表达载体pGAP-rDNA-ManⅠ。pGAP-rDNA-ManⅠ经NcoⅠ线性化后用电击法转化野生酵母菌株JSY4,通过G418抗性筛选和PCR鉴定得到阳性整合子JSY4(pGAP-rDNA-ManⅠ),对阳性菌株培养上清液进行ELISA双抗夹心法和DNS法测定酶活,表明有β-甘露聚糖酶活性。因此,整合组成型表达载体pGAP-rDNA-ManⅠ已被构建成功,ManⅠ基因也已经整合到JSY4酵母染色体中,并进行了中组成型表达。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2007-05-01）
组成型表达载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
pPG612是一种乳酸菌和大肠杆菌穿梭表达载体,但因其拷贝数较低,而且需要添加诱导剂才能诱导蛋白表达,不方便在生产中进行应用,因此本实验在pPG612表达载体的基础上加以改造,预期得到一个可高水平表达外源蛋白、不需添加诱导物的组成型表面表达载体。产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)是引起各种动物坏死性肠炎、肠毒血症、人畜创伤性气性坏疽及人类食物中毒的主要病原菌之一,该菌的致病因子是其所产生的外毒素。各型产气荚膜梭菌均产生α毒素(C.perfringens alpha-toxin, CPA),它是产气荚膜梭菌最重要的致病毒素之一,利用构建的组成型乳酸菌表达载体对去毒后的α毒素进行表达,筛选高表达量的组成型乳酸菌表达载体系统,为构建新型重组乳酸菌活菌疫苗防治该病提供物质基础。本实验中,构建了一个无需诱导的可表面表达a毒素蛋白的干酪乳杆菌组成型表达载体。以pPG612载体质粒为基本框架,将其原有表达元件替换为HCE启动子、PgsA anchor、 rrnBT1T2终止子,改造后载体命名为pPG-PPT,将α毒素基因片段插入到表达载体pPG-PPT中,获得重组表达质粒pPG-PPaT,并将其电转化入干酪乳杆菌L.casei393中,获得了表面表达α毒素蛋白的重组干酪乳杆菌。重组菌经过Western blot、间接ELISA、间接免疫荧光及激光共聚焦等实验分析,结果表明α毒素蛋白获得了表面表达。为了进一步优化已构建的干酪乳杆菌组成型表达载体,以提高翻译过程中mRNA的稳定性及蛋白表达量,尝试在已构建载体的启动子下游分别插入两种已应用于原核及真核蛋白表达的翻译增强子T7g10及Q增强子,这两种增强子根据相关文献报道由生工生物工程(上海)股份有限公司合成获得,构建成两种新的重组干酪乳杆菌pPG-Ω-PPα T/L.casei393和pPG-T7g10-PP a T/L.casei393表达系统,并通过Western blot、间接ELISA、荧光定量PCR、流式细胞术、间接免疫荧光及激光共聚焦等实验分析,将其与原载体pPG-PPaT中α毒素蛋白表达量进行比较。由Western blot结果得出,重组菌pPG-T7g10-PPaT/L.casei393的α毒素蛋白表达量最高,表达效果最稳定；由间接ELISA结果分析可知,叁种重组菌与对照菌之间均存在极显着差异(P<0.01),重组菌pPG-Ω-PP α T/L.casei393的a毒素蛋白表达量约是重组菌pPG-PP a T/L.casei393的2倍,重组菌pPG-T7g10-PP α T/L.casei393的a毒素蛋白表达量约是重组菌pPG-PP a T/L.casei393的11倍；由荧光定量PCR结果可知,重组菌pPG-Ω-PP α TIL.casei393和pPG-T7g10-PPα T/L.casei393相对于重组菌pPG-PPα T/L.casei393中的mRNA含量,二者均出现极显着差异(P<0.01),通过REST2009软件分析,重组菌pPG-Ω-PP α T/L.casei393中a毒素蛋白表达量约是pPG-PP α T/L.casei393的2倍,重组菌pPG-T7g10-PP α T/L.casei393约为pPG-PP a TIL.casei393的9倍；经流式细胞术结果分析,从P2区采集到有荧光信号的菌体数占总菌数的百分比,pPG-PPT/L.casei393、pPG-PP α T/L.casei393、pPG-Ω-PP a T/L.casei393pPG-T7g10-PPα T/L.casei393分别为0.7%、8.5%、10.9%、15.8%,叁种重组菌依次增加,α毒素蛋白在三种重组菌菌体表面的表达量也依次增多,并且在重组菌pPG-T7g10-PPα T/L.casei393中a毒素蛋白表达量最大,叁种重组菌与空载体对照菌pPG-PPT/L.casei395相比,a毒素蛋白表达量差异均极显着(P<0.01)；间接免疫荧光结果显示出,重组菌pPG-T7g10-PPα T/L.casei393表面观察到的黄绿色荧光最多。间接免疫荧光与激光共聚焦结果都显示出叁种重组菌均为表面表达a毒素蛋白。在本研究中还制备了鼠抗PgsA anchor的多克隆抗体,用于与PgsA anchor融合表达的a毒素蛋白的Western blot检测,抗体效价为1：51200。通过对叁种重组菌中a毒素蛋白表达效果的比较分析,以上结果均表明,重组干酪乳杆菌pPG-T7g10-PPaT/L.casei393的α毒素蛋白表达量最高,表达效果最稳定。上述结果表明,重组干酪乳杆菌表达系统pPG-PPaT/L.casei393虽然获得了α毒素蛋白的表达,但是其表达效果并不理想,蛋白表达量较低而且表达效果不够稳定,但在插入了翻译增强子T7g10及Q增强子的表达载体pPG-Ω-PPaT和pPG-T7g10-PPaT中,α毒素蛋白的表达量得到了显著提高,而且插入T7g10增强子的重组质粒表达载体在L.casei393中稳定性较高且蛋白表达情况比较理想,但插入Ω增强子的表达载体相比较而言,其稳定性较差。综上所述,重组干酪乳杆菌pPG-T7g10-PPT/L. casei393表达系统可为用于蛋白表面表达无需添加诱导剂诱导的外源蛋白组成型表达系统的建立提供参考。该重组干酪乳杆菌也可通过发酵罐培养获取大量表达的外源蛋白,而且与诱导型表达系统相比,其操作简单,可降低工业生产成本,应用前景更为广阔。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
组成型表达载体论文参考文献
[1].王雪,尚晓敏,李桂玲,刘琼.植物乳杆菌高表达组成型表达载体构建[J].吉林畜牧兽医.2018
[2].鞠珑株.组成型乳酸菌表达载体的构建及表达效果的比较[D].东北农业大学.2014
[3].张永正,温俊柳,王燕,魏海婷,涂健.毕赤酵母组成型表达载体的构建及报告蛋白表达评价[J].中国生物制品学杂志.2013
[4].秦思.基于短乳杆菌SlpA启动子的组成型表达载体构建及其活性分析[D].东北农业大学.2013
[5].郭红敏,谷新晰,张玉兰,田洪涛,郭兴华.利用组成型表达载体pMG36e电转化德式乳杆菌保加利亚亚种的研究[J].中国食品学报.2011
[6].张玉兰,柯晓静,郭红敏,谷新晰,田洪涛.利用组成型表达载体pMG36e电转化乳酸乳球菌ML23的研究[J].河北农业大学学报.2010
[7].杨志如,云锦凤,魏建华,徐春波.诱导型和组成型表达的冷诱导转录因子CBF1基因表达载体的构建[J].华北农学报.2009
[8].刘明坤,刘昌财,许志茹,魏志刚,阎秀峰.一种快速构建35S组成型植物双价表达载体的方法[J].生物技术通报.2009
[9].包晓兰,王和平,包力高,周平,蔺日胜.β-甘露聚糖酶基因重组整合组成型表达载体的构建[J].内蒙古农业大学学报(自然科学版).2007
[10].包晓兰.β-甘露聚糖酶基因整合组成型表达载体的构建及整合体的筛选[D].内蒙古农业大学.2007