一株耐盐芽孢杆菌的筛选及其蛋白酶的酶学特性研究

一株耐盐芽孢杆菌的筛选及其蛋白酶的酶学特性研究

论文摘要

从浙江舟山的盐场中分离出了一株耐盐菌,结合生理生化实验及16S rDNA基因序列鉴定结果,表明菌株CK-1为Bacillus的未定种,其系统分类学关系与花津浦芽孢杆菌(Bacillushwajinpoensis)种最近,命名为Bacillussp.CK-1。经研究,该菌最适生长NaCl浓度为4%,且能在20%NaCl浓度下生长,表明其为耐盐菌。对其分泌的蛋白酶进行了表征和培养条件的优化。经研究发现,该蛋白酶在pH 8.0和45℃具有最高的蛋白酶活性,并在8%NaCl浓度下仍能保持44.9%的活性。对发酵培养基的优化结果表明,蔗糖、淀粉和麦芽糖均对蛋白酶的生产有明显的促进作用。随着发酵培养基中NaCl浓度的测试表明,该菌分泌的蛋白酶活性随着NaCl浓度的变化呈现先增大后减小的趋势,并在12%NaCl浓度时该菌分泌的蛋白酶酶活达到最高。Ca2+对发酵液中的蛋白酶活性具有明显的促进作用,表明其为Ca2+依赖蛋白酶。经优化,在含有KCl 2.0 g·L-1、Na HCO3 0.06 g·L-1、FeCl3 0.001 g·L-1、NaCl 120.0 g·L-1、CaCl2·2H2O 1 mmol·L-1、麦芽糖10 g·L-1、tryptone 10 g·L-1和初始pH 7.5的培养基中,于40℃发酵培养5 h后,Bacillus sp. CK-1所产蛋白酶具有最大的活性。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 菌株来源
  •     1.1.2 仪器和药品
  •     1.1.3 种子培养基
  •     1.1.4 发酵培养基
  •   1.2 菌种筛选和鉴定
  •   1.3 16S rDNA片段的PCR扩增
  •   1.4 粗酶液的制取
  •   1.5 蛋白酶活性的测定
  •   1.6 温度、p H和NaCl浓度对蛋白酶活性的影响
  •   1.7 发酵条件的优化
  •   1.8 金属离子对发酵培养基中蛋白酶酶活性的影响
  • 2 结果与分析
  •   2.1 菌株的筛选结果
  •   2.2 菌株CK-1的鉴定
  •   2.3 菌株形貌特征
  •   2.4 菌株CK-1生长情况
  •   2.5 蛋白酶酶学性质分析
  •     2.5.1 温度对酶活的影响
  •     2.5.2 pH对酶活的影响
  •     2.5.3 NaCl浓度对酶活的影响
  •   2.6 产蛋白酶发酵培养基的条件优化
  •     2.6.1 氮源的优化
  •     2.6.2 碳源的优化
  •     2.6.3 NaCl浓度的优化
  •     2.6.4 培养时间的优化
  •     2.6.5 金属离子对蛋白酶活性的影响
  • 3 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 曹凯,邓国志,胡晓婕,张家胜,武超

    关键词: 花津浦芽孢杆菌,耐盐菌,蛋白酶,条件优化

    来源: 安徽农业大学学报 2019年02期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 安徽大学资源与环境工程学院

    基金: 国家自然科学基金项目(31670126),安徽省自然科学基金(1508085ME92),安徽省高校优秀青年人才支持计划项目(gxyq2018001),安徽大学高层次人才引进项目(01001770),安徽大学青年骨干教师培养项目(J01005132)共同资助

    分类号: Q936

    DOI: 10.13610/j.cnki.1672-352x.20190507.013

    页码: 312-317

    总页数: 6

    文件大小: 403K

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