一、血管性痴呆大鼠认知障碍的NMDAR机制研究（论文文献综述）
张震[1]（2021）在《参麻益智方通过调节血管性痴呆大鼠脑微血管内皮改善突触可塑性的机制研究》文中研究说明研究目的观察参麻益智方通过调节血管性痴呆大鼠脑微血管内皮改善突触可塑性的作用机制。研究内容本研究以双侧颈总动脉永久结扎法建立血管性痴呆模型大鼠,采用参麻益智方干预三周后对各组大鼠进行Morris水迷宫实验,观察海马CA1区神经细胞病理形态、微血管密度,检测突触相关蛋白、VEGF/Flk-1/p38 MAPK信号通路相关蛋白,初步探索参麻益智方通过调节血管性痴呆大鼠脑微血管内皮改善突触可塑性的作用及机制。研究方法本研究采用双侧颈总动脉永久结扎法建立血管性痴呆大鼠模型。10周龄雄性Wistar大鼠100只,造模成功后随机分为7组:假手术组、模型组、阻断剂组、参麻益智方高剂量组、参麻益智方低剂量组、参麻益智方高剂量+阻断剂组、参麻益智方低剂量+阻断剂组,每组保证至少10只。阻断剂SU5416以25mg/kg进行腹腔注射,参麻益智方高剂量以16.5g/kg进行灌胃,参麻益智方低剂量以3.3g/kg进行灌胃,其余各组给予等量生理盐水灌胃以及等量PBS、DMSO腹腔注射,给药3周。通过Morris水迷宫实验评价各组别大鼠学习记忆能力。通过苏木精-伊红染色法观察各组大鼠海马CA1区病理形态。通过免疫组织化学染色法标记谷氨酸囊泡转运体、脑微血管内皮细胞,并进行微血管计数。Western-Blot检测NMDAR1、PSD-95、VEGF、Flk-1、p38 MAPK蛋白表达情况。实时荧光定量 PCR 检测 NMDAR1、PSD-95、VEGF、Flk-1、p38 MAPK mRNA 水平。研究结果1参麻益智方对血管性痴呆大鼠学习记忆能力的影响定位航行试验中,各组的潜伏期总体上具有显着性差异（P<0.05）,且时间和分组的交互作用无显着性差异（P>0.05）;第3d、4d、5d,与假手术组相比,模型组潜伏期明显延长（P<0.05）。第3d与模型组相比,参麻益智方高剂量组、参麻益智方低剂量组潜伏期明显缩短（P<0.05）。第4d与模型组相比,参麻益智方高剂量组、参麻益智方低剂量组、潜伏期明显缩短（P<0.05）。第5d与模型组相比,参麻益智方高剂量组潜伏期明显缩短（P<0.05）。空间探索实验中,与假手术组相比,模型组穿台次数明显降低（P<0.05）;与模型组相比,参麻益智方高剂量组、参麻益智方低剂量组穿台次数明显增多（P<0.05）。与参麻益智方高剂量组相比,参麻益智高剂量+阻断剂组穿台次数明显减少（P<0.05）。与参麻益智方低剂量组相比,参麻益智低剂量+阻断剂组穿台次数明显减少（P<0.05）。空间探索实验中,与假手术组相比,模型组在平台所在象限路程明显降低（P<0.05）;与模型组相比,参麻益智方高剂量组、参麻益智方低剂量组在平台所在象限路程明显增多（P<0.05）。与参麻益智方高剂量组相比,参麻益智高剂量+阻断剂组穿台次数明显减少（P<0.05）。与参麻益智方低剂量组相比,参麻益智低剂量+阻断剂组穿台次数明显减少（P<0.05）。2参麻益智方对血管性痴呆大鼠海马CA1区病理形态的影响显微镜下观察各组大鼠海马切片CA1区锥体细胞的病理形态,可见神经细胞核呈现浅蓝色,细胞质呈现粉红色。假手术组锥体细胞排列紧密坚实,细胞核饱满清晰,整齐有序,有明显分界。与假手术组相比较,模型组锥体细胞排列疏松,可见锥体细胞层的脱落变薄,残存锥体细胞胞核缩小,轴突散乱断裂,分界不清晰。与模型组相比,阻断剂组锥体细胞排列疏松,轴突散乱断裂。与模型组相比,参麻益智方高剂量组、参麻益智方低剂量组锥体细胞层总体上均排列规律整齐、轴突断裂较少。3参麻益智方对脑微血管内皮细胞的影响CD31免疫组织化学法染色:脑微血管内皮细胞成棕黄色,假手术组脑微血管内皮细胞结构完整、形态规则呈扁平状,大小适中。模型组脑微血管内皮细胞可见染色加深,血管畸形开放,边缘轮廓不规则,直径大小不一,分布密集。与模型组相比,阻断剂组脑微血管内皮细胞数量减少。与模型组相比,参麻益智方高剂量组、参麻益智方低剂量组脑微血管内皮细胞轮廓较为规则,血管闭合,边缘轮廓清晰,直径大小接近。微血管密度计数方面:与假手术组相比,模型组微血管密度计数明显增多（P<0.05）;与模型组相比,参麻益智方高剂量组、参麻益智方低剂量组微血管密度计数明显减少（P<0.05）。与参麻益智方高剂量组相比,参麻益智高剂量+阻断剂组微血管密度计数明显减少（P<0.05）;与参麻益智方低剂量组相比,参麻益智低剂量+阻断剂组微血管密度计数明显减少（P<0.05）。4参麻益智方对突触相关蛋白的影响谷氨酸囊泡转运体免疫组织化学法染色:与假手术组相比,模型组谷氨酸囊泡转运体阳性表达明显减少。与模型组相比,阻断剂组、参麻益智高剂量+阻断剂组、参麻益智低剂量+阻断剂组VGLUT 阳性表达明显减少,参麻益智方高剂量组、参麻益智方低剂量组VGLUT 阳性表达明显增多。N-甲基-D-天冬氨酸受体蛋白1方面:与假手术组相比,模型组N-甲基-D-天冬氨酸受体蛋白1蛋白和mRNA表达含量明显降低（P<0.05）;与模型组相比,参麻益智方高剂量组、参麻益智方低剂量组N-甲基-D-天冬氨酸受体蛋白1蛋白和mRNA表达含量明显升高（P<0.05）。与参麻益智方高剂量组相比,参麻益智高剂量+阻断剂组N-甲基-D-天冬氨酸受体蛋白1蛋白和mRNA表达含量明显降低（P<0.05）,与参麻益智方低剂量组相比,参麻益智低剂量+阻断剂组N-甲基-D-天冬氨酸受体蛋白1蛋白和mRNA表达含量明显降低（P<0.05）。突触后致密物蛋白-95方面:与假手术组相比,模型组突触后致密物蛋白-95蛋白和mRNA表达含量明显降低（P<0.05）;与模型组相比,参麻益智方高剂量组、参麻益智方低剂量组突触后致密物蛋白-95蛋白表达明显升高（P<0.01）、mRNA含量明显升高（P<0.05）。与参麻益智方高剂量组相比,参麻益智高剂量+阻断剂组突触后致密物蛋白-95蛋白表达含量明显降低（P<0.01）、mRNA含量明显降低（P<0.05）。与参麻益智方低剂量组相比,参麻益智低剂量+阻断剂组突触后致密物蛋白-95蛋白含量明显降低（P<0.01）、mRNA含量明显降低（P<0.05）。5参麻益智方对血管性痴呆大鼠海马组织VEGF、FLK-1、P38 MAPK表达的影响VEGF方面:与假手术组相比,模型组VEGF蛋白和mRNA含量明显降低（P<0.05）;与模型组相比,参麻益智方高剂量组VEGF蛋白表达和mRNA含量明显升高（P<0.05）,参麻益智方低剂量组VEGF蛋白表达明显升高（P<0.01）、mRNA含量明显升高（P<0.05）。与参麻益智方高剂量组相比,参麻益智高剂量+阻断剂组VEGF蛋白和mRNA含量明显降低（P<0.05）。与参麻益智方低剂量组相比,参麻益智低剂量+阻断剂组VEGF蛋白表达明显降低（P<0.01）、mRNA含量明显降低（P<0.05）。FLK-1方面:与假手术组相比,模型组FLK-1蛋白和mRNA含量明显降低（P<0.05）。与模型组相比,参麻益智方高剂量组FLK-1蛋白和mRNA含量明显升高（P<0.05）,参麻益智方低剂量组FLK-1蛋白表达明显升高（P<0.01）、mRNA含量明显升高（P<0.05）。与参麻益智方高剂量组相比,参麻益智高剂量+阻断剂组FLK-1蛋白和mRNA含量明显降低（P<0.05）。与参麻益智方低剂量组相比,参麻益智低剂量+阻断剂组FLK-1蛋白表达明显降低（P<0.01）、mRNA含量明显降低（P<0.05）。P38 MAPK方面:与假手术组相比,模型组p38 MAPK蛋白和mRNA含量明显降低（P<0.05）;与模型组相比,参麻益智方高剂量组、参麻益智方低剂量组p38 MAPK蛋白和mRNA含量明显升高（P<0.05）。与参麻益智方高剂量组相比,参麻益智高剂量+阻断剂组p38 MAPK蛋白和mRNA含量明显降低（P<0.05）,与参麻益智方低剂量组相比,参麻益智低剂量+阻断剂组p38 MAPK蛋白和mRNA含量明显降低（P<0.05）。实验结论参麻益智方可以改善血管性痴呆大鼠的空间学习记忆能力,保护海马CA1区锥体细胞。同时改善脑微血管内皮细胞形态和功能,促进突触相关蛋白囊泡型谷氨酸转运体表达、促进N-甲基-D-天冬氨酸受体蛋白1及mRNA表达,促进突触后致密物95蛋白及mRNA表达,促进VEGF/FLK-1/P38 MAPK信号通路相关蛋白及mRNA表达。本研究初步表明参麻益智方可以通过改善脑微血管内皮细胞的功能,激活VEGF/FLK-1/P38 MAPK信号通路,改善神经细胞突触可塑性,从而对VaD模型大鼠的学习记忆功能起到保护作用。参麻益智方的调控作用揭示了血管性痴呆新的治疗策略,为进一步研究神经元突触与脑微血管内皮细胞的相互作用奠定机制基础。同时印证了“血脉和利,精神乃居”的中医理论内涵,开辟了从络脉调治五神的新思路。
戴雅玲[2]（2021）在《电针调控miR-219a促进血管性认知障碍大鼠内嗅-海马CA1神经环路突触可塑性的机制》文中研究说明目的:本课题探讨电针是否通过调控mi R-219a促进内嗅皮层-海马神经环路突触可塑性,进而改善VCI大鼠的空间学习记忆功能,以期丰富电针改善血管性认知障碍的实验依据。方法:共纳入70只雄性SD大鼠（280g±30g）,随机选取10只作为假手术组,其余大鼠进行模型制备;将造模成功的VCI模型大鼠（n=50）,采用随机数字表法分为5组,即模型组、电针组、模型+mi R-219a过表达组、电针+mi R-219a过表达组、电针+空载病毒组,每组10只。电针组、电针+空载病毒组、电针+mi R-219a过表达组采用电针“百会”、“神庭”穴进行干预,疏密波1/20Hz,30min/次,1次/天,5天/周,干预4周,其余组别采用同等抓取,固定30min不做任何处理;（1）构建神经元特异性过表达mi R-219a的腺相关病毒,内嗅皮层区注射r VAACMV-Dio-mi R-219a-m Cherry-p A顺示踪病毒,海马CA1区注射r AVV-h Syn-e GFP-2ACRE-WPRE-PA逆示踪病毒;r VAA-CMV-Dio-m Cherry-p A空载病毒作为对照;（2）采用巴恩斯迷宫、Morris水迷宫检测各组大鼠空间学习记忆功能;（3）应用磁共振波谱成像分析各组大鼠内嗅皮层区、海马CA1区兴奋性神经物质代谢谷氨酸（glutamate,Glu）,抑制性神经递质γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）和N-乙酰天门冬氨酸（N-acetylaspartate,NAA）神经递质改变;（4）采用高尔基染色观察各组大鼠内嗅皮层区、海马CA1区突触形态学变化;（5）采用膜片钳电生理记录各组大鼠内嗅皮层-海马CA1神经环路长时程增强（Long-tern potentiation,LTP）,全细胞电压钳模式检测内嗅皮层、海马自发性兴奋性突触后电流（Spontaneous Excitatory Post Synaptic Current,s EPSC）与N-甲基-D-天门冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR）离子通道电流变化;（6）采用激光共聚焦显微镜下观察内嗅皮层-海马CA1 mi R-219a荧光定位;（7）采用RT-q PCR检测各组大鼠内嗅皮层区、海马区mi R-219a的定量表达。结果:（1）巴恩斯迷宫行为学进行模型检验。干预前,与假手术组相比,其余五组的逃避潜伏期均显着增加（P<0.01）,各组间比较没有明显差异（P>0.05）。与假手术组相比,其余五组的正确洞口接触次数以及目标象限时间明显减少（P<0.01）,且相比五组间两两比较均未见明显差异。（2）电针“百会”、“神庭”调控mi R-219a对VCI模型大鼠空间学习记忆功能的影响。干预后Morris水迷宫实验结果显示:学习阶段,与假手术组相比,模型组逃避潜伏期延长（P<0.01）;与模型组相比,电针组与电针+空载病毒组逃避潜伏期出现缩短（P<0.05）,模型+mi R-219a过表达组在逃避潜伏期出现延长（P<0.05）;与电针组相比,电针+mi R-219a过表达组逃避潜伏期明显增加（P<0.05）。记忆测试阶段,与假手术组相比,模型组穿越平台次数以目标象限占比明显减少（P<0.01）;与模型组相比,电针组与电针+空载病毒组大鼠的穿越平台与目标象限占比显着增加（P<0.05）;与电针组相比,电针+mi R-219a过表达组穿越平台与目标象限占比出现减少（P<0.05）。（3）电针“百会”、“神庭”调控mi R-219a对VCI模型大鼠内嗅皮层、海马CA1区神经物质代谢的影响。磁共振波谱结果显示:与假手术组相比,模型组内嗅皮层、海马CA1区NAA含量减少（P<0.01）,兴奋性谷氨酸神经递质含量下降（P<0.01）,而GABA神经递质含量呈升高（P<0.01）;与模型组相比,电针组与电针空载病毒组均出现NAA含量升高（P<0.05）,兴奋性Glu神经递质含量升高（P<0.05）,GABA神经递质含量降低（P<0.05）。与模型组对比,模型+mi R-219a过表达组NAA含量下调趋势（P>0.05）,兴奋性Glu神经递质呈下降趋势（P>0.05）,GABA神经递质含量具有升高趋势（P>0.05）;与电针组相比,电针+mi R-219a过表达组NAA含量降低（P<0.05）,兴奋性Glu神经递质含量降低趋势（P>0.05）,GABA神经递质含量升高（P<0.05）。（4）电针“百会”、“神庭”调控mi R-219a改善VCI模型大鼠内嗅皮层和海马CA1区突触形态。内嗅皮层与海马CA1区,假手术组的树突棘高分布且排列致密,其余五组的树突棘呈现脱落萎缩,模型组的树突棘数量显着下降（P<0.01）;与模型组相比,模型+mi R-219a过表达组的树突棘数量进一步减少（P<0.05）;电针组与电针+空载病毒组树突棘数量明显增加（P<0.05）;与电针组相比,电针+mi R-219a过表达组树突棘数量减少（P<0.05）。（5）电针“百会”、“神庭”调控mi R-219a改善VCI模型大鼠内嗅皮层-海马CA1神经环路场电位。与假手术组相比,模型组内嗅皮层-海马CA1神经环路f EPSP斜率显着降低（P<0.01）,而电针组较模型组内嗅皮层-海马CA1区神经环路f EPSP斜率升高（P<0.05）,与模型组相比,模型+mi R-219a过表达组该环路f EPSP斜率进一步降低（P<0.05）,而与电针组相比,电针+mi R-219a过表达组f EPSP斜率出现下调（P<0.05）。（6）电针“百会”、“神庭”调控mi R-219a影响VCI模型大鼠内嗅皮层、海马CA1区锥体神经元放电模式。结果显示:与假手术组相比,模型组内嗅皮层、海马CA1区s EPSC的振幅与频率显着降低（P<0.01）,电针组较模型组内嗅皮层、海马CA1区振幅与频率均升高（P<0.05）;与模型组相比,模型+mi R-219a过表达组内嗅皮层-海马CA1区s EPSC振幅、频率均呈降低（P<0.05）;与电针组相比,电针+mi R-219a过表达组内嗅皮层-海马区s EPSC振幅与频率均出现下降（P<0.05）。（7）电针“百会”、“神庭”调控mi R-219a上调VCI模型大鼠海马NMDAR离子通道电流强度。结果显示:与假手术组相比,模型组海马区NMDAR通道电流显着降低（P<0.01）;与模型组相比,电针组较海马区NMDAR通道电流升高（P<0.05）;与模型组相比,模型+mi R-219a过表达组海马区NMDAR通道电流显着降低（P<0.05）;而与电针组相比,电针+mi R-219a过表达组海马区NMDAR通道电流下调（P<0.05）。（8）电针“百会”、“神庭”对内嗅皮层、海马CA1区mi R-219a表达的影响。RT-q PCR结果显示:与假手术组相比,模型组内嗅皮层、海马区mi R-219a表达量均呈上升（P<0.01）。电针组较模型组mi R-219a表达量显着下降（P<0.05）;与模型组相比,mi R-219a过表达组大鼠的内嗅皮层与海马CA1区mi R-219a表达量显着上升（P<0.05）。（9）内嗅皮层-海马CA1区神经环路投射与mi R-219a定位表达情况:激光共聚焦显微镜观察显示,内嗅皮层-海马CA1存在直接神经纤维投射,且内嗅皮层、海马CA1区见mi R-219a荧光定位表达。结论:电针“百会”、“神庭”穴调控mi R-219a可促进内嗅皮层-海马神经环路突触可塑性改善血管性认知障碍模型大鼠空间学习记忆功能,其电生理机制与NMDAR离子通道电流增强,促进神经元兴奋性放电,诱发内嗅皮层-海马CA1神经环路LTP形成有关。
朱晓婷[3]（2021）在《解毒益智方对阿尔茨海默病双转基因小鼠行为学及大脑皮层内β-淀粉样蛋白沉积及BACE1表达影响的研究》文中研究说明选题依据:阿尔茨海默病（AD）致残、致死率高,发病机制复杂,大脑内Aβ异常沉积是AD发生发展的重要病理变化及核心环节,前期研究已证实了解毒益智方具有抑制AD线虫头部Aβ斑块沉积及相关基因表达的作用,随之开展的随机对照临床研究证实解毒益智方应用6个月后MMSE、MoCA、ADL评分变化明显优于口服尼莫地平片的对照组。黄连为解毒益智方中的君药,为该方的主要成分,在本方中发挥“解毒”的重要功效。经查阅国内外文献发现黄连中发挥“解毒”作用的主要物质为黄连多糖（CCP）,因此设计体外细胞实验探究解毒益智方中的君药黄连的主要有效成分CCP对Aβ25-35损伤PC12的保护作用,为“毒损”的病机及“解毒”的治法提供理论依据,为后续研究提供研究基础。因前期开展的研究均是以单基因单细胞的生物为研究对象,不能很好地模拟AD的疾病特点,因此选用APP/PS1双转基因小鼠作为研究对象,该小鼠很好的模拟了中枢神经系统Aβ异常沉积的状态,通过对小鼠的行为学研究及分子生物学研究,进一步评价解毒益智方的治疗作用。目的:通过体外细胞实验探讨基于“补肾益髓、活血化痰解毒”法形成的解毒益智方其中君药的有效成分CCP对Aβ25-35损伤PC12的保护作用。通过行为学、分子生物学等研究手段,对APP/PS1小鼠的认知功能、Aβ沉积、BACE1表达的相关蛋白、基因等方面进行检测和分析,探讨解毒益智方对APP/PS1小鼠的作用机制,为中药治疗AD的推广应用提供可靠的研究证据。方法:1.本研究分别从体外实验、动物实验探究解毒益智方的作用机制。体外实验部分采用MTT还原法、Hoechst33258荧光染色等方法对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤模型进行线粒体活性、细胞活力、细胞凋亡的测定,探究CCP对PC12细胞的保护作用。动物实验部分选用APP/PS1双转基因小鼠为研究对象,随机分为5组,分别是模型组（APP/PS1组）、盐酸多奈哌齐组（Donepezil组）、解毒益智方低剂量组（JDYZFL组）、解毒益智方中剂量组（JDYZFM组）、解毒益智方高剂量组（JDYZFH组）,每组16只小鼠,另选用16只C57小鼠作为正常对照组（Control组）,于每日早晨8:30进行灌胃治疗,各组每日灌胃药物及剂量分别是,正常组和模型组0.5%CMC溶液0.20g·kg-1·d-1;阳性对照组:盐酸多奈哌齐溶液0.30g·kg-1·d-1;解毒益智方高、中、低剂量组药物浓度依次为0.60g·kg-1·d-1,0.3g·kg-1·d-1,0.15g·kg-1·d-1。持续6个月治疗结束。2.以Aβ25-35损伤的PC12细胞为研究对象,通过测定细胞活力、LDH释放率、细胞凋亡率、和线粒体膜电位的水平等评价CCP的神经保护作用。3.通过水迷宫实验,记录解毒益智方对APP/PS1小鼠学习记忆能力的影响。4.通过ELISE及免疫荧光法检测APP/PS1小鼠脑内Aβ水平的变化,观察解毒益智方对APP/PS1小鼠脑内Aβ沉积的影响。5.采用PCR方法检测脑组织SIRT1、NF-κB、BACE1基因量变化,并进一步采用Western blot方法检测大脑皮层内SIRT1、BACE1、NF-κB蛋白的变化,观察解毒益智方对APP/PS1小鼠脑内AMPK/SIRT1-PPARγ-PGC1α-BACE1转运蛋白通路SIRT1、BACE1、NF-κB的影响。结果:1.通过体外研究观察CCP对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的影响PC12细胞活力测定结果显示:PC12细胞经过浓度为5-50μM的Aβ25–35处理24h后,细胞活力随着Aβ25–35浓度的增加从24%下降至61%。当Aβ25–35在浓度范围为5至50μM时引起PC12细胞中LDH释放增加至对照组的约130-160%。在用不同浓度的CCP（5至200μg/ml）处理PC12细胞24h后,未观察到显着的细胞损失。通过Hoechst33258染色及FCM测定细胞凋亡结果显示:细胞核在荧光显微镜下具有显着的浓缩核和凋亡的细胞形成。与在未处理的PC12细胞中观察到的完整,圆形和相对大的细胞核相比,暴露于50μMAβ25–35 24h的细胞显示出典型的细胞凋亡特征,包括染色质浓缩,核碎裂和凋亡小体的出现。用CCP不同浓度（5,25,50,100,200μg/ml）处理后可有效逆转细胞凋亡,其中100μg/ml效果最明显,FCM分析显示单独暴露于50μMAβ25–35 24h导致58.88±6.12%的凋亡率,这与正常对照组中的7.21±0.82%的值显着不同（P<0.01）。加入100μg/ml的CCP后,细胞凋亡下降至12.51±1.32%。通过JC-1红色荧光与JC-1绿色荧光的比率的变化来检测Aβ诱导的线粒体功能障碍结果显示:当PC12细胞暴露于50μM的Aβ25–35中24h后,与正常对照组相比,显着减弱了JC-1的红色荧光比例,提高了JC-1绿色荧光比例（P<0.01）。用CCP（100μg/ml）预处理Aβ25–35处理的PC12细胞显着抵消了Aβ25–35损伤引起的膜电位损失,JC-1从Aβ25–35处理的PC12细胞中的22.1%变为绿色荧光至84.3%,与正常对照组相近（P>0.05）。通过蛋白质印迹法检测细胞色素C结果显示:经50μMAβ25–35处理PC12细胞24h后细胞色素C在细胞质中的蛋白质表达增加,而预先用CCP（100μg/ml）处理的PC12细胞显着减弱线粒体释放的胞质细胞色素C。2.观察JDYZF对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力的影响。水迷宫实验结果显示:随着实验天数的后移,各组小鼠潜伏期、路径长度、游泳距离均有所缩短,表明随着训练次数的增加各组小鼠对象限平台的定位记忆能力随之有所提升。与Control组相比,APP/PS1组逃避潜伏期、路径长度、游泳距离均明显延长,差异显着（P<0.01）。首次到达平台的时间明显延长,目标停留次数明显减少,差异显着（P<0.01）。与APP/PS1组相比,Donepezil组、JDYZFL组、JDYZFM组逃避潜伏期、路径长度、游泳距离有所缩短,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。首次到达平台的时间缩短,目标停留次数增多,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。与Donepezil组相比,JDYZFL组作用与其相当,JDYZFM组略优于Donepezil组,差异有统计学意义（P<0.05）。干预治疗6个月的12月龄小鼠的定位航行实验及空间搜索实验结果优于干预治疗3个月的9月龄小鼠,差异有统计学意义（P<0.05）。3.观察JDYZF对APP/PS1双转基因小鼠脑内Aβ沉积的影响。各组小鼠结果如下:与Control组比较,APP/PS1组大脑皮层内可溶性及不可溶性Aβ1-40、Aβ1-42沉积极数量明显增多,具有极显着统计学意义（P<0.01）。与APP/PS1组相比,JDYZFL组、JDYZFM组及Donepezil组大脑皮层内可溶性及不可溶性Aβ1-40、Aβ1-42沉积数量不同程度降低,具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。与Donepezil组比较,JDYZFM组大脑皮层内可溶性及不可溶性Aβ1-40、Aβ1-42沉积数量有所降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。通过免疫荧光法测得小鼠大脑皮层内Aβ表达发现,Control组只产生微量Aβ,而APP/PS1组Aβ表达量明显增高,经过用药干预后,12月龄干预组小鼠可溶性及不可溶性Aβ1-40、Aβ1-42沉积数量较9月龄小鼠明显减少,免疫荧光标记从宏观上可以发现干预组Aβ沉积明显减少,APP/PS1组Aβ沉积明显增多。4.调控BACE1表达的相关因子结果（1）PCR检测结果各组小鼠进行的PCR检测结果显示:与Control组相比,APP/PS1组小鼠大脑皮层内BACE1/GAPDH、NF-κB/GAPDH表达含量明显增高,SIRT1/GAPDH明显降低,差异有显着统计学意义(（P<0.01）。与APP/PS1组相比,Donepezil组、JDYZFL组及JDYZFM组小鼠海马体内BACE1/GAPDH、NF-κB/GAPDH表达含量不同程度降低,SIRT1/GAPDH表达含量不同程度增高,差异具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。JDYZFH组在NF-κB/GAPDH表达上无统计学差异。与Donepezil组相比,JDYZFL组及JDYZFM组BACE1/GAPDH、NF-κB/GAPDH表达含量不同程度降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。PCR结果证实药物干预组可通过提高SIRT1mRNA的含量降低NF-κBmRNA、BACE1mRNA的表达,从而抑制Aβ的产生而起到神经保护的作用。各治疗组大脑皮层Aβ的表达均有所降低。连续灌胃6个月的各组小鼠与连续灌胃3个月的小鼠相比,除APP/PS1组及Control组,其他各组SIRT1mRNA的表达均有所提高,NF-κBmRNA、BACE1mRNA的表达均有所降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。（2）Westorn blot检测结果各组小鼠的Western blot检测结果显示:与Control组相比,APP/PS1组小鼠大脑皮层SIRT1的蛋白表达明显降低,NF-κB、BACE1蛋白表达显着升高（P<0.01）。与APP/PS1相比,Donepezil组、JDYZFL组、JDYZFM组BACE1、NF-κB表达降低,SIRT1蛋白表达增高差异有统计学意义（P<0.05）。与Donepezil比较,JDYZFL组、JDYZFM组NF-κB蛋白表达有所降低,差异有统计学意义（P<0.05）。JDYZFL组SIRT1、BACE1蛋白表达无显着差异,JDYZFM组SIRT1表达有所提高,BACE1蛋白表达量略有降低,差异有统计学意义（P<0.05）。经过为期3个月及6个月的干预后,各治疗组大脑皮层Aβ的表达均有所降低。连续灌胃6个月的各组小鼠与连续灌胃3个月的小鼠相比,除APP/PS1组及Control组,其他各组SIRT1的蛋白表达均有所提高,NF-κB、BACE1蛋白的表达均有所降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:1 CCP能够保护Aβ25-35损伤的PC12细胞,其机制可能与提高细胞活力、抑制细胞凋亡、减少LDH释放、阻断膜电位的丧失,并阻止线粒体细胞色素C释放,修复线粒体功能障碍有关。2 JDYZF各剂量组可不同程度提高APP/PS1双转基因小鼠定位航行实验及空间搜索实验的成绩,说明JDYZF可改善小鼠空间学习及记忆能力。3 JDYZF可不同程度降低APP/PS1双转基因小鼠大脑皮层内Aβ的异常沉积。4 JDYZF抑制BACE1的异常表达,其作用机制可能是通过调控大脑内AMPK/SIRT1-PPARγ-PGC1α-BACE1信号通路的相关因子表达实现的。
李海琦,刘海贝,周海燕,何金婷[4]（2020）在《NMDAR在血管性痴呆中的研究进展》文中研究表明血管性痴呆（VaD）是继阿尔茨海默病（AD）之外最常见的痴呆,约占病例的20%[1]。近年来血管性痴呆的发病率在老年患者中日益增高,脑血管病尤其是缺血性脑血管病是引发血管性痴呆的主要原因,目前认为与反复的缺血再灌注及长期慢性脑灌注不足有关[2]。血管性痴呆的发病机制仍不明确,
张丹丹[5]（2020）在《通络化痰胶囊治疗中风恢复期的临床疗效及对VD大鼠Clathrin介导的NMDAR胞吞动态变化研究》文中研究说明脑梗死又称缺血性脑卒中,是指因脑部供血障碍,缺血、缺氧所导致的局限性脑组织缺血性坏死或软化,属中医“中风病”范畴。通络化痰胶囊（Tongluo Huatan Capsule,THC）有活血通络、化痰熄风的功效,用于治疗中风病中经络痰瘀阻络证。团队课题组前期已完成该药Ⅳ期临床试验资料采集,但未对数据进行总结,现基于前期收集的临床数据进行系统性总结及分析,进一步评价通THC治疗中风恢复期的疗效和安全性。同时,基于中医“异病同治”思想,痰瘀阻络证也是缺血性卒中后引发血管性痴呆（Vescular Dementia,VD）常见证型,由此提出假设:THC对VD是否也会有效?据最新研究显示,上调网格蛋白（clathrin）及其内吞标记物Rab5B能够促进神经元表面N-甲基D-天冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR）的内吞,减少神经元膜表面的NMDAR分布,从而减轻兴奋性氨基酸毒性造成的神经元损伤,改善VD大鼠学习记忆能力,但是clathrin和NMDA受体在这一过程中各个时点的变化还未明确。故本研究拟针对VD大鼠模型,早期给药干预后造模,取海马组织,按照造模后3h/1d/3d/7d/14d不同时点,采用动物行为学及Western blotting（WB）、RT-PCR检测clathrin及其内吞标记物Rab5B、NMDAR1（NMDAR功能亚单位）的表达,探索脑缺血再灌注海马神经元clathrin介导的NMDA受体胞吞过程动态变化特点,同时探讨THC在VD早期干预中可能存在的作用,从而从微观表征层面证明中药异病同治的疗效。临床研究目的:进一步评价THC治疗中风病中经络恢复期痰瘀阻络证患者的疗效和安全性,为临床用药提供参考。方法:采用多中心、前瞻性、单臂队列临床研究,纳入34家二级甲等以上医院中符合西医脑梗死恢复期及中医中风病中经络痰瘀阻络证诊断标准的病例,予THC治疗4周。运用统计学方法对课题组前期采集的临床试验数据进行分析。以美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评定神经功能缺损,中医证候评分及改良Rankin量表（Modified Rankin Scale,mRS）为疗效评价指标;以血常规、肝功能、肾功能为安全性评价指标。结果:（1）2012年01月-2016年12月于34家二级甲等以上的医院纳入的受试者共2169例,THC治疗后神经功能缺损综合疗效、中医证候疗效总有效率分别为84.09%、81.01%;mRS总分减少50%及以上者817例（37.67%）,总分下降至0-1者1187例（54.73%）;（2）影响NIHSS综合疗效的多因素分析显示年龄（OR=1.024,95%CI 1.009-1.039,P=0.002）、基线合并高血压（OR=4.720,95%CI 3.513-6.341,PP=0.000）、冠心病（OR=2.601,95%CI 1.530-4.421,P=0.000）、高脂血症（OR=2.234,95%CI1.234-4.407,P=0.008）、基线 NIHSS 评分（OR=0.902,95%CI 0.849-0.957,P=0.001）影响临床神经功能缺损程度综合疗效。（3）影响中医证候疗效的多因素分析显示基线中医证候评分对中医证候疗效有影响（OR=62.023,95%CI 37.407-113.026,P=0.000）;（4）影响mRS改善的多因素分析显示年龄（OR=1.019,95%CI 1.007-1.031,P=0.001）、基线合并高血压（OR=2.898,95%CI 2.144-3.917,P=0.000）冠心病（OR=3.625,95%CI 1.516-8.673,P=0.004）对 mRS 的改善有影响;（5）THC不良反应总体发生率为0.00%。结论:（1）THC在中风恢复期的治疗中单用或联用其他西医基础治疗对于改善患者神经功能缺损程度、减轻残障及中医症状均有较好的疗效及安全性。（2）THC在中风恢复期的治疗中,年龄小、基线病情轻、没有基础疾病的患者疗效越好。实验研究目的:（1）探索VD大鼠海马区神经元clathrin介导的NMDA受体胞吞过程动态变化特点;（2）探索THC在VD早期干预中可能存在的作用。方法:大鼠适应性饲养7天后随机分为假手术组、模型组、THC组、美金刚组（MH组）、参知健脑方组（SZJN组）,分别予相应药物灌胃,假手术组、模型组予等量的蒸馏水灌胃,1次/日,连续7日。采用2VO+腹腔注射硝普纳的方法制备VD大鼠模型,假手术组大鼠分离双侧颈总动脉但不夹闭血管,不注射硝普钠。造模后进行跳台实验、新物体识别实验、Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力;造模后3h、1d、3d、7d、14d分别取大鼠海马组织通过RT-PCR、WB检测海马clathrin、NMDAR1、Rab5B在造模后不同时间点的表达水平。结果:（1）行为学①跳台试验（模型评价）结果显示:假手术组大鼠与正常组大鼠相比潜伏期以及错误次数无统计学差异;VD大鼠与正常组、假手术组相比,潜伏期缩短,错误次数增加（P<0.05）;②新物识别实验,模型组与假手术组比较,新物辨别指数下降（P<0.01）;THC组、SZJN组、MH组辨别指数均比模型组高（P<0.01）;③水迷宫:各组大鼠逃避潜伏期均有不同程度缩短（P<0.01）。不同分组对逃避潜伏期的影响有差异（P<0.05）,模型组与其他四组大鼠相比逃避潜伏期延长;撤去平台后,模型组与其他四组大鼠相比在目标限停留时间缩短（P<0.01）。和模型组相比,假手术组、SZJN组穿越平台次数增加（P<0.01）。（2）病理学HE染色显示,假手术组海马CA1区结构形态未见异常,神经元形态完整,排列整齐,胞核与胞质界限清晰可见无坏死。VD大鼠海马CA1区神经元形态不完整,排列紊乱,间隙增大,胞质稀少,神经元胞核深染,固缩呈三角形或不规则形,核仁不明显。造模后随着时间延长,VD大鼠海马CA1区神经元形态排列紊乱程度加重,间隙增加明显。与模型组比较,THC组、SZJN组大鼠海马CA1区整体组织损伤情况均有明显改善,神经元排列较为整齐,细胞形态结构较完整,胞质较均匀,胞核与胞质界限较清晰,少数细胞核深染、固缩,呈三角形或不规则形,核仁不明显。MH组大鼠海马CA1区细胞层次减少,神经元排列稀松,形态较模型组有明显改善,部分细胞核深染、固缩,呈三角形或不规则形。尼氏染色显示,假手术组大鼠海马CA1区神经元细胞排列整齐紧凑,染色后呈现为颗粒或状块状,染色浓密且规则。VD大鼠海马CA1区神经元排列散乱,造模后随着时间延长,细胞带出现了断裂,细胞凋亡数量增加,大量神经细胞出现尼氏体碎裂。THC组、SZJN组海马CA1区神经细胞排列较为整齐,少数细胞间隙增宽,细胞带稍有变薄,少量的神经细胞可见到有尼氏体碎裂、胞质中央尼氏小体消失。MH组海马CA1区神经元细胞形态和排列较模型组有所改善,部分神经元细胞凋亡,细胞带变薄。RT-PCR结果①与假手术组相比,造模后3h、1d、3d、7d、14dVD大鼠clathrin mRNA表达均减少（P<0.01）。与模型组相比,MHG组（P<0.01）、THC组（P<0.01）、SZJN组（P<0.01）大鼠海马clathrin mRNA相对表达量增加;②与假手术组相比,术后3h、7d、14d模型组大鼠NMDAR1 mRNA表达增加（P<0.01）,术后1d NMDAR1 mRNA表达下降（P<0.01）;与模型组相比,术后3h SZJN组NMDAR1 mRNA 表达降低（P<0.01）,术后 7d、14dMH 组（P<0.01）、THC 组（P<0.01）、SZJN组（P<0.01）NMDAR1 mRNA 表达降低;③与假手术组相比,术后3h、1d、3d、7d、14d VD大鼠Rab5B mRNA表达均减少（P<0.01）。与模型组相比,术后 3h、1d、3d、7d、14dMH 组（P<0.01）、THC 组（P<0.01）、SZJN组（P<0.01）大鼠海马Rab5B mRNA相对表达量增加。（3）WB结果①与假手术组相比,术后3h、1d、3d、7d、14d模型组大鼠clathrin蛋白表达均减少（P<0.01）。与模型组相比,THC组大鼠在术后3h（P<0.01）、1d（P<0.05）clathrin 蛋白表达升高,SZJN 组在术后 3h（P<0.01）、1d（P<0.05）、7d（P<0.05）、14d（P<0.05）clathrin蛋白表达升高,MH组在术后3h（P<0.01）clathrin蛋白表达增加。②与假手术组相比,术后3h（P<0.01）、7d（P<0.01）、14d（P<0.01）模型组大鼠的膜蛋白NMDAR1表达增加,术后1d表达减少（P<0.01）;与模型组相比,THC组大鼠术后3h（P<0.05）、7d（P<0.01）NMDAR1表达减少,1d时表达增多（P<0.01）,SZJN组、MH组大鼠术后3h、7d NMDAR1表达减少（P<0.01）。结论:（1）THC早期干预可减轻VD大鼠海马CA1区的病理损伤,提高学习及记忆能力,具有脑保护作用;（2）VD大鼠在脑缺血再灌注损伤后,海马神经元NMDAR1表达的动态演变在造模后先升后降再上升。clathrin及Rab5B表达降低导致神经元表面NMDAR内吞减少加重了兴奋性氨基酸毒性,导致学习记忆能力降低。（3）THC早期干预VD大鼠,可通过上调clathrin表达使神经元表面的NMDAR内吞增加,或下调NMDAR表达来减少兴奋性毒性作用对神经元的损伤,从而起到脑保护作用。
张嘉泳[6]（2020）在《基于Neurogranin调控海马突触可塑性探讨游泳运动改善慢性低灌注脑缺血致空间记忆障碍的机制》文中进行了进一步梳理目的:近年研究发现神经系统特异性突触后蛋白——Neurogranin（Ng）可作为认知功能障碍新的诊断标志物之一。本课题利用Loxp-Cre基因编辑技术在神经系统特异性敲除Ng基因,以探讨游泳运动是否调控Ng改善慢性低灌注脑缺血模型小鼠空间记忆功能,以及探讨Ng介导海马突触可塑性在游泳运动改善空间记忆功能中的作用机制。方法:参考Shibata等学者方法采用双侧颈总动脉狭窄术制备慢性低灌注脑缺血致血管性认知障碍模型。将42只C57/B6小鼠按照随机数字表随机分为假手术组（12只）和手术组（30只）。手术组行双侧颈总动脉狭窄术,假手术组仅分离双侧颈总动脉不作狭窄。术后采用激光散斑检测脑血流灌注判定造模是否成功,采用T迷宫检测其空间记忆是否损伤。将造模成功并符合条件的手术组24只C57/B6小鼠按照随机数字表随机分为模型组（12只）和游泳运动组（12只）。32只Ng基因敲除小鼠行双侧颈总动脉狭窄术,采用同样的方法进行模型检验。将造模成功并符合条件的24只Ng基因敲除小鼠按照随机数字表随机分为模型+Ng敲除组（12只）和游泳运动+Ng敲除组（12只）。术后1周开始干预,游泳运动组和游泳运动+Ng敲除组先进行1周的游泳运动适应,然后进行4周游泳运动的干预,每天60 min,每周5天。干预后采用T迷宫和Morris水迷宫检测其空间记忆行为学的变化;采用膜片钳电生理技术检测海马CA3-CA1长时程增强（long term potentiation,LTP）效应的改变;采用Western Blotting实验检测海马组织突触相关蛋白Ng、CaM和CaMKII的表达水平。结果:（1）游泳运动对慢性低灌注脑缺血模型小鼠空间记忆能力的影响:T迷宫测试显示:干预前,与假手术组相比,模型组、游泳运动组、模型+Ng敲除组和游泳运动+Ng敲除组T迷宫空间自主交替率均下降（P=0.025,P=0.012,P=0.001,P=0.001）;干预后,模型组与假手术组相比,空间自主交替率降低（P<0.001）,游泳运动组空间自主交替率高于模型组（P<0.001）,模型+Ng敲除组空间自主交替率低于模型组（P=0.032）,游泳运动+Ng敲除组空间自主交替率低于游泳运动组（P<0.001）。Morris水迷宫测试显示:干预后,在水迷宫中定向导航学习的第2、和第4天,模型组逃避潜伏期较假手术组延长（P<0.001）;在水迷宫定向导航学习的第2、第3和第4天游泳运动组逃避潜伏期较模型组缩短（P<0.001,P=0.037,P<0.001）,而游泳运动组逃避潜伏期较游泳运动+Ng敲除组缩短（P<0.001,P=0.014,P<0.001）。在水迷宫空间探索测试中,模型组的穿越平台次数少于假手术组（P<0.001）,游泳运动组的穿越平台次数多于模型组（P=0.040）,模型+Ng敲除组的穿越平台次数少于模型组（P=0.033）,游泳运动+Ng敲除组的穿越平台次数少于游泳运动组（P=0.022）。（2）游泳运动对慢性低灌注脑缺血模型小鼠海马LTP的影响:与假手术组相比,模型组在100 Hz单脉冲刺激诱导后海马CA3-CA1的兴奋性突触后电位（field excitatory postsynaptic potential,fEPSP）斜率下降（P<0.001）;与模型组相比,游泳运动组海马CA3-CA1的fEPSP斜率增加（P=0.037）;与模型组相比,模型+Ng敲除组海马CA3-CA1的fEPSP斜率下降（P=0.029）;与游泳运动组相比,游泳运动+Ng敲除组海马CA3-CA1的fEPSP斜率下降（P=0.011）。（3）游泳运动对慢性低灌注脑缺血模型小鼠海马突触相关蛋白表达水平的影响:模型组Ng表达水平较假手术组降低（P=0.003）,游泳运动组Ng表达水平较模型组升高（P=0.029）,模型+Ng敲除组Ng表达水平低于模型组（P=0.020）,游泳运动+Ng敲除组Ng表达水平低于游泳运动组（P<0.001）,模型+Ng敲除组与游泳运动+Ng敲除组相比无差异（P=0.950）。模型组与假手术组相比CaM表达水平下降（P=0.006）,游泳运动组与模型组相比CaM表达水平升高（P=0.026）,模型+Ng敲除组与模型组相比CaM表达水平下降（P=0.047）,游泳运动+Ng敲除组与游泳运动组相比CaM表达水平下降（P=0.003）,模型+Ng敲除组与游泳运动+Ng敲除组相比无差异（P=0.367）。与假手术组相比,模型组CaMKII表达水平下降（P=0.003）;与模型组相比,游泳运动组CaMKII表达水平升高（P=0.044）;与模型组相比,模型+Ng敲除组CaMKII表达水平下降（P=0.026）;与游泳运动组相比,游泳运动+Ng敲除组CaMKII表达水平降低（P=0.002）;模型+Ng敲除组与游泳运动+Ng敲除组相比无差异（P=0.490）。结论:本研究证实了游泳运动通过调控Ng的表达高慢性低灌注脑缺血致血管性认知障碍模型小鼠的空间记忆能力,同时Ng调控海马长时程增强以及激活突触可塑性钙信号转导蛋白是其作用机制之一。
杨超[7]（2020）在《基于炎症反应、氧化应激、miRNA-124/BACE1/Aβ通路探讨涤痰汤治疗血管性痴呆模型大鼠的作用机制》文中指出研究目的:血管性痴呆（vascular dementia,VD）是指由缺血性卒中、出血性卒中和造成记忆、认知和行为等脑区低灌注的脑血管疾病所致的严重认知功能障碍综合征。VD的发病机制与炎症反应、氧化应激、Aβ异常沉积等多个病理机制有关,涤痰汤是临床治疗痴呆的经典方剂,可有效改善VD患者的认知功能障碍。涤痰汤属于中药复方,治疗疾病具有多途径、多基因、多靶点的优势。本试验拟通过改良双侧颈总动脉永久阻断法（2-VO）制备VD大鼠模型,对VD大鼠行为及记忆能力、海马组织HE染色、氧化应激、炎症反应及mi RNA-124/BACE1/Aβ信号通路等多方面进行研究,多角度多层次探讨涤痰汤治疗VD的作用机制。研究方法:一理论探讨:从中医基础理论探讨VD的病因、病机、治则、治法和方药,提出痰浊阻窍是VD发生认知障碍的病机中心环节,从临床研究以及中药成分研究分析涤痰汤治疗VD的可行性。二动物实验:1.SPF级Wistar大鼠50只适应性饲养1周后开始实验,随机分为5组,即假手术组、模型组、涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组、盐酸多奈哌齐组,每组10只。通过改良双侧颈总动脉永久阻断法（2-VO）制备VD大鼠模型,每组大鼠给与相应干预措施,2.采用Morris水迷宫实验观察VD大鼠认知功能的改变,通过HE染色用光学显微镜观察大鼠海马组织形态学变化,探讨涤痰汤对VD大鼠认知功能障碍以及海马组织病理损伤的治疗作用。3.通过免疫组化法检测NOX2蛋白表达,Western blot法检测海马组织HO-1蛋白表达,生化方法检测海马组织ROS、GSH含量检测,来探讨涤痰汤对VD大鼠氧化应激损伤的影响。4.通过免疫组化法检测NF-кB的表达,Western blot法检测海马组织TNF-α蛋白表达,ELISA检测海马组织IL-1β、IL-10含量,探讨涤痰汤对VD大鼠炎症反应的影响。5.通过PCR检测海马组织中mi R-124的表达,western blot法检测海马组织中BACE1的表达,免疫组化法检测海马组织中Aβ的表达,探讨涤痰汤基于mi RNA-124/BACE1/Aβ通路对VD模型大鼠的治疗作用。研究结果:1.定位航行实验结果:与假手术组比较,VD模型组大鼠的逃避潜伏期明显延长（P<0.01）。与模型组比较,涤痰汤高剂量组的逃避潜伏期明显缩短（P<0.01）,西药组及涤痰汤低剂量组的逃避潜伏期缩短（P<0.05）。与西药组比较,涤痰汤高剂量组的逃避潜伏期缩短（P<0.05）,涤痰汤低剂量组的逃避潜伏期无明显差异（P>0.05）。2.空间探索实验结果:与假手术组比较,模型组大鼠穿越原平台次数及停留时间明显缩短（P<0.01）。与模型组比较,涤痰汤高剂量组（P<0.01）和涤痰汤低剂量组（P<0.05）大鼠穿越原平台次数及停留时间明显增加,西药组穿越原平台次数及停留时间也明显增加（P<0.05）。与西药组比较,涤痰汤高剂量组穿越原平台次数及停留时间均明显增加（P<0.05）,而涤痰汤低剂量组的穿越原平台次数及停留时间无明显差异（P>0.05）。3.HE染色:光镜下各组大鼠海马形态学观察与比较结果如下:假手术组大鼠海马CA1区锥体细胞形态规则而饱满、细胞数量多、边界清晰、层次分明、排列整齐而紧密、染色均匀,细胞核较大,呈类圆形,着色均匀,核仁清楚,细胞质丰富。模型组大鼠海马CA1区锥体细胞形态不规则、细胞边界模糊、排列紊乱而疏松,正常细胞数量减少,可见坏死的神经元,细胞膜、核膜不清晰,细胞核形态不规则,着色变浅,核仁固缩、深染,胞浆浑浊。涤痰汤高剂量组,涤痰汤低剂量组以及西药组的大鼠海马CA1区锥体细胞,与模型组比较,细胞形态规则、边界清晰、层次分明、排列整齐,正常细胞数量明显增多,坏死的神经元少,细胞核形态规则,核膜及核仁清楚,细胞质丰富。其中涤痰汤高剂量组在海马病理学改变上优于涤痰汤低剂量组和西药组。4.海马组织中NOX2的表达情况:与假手术组比较,VD模型组NOX2蛋白相对表达量明显增高（P<0.01）;与模型组比较,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组以及西药组NOX2蛋白相对表达量降低（P<0.01,P<0.05,P<0.05）;与西药组相比,涤痰汤高剂量组NOX2蛋白相对表达量明显降低（P<0.05）,西药组与涤痰汤低剂量组NOX2蛋白相对表达量的差异不具有统计学意义（P>0.05）。5.海马组织中HO-1蛋白表达情况:与假手术组比较,VD模型组HO-1蛋白相对表达量明显增高（P<0.01）;与模型组比较,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组以及西药组HO-1蛋白相对表达量均有增高（P<0.01,P<0.05,P<0.05）;与西药组相比,涤痰汤高剂量组HO-1蛋白相对表达量增高（P<0.05）,西药组与涤痰汤低剂量组HO-1蛋白相对表达量的差异不具有统计学意义（P>0.05）。6.海马组织ROS含量:与假手术组比较,VD模型组ROS表达量明显增高（P<0.01）;与模型组比较,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组以及西药组ROS表达量降低（P<0.01,P<0.05,P<0.05）;与西药组相比,涤痰汤高剂量组ROS表达量明显降低（P<0.05）,西药组与涤痰汤低剂量组ROS表达量的差异不具有统计学意义（P>0.05）。7.海马组织GSH含量:与假手术组比较,VD模型组GSH表达量明显降低（P<0.01）;与模型组比较,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组以及西药组GSH表达量升高（P<0.01,P<0.05,P<0.05）;与西药组相比,涤痰汤高剂量组GSH表达量明显升高（P<0.05）,西药组与涤痰汤低剂量组GSH表达量的差异不具有统计学意义（P>0.05）。8.海马组织中NF-кB的表达结果:与假手术组相比,VD模型组NF-кB表达量明显增高（P<0.01）;与模型组比较,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组及西药组NF-кB表达量均下降（P<0.01,P<0.05,P<0.05）;与西药组比较,涤痰汤高剂量组NF-кB表达量下降（P<0.05）。涤痰汤低剂量与西药组之间差异无统计学意义（P>0.05）9.海马组织TNF-α表达水平:与假手术组相比,VD模型组TNF-α表达量明显增高（P<0.01）;与模型组比较,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组及西药组TNF-α表达量均下降（P<0.01,P<0.05,P<0.05）;与西药组比较,涤痰汤高剂量组TNF-α表达量下降（P<0.05）。涤痰汤低剂量与西药组之间差异无统计学意义。（P>0.05）10.海马组织IL-1β含量检测结果比较:与假手术组相比,VD模型组IL-1β表达量明显增高（P<0.01）;与模型组比较,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组及西药组IL-1β表达量均下降（P<0.01,P<0.05,P<0.05）;与西药组比较,涤痰汤高剂量组IL-1β表达量下降（P<0.05）。涤痰汤低剂量与西药组之间差异无统计学意义。（P>0.05）11.海马组织IL-10含量检测结果比较:与假手术组相比,VD模型组IL-10表达量明显增高（P<0.01）;与模型组比较,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组及西药组IL-10表达量均增高（P<0.01,P<0.05,P<0.05）;与西药组比较,涤痰汤高剂量组IL-1β表达量增高（P<0.05）。涤痰汤低剂量与西药组之间差异无统计学意义（P>0.05）12.海马组织中mi R-124的表达情况:与假手术组比较,VD模型组mi R-124表达量明显降低（P<0.01）;与模型组比较,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组以及西药组mi R-124表达量升高（P<0.01）;与西药组相比,涤痰汤高剂量组mi R-124表达量的差异不具有统计学意义（P>0.05）,西药组与涤痰汤低剂量组mi R-124表达量的差异具有统计学意义（P<0.05）。13.海马组织中BACE1的表达情况:与假手术组比较,VD模型组BACE1表达量明显增高（P<0.01）;与模型组比较,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组以及西药组BACE1表达量降低（P<0.01,P<0.05,P<0.05）;与西药组相比,涤痰汤高剂量组BACE1表达量明显降低（P<0.05）,西药组与涤痰汤低剂量组BACE1表达量的差异不具有统计学意义。（P>0.05）14.海马组织中Aβ的表达情况:与假手术组比较,VD模型组Aβ表达量明显增高（P<0.01）;与模型组比较,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组以及西药组Aβ表达量降低（P<0.01,P<0.05,P<0.05）;与西药组相比,涤痰汤高剂量组Aβ表达量明显降低（P<0.05）,西药组与涤痰汤低剂量组Aβ表达量的差异不具有统计学意义（P>0.05）。研究结论:1.涤痰汤能显着改善VD模型大鼠的学习记忆能力和空间探索能力以及海马组织的病理损伤,以涤痰汤高剂量组治疗效果最为显着。2.涤痰汤可以通过抑制NOX2蛋白表达,促进海马组织HO-1蛋白表达,减少海马组织ROS的含量,增加GSH含量来缓解VD大鼠氧化应激损伤。其中以涤痰汤高剂量组治疗效果最为显着。3.涤痰汤可以抑制NF-кB,TNF-α,IL-1β的表达,促进IL-10的表达缓解VD大鼠的炎症反应。其中以涤痰汤高剂量组治疗效果最为显着。4.涤痰汤可以通过促进mi RNA-124的产生,从而抑制BACE1/Aβ发挥对VD大鼠的治疗作用。其中以涤痰汤高剂量组治疗效果最为显着。
田丹枫[8]（2020）在《参知健脑方对拟血管性痴呆细胞模型的神经保护作用及机制研究》文中认为血管性痴呆（Vascular Dementia,VD）是痴呆常见类型之一,以记忆力进行性衰退、认知功能障碍及性格、情感等精神改变为主要临床表现。VD的病理机制与兴奋性氨基酸毒性损伤、突触可塑性改变、钙超载、氧化应激损伤及细胞凋亡等过程密切相关,早预防、早发现、早治疗可显着提高VD患者的生存率及生活质量,降低死亡率。课题组基于VD的“毒损脑络”中医创新病因病机理论并结合多年临床经验,创制了具有解毒通络作用的参知健脑方。前期动物体内实验研究表明,本方可改善VD大鼠的认知功能,修复受损海马神经元,通过调控谷氨酸突触囊泡转运关键蛋白clathrin介导的NMDA受体内吞过程,减轻谷氨酸所致神经兴奋性毒性而起到神经保护作用。但研究大多仅从单个靶点或通路评估参知健脑方对VD的干预作用,并未完全解释其药效机制;且目前尚未对其进行体外细胞实验深入分析验证,其分子机制值得更深入地探索研究。目的:基于VD“毒损脑络”理论,（1）通过网络药理学探讨参知健脑方治疗VD的药理作用及分子机制;（2）通过体外实验,筛选干预药物的适宜浓度,并探讨参知健脑方对拟VD细胞模型增殖及毒性的影响;（3）研究参知健脑方对拟VD细胞模型周期、凋亡及细胞内游离Ca2+和ROS/Superoxide水平的影响,探讨其对VD细胞模型谷氨酸兴奋性毒性的神经保护作用,并验证参知健脑方的治疗有效性及网络药理学结果的可靠性;（4）研究参知健脑方对拟VD细胞模型clathrin、RAB5B和NMDAR1表达水平的影响,探讨其是否通过调控clathrin介导的NMDA受体内吞过程发挥对VD的治疗作用,并验证网络药理学结果的可靠性。方法:第一部分:依托多种数据库检索并收集参知健脑方的入血化学成分、作用靶点和VD作用靶点,随后整合数据获得参知健脑方治病靶点。通过Cytoscape3.7.1构建参知健脑方-活性化合物-治病靶点网络图,STRING数据库构建蛋白互作网络,DAVID数据库进行基因本体论（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析。第二部分:采用谷氨酸诱导PC12细胞损伤作为VD细胞模型,采用CCK-8法和IncuCyte动态细胞成像技术筛选出谷氨酸适宜造模剂量及参知健脑方低、中、高干预剂量。参知健脑方各剂量与盐酸美金刚分别干预VD细胞模型,观察其对细胞形态、细胞增殖及毒性的作用。第三部分:采用谷氨酸诱导的PC12细胞损伤作为VD细胞模型,参知健脑方各剂量与盐酸美金刚分别干预VD细胞模型,采用流式细胞术等技术观察其对细胞周期、凋亡、细胞内游离Ca2+、活性氧和超氧化物（ROS/Superoxide）水平的影响,qRT-PCR检测caspase-3 mRNA的相对表达水平。第四部分:采用谷氨酸诱导的PC12细胞损伤作为VD细胞模型,参知健脑方各剂量与盐酸美金刚分别干预VD细胞模型。采用免疫荧光和Western blot技术分别检测clathrin、RAB5B和NMDAR1的分布和蛋白表达水平;qRT-PCR技术检测clathrin和NMDAR1在mRNA水平上的表达情况。结果:第一部分:网络药理学研究结果表明,（1）参知健脑方-活性化合物-治病靶点网络图包含3个单味药,18个活性化合物,154个治病靶点。其中,芍药苷、白芍苷和新芒果苷等活性成分关联基因较多,FGF1和FGF2位列治病靶点首位。（2）PPI网络包含154个靶点蛋白,关键蛋白涉及INS、ALB、AKT1、CASP3、JUN、PTGS2等。（3）GO富集分析共有条目4960个,其中生物过程相关条目4176个,细胞组成相关条目306个,分子功能相关条目478个。（4）KEGG富集分析共有相关通路30条,涉及MAPK信号通路、HIF-1信号通路、凋亡通路、神经活性配体-受体相互作用通路、钙信号通路等。第二部分:体外实验结果表明,（1）药物干预剂量筛选:谷氨酸适宜造模剂量为22.5 mM,参知健脑方低、中、高剂量分别为:0.05、0.1、0.2 mg/mL,盐酸美金刚干预剂量为10 μM。（2）细胞形态学:正常PC12细胞呈不规则长梭形,形态完整,突起明显,贴壁牢固;谷氨酸处理的PC12细胞呈圆球形,结构不完整,胞体皱缩,易聚集成团;突起变短或减少、消失,细胞贴壁不牢;随着时间的增加,死细胞数明显增多,细胞死亡率显着上升。与模型组相比,参知健脑方各剂量组细胞胞体均相对完整,部分细胞突起少量存在,存在突触间联系;细胞贴壁较模型组牢固;随着时间的增加,死细胞数增多不明显,细胞死亡率没有显着上升。盐酸美金刚组细胞形态较模型组略有改善。（3）CCK-8增殖实验:谷氨酸可以显着降低PC12细胞活力,抑制细胞增殖（P<0.05）;参知健脑方各剂量和盐酸美金刚均可明显提高PC12细胞活力,促进细胞增殖,降低细胞毒性（P<0.01）。（4）IncuCyte增殖实验:谷氨酸可以持续增加细胞绿色荧光面积和死细胞数,死亡率呈明显上升趋势,细胞融合率持续下降;参知健脑方各剂量均可以有效减少细胞绿色荧光面积和死细胞数,死亡率降低,融合率呈上升趋势;盐酸美金刚的各项结果趋势与谷氨酸类似。（5）CFSE增殖实验:谷氨酸可以明显增高CFSE平均荧光强度（P<0.01）,参知健脑方各剂量和盐酸美金刚CFSE平均荧光强度均呈减弱趋势,但差异无显着统计学意义（P>0.05）。第三部分:体外实验结果表明,（1）细胞周期:谷氨酸可以显着增加S期细胞比例,使细胞阻滞在S期（P<0.01）;参知健脑方各剂量和盐酸美金刚均可以显着降低S期细胞比例（P<0.01）。（2）细胞凋亡:谷氨酸可以明显增加凋亡率（P<0.01）,参知健脑方各剂量和盐酸美金刚均可以显着减少细胞凋亡（P<0.01）。（3）Ca2+和ROS/Superoxide水平:谷氨酸可明显升高细胞内Ca2+和ROS/Superoxide水平（P<0.01）,参知健脑方各剂量和盐酸美金刚均可不同程度降低细胞内Ca2+和ROS水平（P<0.05,P<0.01）。（4）qRT-PCR:谷氨酸可以明显增加caspase-3 mRNA的表达水平（P<0.01）;参知健脑方和盐酸美金刚均可显着降低caspase-3 mRNA的表达水平（P<0.01）。第四部分:体外实验结果表明,（1）免疫荧光:clathrin主要表达于细胞膜和细胞质;RAB5B主要表达于细胞膜和细胞质中的早期内体;NMDAR1主要表达于细胞膜和突触。谷氨酸显着降低clathrin和RAB5B的表达（P<0.01,P<0.01）,增加NMDAR1的水平（P<0.01）;参知健脑方各剂量均可上调clathrin、RAB5B水平（P<0.05,P<0.05）,下调NMDAR1水平（P<0.05）。（2）qRT-PCR:谷氨酸可明显降低clathrin mRNA的表达（P<0.01）,并增加NMDAR1 mRNA的表达水平（P<0.01）;参知健脑方可明显增加clathrin的表达并显着降低NMDAR1的表达水平（P<0.01）。（3）Western Blot:谷氨酸可抑制clathrin和RAB5B的表达,明显增加NMDAR1的表达水平（P<0.01）;参知健脑方各剂量均可以显着上调clathrin、RAB5B表达水平,下调NMDAR1 的水平（P<0.01）。结论:（1）参知健脑方治疗VD的作用靶点和通路机制呈现多角度、多途径、多环节的特点,其治病靶点大多与血管、神经保护及突触可塑性调节相关,且靶点与通路之间相互协同发挥作用,提示这可能是参知健脑方治疗VD的关键,为深入研究参知健脑方治疗VD的其他机制提供了新思路。（2）适宜浓度的谷氨酸可以显着促进PC12细胞增殖,但谷氨酸浓度过高会产生细胞毒性,导致细胞死亡。参知健脑方各剂量能均能明显促进细胞增殖,提高细胞活力及细胞融合率,减少死细胞数目及死亡率,减少细胞毒性损伤;均对细胞形态有一定修复作用,改善细胞贴壁不牢的状态。（3）参知健脑方能有效修复细胞周期循环,下调caspase-3的表达而减少细胞凋亡;降低细胞内Ca2+浓度而阻止Ca2+内流并增强细胞清除ROS和Superoxide的能力,减少谷氨酸毒性积累及氧化应激损伤。参知健脑方可影响上述多种途径发挥神经保护作用;验证了参知健脑方治疗VD的有效性以及网络药理学计算机预测结果的可靠性。（4）Clathrin介导的NMDA受体胞吞障碍导致谷氨酸兴奋性毒性积累,“解毒通络”的参知健脑方可改善谷氨酸损伤PC12细胞clathrin介导的NMDA受体胞吞过程而降低谷氨酸神经兴奋性毒性。其发挥神经保护的作用机制可能与上调clarhrin和RAB5B的表达,促进clathrin介导的NMDA受体胞吞过程有关。验证了参知健脑方治疗VD的有效性以及网络药理学研究结果的可靠性,为“解毒通络”法则治疗VD提供了微观证据。
张宇豪[9]（2020）在《基于海马突触传递效能和可塑性探讨电针改善血管性痴呆学习记忆功能的作用机制》文中研究指明目的:探讨“通督调神”电针“百会”、“神庭”是否通过调节血管性痴呆（Vascular dementia,VD）模型大鼠海马突触传递效能和可塑性以及相关蛋白的表达及其磷酸化水平,从而改善VD模型大鼠学习记忆功能。方法:取2月龄雄性SD大鼠（280-300g）60只,随机选取12只作为假手术组,仅暴露双侧颈总动脉,另外48只SD大鼠采用双侧颈总动脉闭塞（2-Vessels Occlusion,2-VO）手术制备VD模型,通过小动物核磁共振的3D-TOF血管成像和新物体识别行为学检测进行模型检验;将造模成功的36只VD模型大鼠,采用随机数字表法随机分为3组,模型组、电针组和非穴组,每组12只,通过新物体识别指数比较其行为学基线是否一致;电针组采取电针“百会”、“神庭”穴进行干预,疏密波2/20Hz,30min/次,1次/天,5天/周,共4周;非穴组采用电针双侧胁下非经非穴,参数和时间与电针组一致,模型组和假手术组进行同等条件下抓取固定,不予电针干预;采用Morris水迷宫检测各组大鼠以空间为参考的学习记忆功能;分离和制备海马活体脑片,采用膜片钳电生理记录技术检测各组大鼠海马CA3-CA1区场电位特征,包括Input-output（I/O曲线）、配对脉冲异化比率（Paired-pulse facilitation ratios,PPR）以及100Hz高频刺激（High frequency stimulation,HFS）诱发的场电位兴奋性突触后电位（field excitatory postsynaptic potential,fEPSP）;免疫蛋白印记（Westen blotting,WB）检测各组大鼠海马突触可塑性相关蛋白N-甲基-D-天门冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR）的亚基Nr2B、α-氨基-3羟基-5甲基-4受体（α-amino-3hydroxy-5methyl-4isoxazole receptor）的亚基GluR1以及钙-钙调蛋白依赖性激酶II(Ca2+-calmodulin-dependent protein kinase II,CaMKⅡ)蛋白表达及其磷酸化水平。结果:（1）VD大鼠模型检验:大鼠造模后进行小动物磁共振3D-TOF血管成像检测,结果显示双侧颈总动脉消失,周围新生代偿细小毛细血管,表明2-VO手术成功;新物体识别行为学实验,结果显示,与假手术组相比,造模组大鼠1h物体偏爱系数明显降低（P<0.01）,24h检测的物体偏爱系数亦降低（P<0.01）;（2）电针“百会”、“神庭”对VD模型大鼠学习记忆功能的影响:电针干预后,Morris水迷宫实验结果显示,在大鼠为期4天的定位航行实验中,与假手术组相比,模型组、电针组和非穴组三组大鼠在第2、3、4天的逃避潜伏期时间均增加（P<0.05）;而电针组相比模型组和非穴组,在第3、4天的逃避潜伏期相对缩短（P<0.05）。在记忆测试空间探索实验中,与假手术组相比,模型组、电针组和非穴组三组大鼠穿越平台次数明显减少（P<0.01）;而与模型组相比,电针组大鼠的穿越平台次数显着增加（P<0.05）;提示电针“百会”、“神庭”可以改善VD模型大鼠学习和记忆提取能力。（3）电针“百会”、“神庭”对VD模型大鼠海马CA3-CA1区I/O曲线和PPR的影响:与假手术组相比,模型组大鼠I/O曲线在10μA、20μA、30μA、40μA、50μA、60μA、70μA、80μA、90μA刺激时电压均值显着降低（P<0.01）;而电针组与模型组相比,I/O曲线从20μA刺激电流开始电压均值便显着增高（P<0.01）;假手术组、模型组、电针组和非穴组四组大鼠海马CA3-CA1区基础场电位刺激6个时间间隔（10ms、20ms、50ms、100ms、200ms和500ms）的PPR组间比较均无统计学差异（P>0.05）;提示电针“百会”、“神庭”可以提高VD模型大鼠海马CA3-CA1区的基础传递效能,但对突触前神经递质的释放无影响。（4）电针“百会”、“神庭”对VD模型大鼠海马CA3-CA1区LTP的影响:通过100Hz的HFS诱发,假手术组大鼠海马CA3-CA1区fEPSP振幅相比基线增幅达70%以上,说明海马CA3-CA1区长时程增强（Long-tern potentiation,LTP）诱导成功;与假手术组相比,模型组海马CA3-CA1区fEPSP显着降低（P<0.01）,差异具有显着统计学意义;而电针组较模型组海马CA3-CA1区fEPSP升高（P<0.05）;电针组与非穴组相比,差异不明显（P>0.05）,无统计学意义;提示电针“百会”、“神庭”可以增强VD模型大鼠海马CA3-CA1区LTP进而促进其突触可塑性。（5）电针“百会”、“神庭”对VD模型大鼠海马Nr2B、GluR1以及CaMKⅡ蛋白表达及其磷酸化水平的影响,结果显示:与假手术组相比,模型组海马Nr2B、AMPAR和CaMKⅡ蛋白及其磷酸化表达均显着降低（P<0.05）,总蛋白磷酸化水平亦降低（P<0.05）差异具有统计学意义;而电针组较模型组各蛋白磷酸化水平显着升高（P<0.05）,总蛋白浓度亦有不同程度增加;非穴组与模型组相比,差异无统计学意义（P>0.05）;提示电针“百会”、“神庭”可以通过调节Nr2B、GluR1以及CaMKⅡ蛋白表达及其磷酸化水平从而改善VD大鼠海马突触可塑性。结论:电针“百会”、“神庭”可以提高VD模型大鼠海马CA3-CA1区基础突触传递效能和突触可塑性进而改善其学习记忆能力,其分子机制可能与上调突触后受体及其钙信号传导相关蛋白的表达及其磷酸化水平有关。
韩孟晓[10]（2020）在《培补二天膏对老年原发性高血压大鼠学习记忆功能的影响》文中研究说明目的:探究培补二天膏对老年原发性高血压大鼠的学习记忆功能的影响,以及可能的作用机制。方法:用低、中、高剂量的培补二天膏对12月龄的原发性高血压大鼠（spontaneouslyhypertensiverats,SHR）进行为期四周的灌胃,灌胃结束后,通过水迷宫（Morris water maze）实验对原发性高血压大鼠的学习和记忆功能进行检测。通过对大鼠海马体组织进行尼氏染色,观察大鼠海马体CA1,CA2,DG区的神经元数量。对大鼠海马体组织蛋白采用western blot方法检测学习记忆功能相关蛋白N-methyl-d-aspartate receptor 2B（NMDAR 2B）,glutamate receptor 1（GluA1）,phosphorylated-calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ（p-CaMK Ⅱ）,phosphorylated-cAMP responsive element-binding protein（p-CREB）and phosphorylated-Tyrosine Kinase receptor B（p-TrkB）表达量。结果:水迷宫结果显示老年SHR相较于青年SHR逃避潜伏期显着增加,而探索平台实验中进入平台象限的次数,在平台象限的时间百分比和路程百分比都有显着的下降,表现出明显的学习记忆功能障碍。低剂量培补二天膏给药后的老年SHR,大鼠逃避潜伏期与未给药组没有差异,中高剂量培补二天膏显着缩短了第一天的逃避潜伏期;在平台探索实验中,低中高剂量处理后的老年SHR进入平台象限的次数有明显提升。而在平台象限的时间和路程百分比结果中,只有高剂量给药组表现了明显的提高。尼氏神经元染色结果显示老年SHR海马体DG区神经元数量有所下降,而中高剂量的培补二天膏对海马体DG区的神经元数目的下降有明显的改善作用。Western blot结果显示老年SHR的学习记忆功能相关蛋白（NMDAR 2B,GluA1,p-CaMK,p-CREB）都有较明显的下调,虽然低剂量和中剂量只是部分上调这些蛋白的表达,但是高剂量组可以上调所有这些蛋白的表达。结论:（1）老年SHR有显着的认知功能下降（2）培补二天膏可以有效改善海马体DG区神经元数目的下降。（3）培补二天膏可以通过提高学习记忆功能中神经元突触long term potential（LTP）相关蛋白表达水平来改善老年SHR的学习记忆功能。
二、血管性痴呆大鼠认知障碍的NMDAR机制研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、血管性痴呆大鼠认知障碍的NMDAR机制研究（论文提纲范文）
（1）参麻益智方通过调节血管性痴呆大鼠脑微血管内皮改善突触可塑性的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 从“血脉和利,精神乃居”探讨血管性痴呆的病因病机 |
| 综述二 脑微血管内皮细胞损伤及其对突触可塑性的影响参与了血管性痴呆的进展 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 参麻益智方对血管性痴呆大鼠认知功能和神经元的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物与药物 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 实验试剂及耗材 |
| 2 方法 |
| 2.1 建立VaD动物模型 |
| 2.2 实验分组与给药 |
| 2.3 行为学实验 |
| 2.4 取材 |
| 2.5 样本石蜡包埋及切片制备 |
| 2.6 HE染色 |
| 2.7 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 SYF对VaD大鼠学习记忆能力的影响 |
| 3.2 SYF对VaD大鼠海马CA1区病理形态的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 行为学实验改变的意义 |
| 4.2 海马CA1区病理形态改变的意义 |
| 5 小结 |
| 实验二 参麻益智方对血管性痴呆大鼠微血管内皮和突触可塑性的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 2.1 样本石蜡包埋及切片制备 |
| 2.2 免疫组织化学染色法 |
| 2.3 MVD计数 |
| 2.4 Western Blot |
| 2.5 实时荧光定量PCR |
| 2.6 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 SYF对BMEC的影响 |
| 3.2 SYF对突触可塑性的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 实验三 参麻益智方治疗血管性痴呆大鼠的机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 2.1 Western Blot |
| 2.2 实时荧光定量PCR |
| 2.3 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 SYF对VEGF蛋白及mRNA的影响 |
| 3.2 SYF对FLK-1蛋白及mRNA的影响 |
| 3.3 SYF对p38 MAPK蛋白及mRNA的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 参考文献 |
（2）电针调控miR-219a促进血管性认知障碍大鼠内嗅-海马CA1神经环路突触可塑性的机制（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 电针可有效改善血管性认知障碍,但其机制尚未完全阐明 |
| 2 内嗅皮层-海马CA1区神经环路突触可塑性介导空间记忆编码 |
| 3 miR-219a在NMDAR介导的突触可塑性中发挥了重要调控作用 |
| 4 电针可调节内嗅皮层-海马突触可塑性改善VCI空间记忆障碍 |
| 5 研究假说 |
| 实验材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验设备耗材及试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组及VCI模型建立 |
| 2.2 过表达miR-219a腺相关病毒注射 |
| 2.3 干预措施 |
| 2.4 小动物磁共振3D-TOF检测 |
| 2.5 干预前后空间学习记忆能力测试 |
| 2.6 高尔基染色检测 |
| 2.7 小动物核磁波谱检测神经物质代谢含量 |
| 2.8 RT-qPCR检测miR-219a表达水平 |
| 2.9 电生理膜片钳检测 |
| 2.10 激光共聚焦观察内嗅皮层-海马CA1区miR-219a定位情况 |
| 3 统计方法 |
| 4 技术路线图 |
| 实验结果 |
| 1 VCI大鼠模型检验 |
| 2 电针调控miR-219a对VCI模型大鼠空间学习记忆功能的影响 |
| 3 电针调控miR-219a对VCI模型大鼠内嗅皮层、海马CA1区神经物质代谢的影响 |
| 4 电针调控miR-219a改善VCI模型大鼠内嗅皮层和海马CA1区突触形态 |
| 5 电针调控miR-219a改善VCI模型大鼠内嗅皮层-海马CA1神经环路场电位 |
| 6 电针调控miR-219a影响VCI模型大鼠内嗅皮层、海马CA1区锥体神经元放电模式 |
| 7 电针介导miR-219a调控VCI模型大鼠空间记忆相关NMDAR离子通道电流强度 |
| 8 电针对内嗅皮层、海马CA1区miR-219a表达影响 |
| 9 内嗅皮层-海马CA1神经环路投射情况 |
| 讨论 |
| 1 空间记忆障碍是血管性认知障碍主要症状之一 |
| 2 电针可改善VCI大鼠空间学习记忆 |
| 3 电针可改善VCI大鼠内嗅皮层、海马CA1区兴奋/抑制平衡 |
| 4 电针调控miR-219a改善血管性认知障碍模型大鼠内嗅皮层-海马神经环路突触可塑性 |
| 5 电针调控miR-219a影响VCI模型大鼠内嗅皮层-海马CA1区突触可塑性的电生理机制 |
| 结论 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述 电针改善血管性认知障碍的电生理机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（3）解毒益智方对阿尔茨海默病双转基因小鼠行为学及大脑皮层内β-淀粉样蛋白沉积及BACE1表达影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 综述一 AD的病因病机及治疗进展 |
| 1 中医学对痴呆的系统认识及研究进展 |
| 1.1 中医学对痴呆病名由来及发展的认识 |
| 1.2 中医学对痴呆病因病机的古代认识 |
| 1.3 中医学对痴呆辨证论治及相关研究的认识 |
| 1.4 中医学对痴呆治疗的古今认识 |
| 综述二 西医学对AD的发病机制及治疗进展研究 |
| 1 现代医学对AD的认识及研究进展 |
| 1.1 AD的概述及流行病学 |
| 1.2 现代医学对AD发病因素的认识及研究 |
| 1.3 现代医学对AD发病相关机制的认识 |
| 2 现代医学对AD治疗的认识 |
| 2.1 乙酰胆碱酯酶抑制剂(AchEIs) |
| 2.2 兴奋性氨基酸受体拮抗剂 |
| 2.3 甘露特纳胶囊 |
| 2.4 其他非药物治疗 |
| 3 问题与展望 |
| 综述三 Aβ在脑内异常沉积的机制 |
| 1.Aβ的产生、分布与清除、传递与运输的研究进展 |
| 1.1 Aβ的产生 |
| 2 Aβ的清除 |
| 2.1 细胞的清除作用 |
| 2.2 Aβ被降解酶的清除作用 |
| 2.3 中枢Aβ的清除途径 |
| 2.4 血液成分介导的Aβ清除 |
| 综述四 解毒益智方在阿尔茨海默病中的应用 |
| 1 解毒益智方的创立 |
| 1.1 脑髓理论 |
| 1.2 髓虚毒损 |
| 1.3 补肾益髓,活血化痰解毒法 |
| 2 解毒益智方通过调节SIRT1/AMPK通路抑制BACE1表达改善Aβ的沉积 |
| 3 解毒益智方对阿尔茨海默病的临床应用 |
| 实验研究 |
| 第一章 CCP对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤保护性的研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 JDYZF对APP/PS1双转基因小鼠行为学的研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 JDYZF对APP/PS1双转基因小鼠脑内Aβ水平变化的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四章 JDYZF对APP/PS1双转基因小鼠脑内BACE1表达的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 附录1 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（4）NMDAR在血管性痴呆中的研究进展（论文提纲范文）
| 1 NMDA受体的分子生物学特性 |
| 2 NMDA受体介导的血管性痴呆的机制 |
| 2.1 谷氨酸神经毒性 |
| 2.1.1 钙超载 |
| 2.1.2 Na+、Cl-、水的内流 |
| 2.1.3 氧化应激反应 |
| 2.2 白细胞介素-1β（IL-1β） |
| 2.3 载脂蛋白E4(ApoE4) |
| 2.4 硫化氢（H2S) |
| 2.5 NMDAR抗体 |
| 3 总结 |
（5）通络化痰胶囊治疗中风恢复期的临床疗效及对VD大鼠Clathrin介导的NMDAR胞吞动态变化研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 文献综述 |
| 综述一 中风病恢复期中医治疗进展研究 |
| 1 中药治疗 |
| 2 针灸治疗 |
| 3 推拿按摩治疗 |
| 4 运动疗法 |
| 综述二 血管性痴呆中西医发病机制研究进展 |
| 1 血管性痴呆西医发病机制 |
| 2 中医对血管性痴呆病因病机的认识 |
| 参考文献 |
| 第二章 临床研究通络化痰胶囊治疗中风恢复期的临床疗效及对VD大鼠Clathrin介导的NMDAR胞吞动态变化研究 |
| 第一节 资料与方法 |
| 1 病例来源 |
| 2 诊断标准 |
| 3 纳入标准 |
| 4 排除标准 |
| 5 研究设计 |
| 6 治疗方案 |
| 7 观察指标及方法 |
| 8 疗效评价标准 |
| 9 统计学方法 |
| 第二节 研究结果 |
| 1 观察对象入选及完成情况 |
| 2 受试者基本信息 |
| 3 受试者基线生命体征及一般情况 |
| 4 受试者基线合并疾病情况 |
| 5 药品使用情况 |
| 6 基线体格检查情况 |
| 7 基线辅助检查 |
| 8 疗效评价 |
| 9 安全性评价 |
| 第三节 讨论 |
| 1 临床研究完成情况 |
| 2 临床研究治疗方案的设计及实施情况 |
| 3 临床结果讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 实验研究通络化痰胶囊对VD大鼠clathrin介导的NMDA受体作用机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 第二节 结果 |
| 1 行为学实验结果 |
| 2 通络化痰胶囊对VD大鼠海马组织形态学的影响 |
| 3 造模后不同时间点各组大鼠海马组织clathrin、NMDAR1及Rab5b mRNA RT-PCR结果 |
| 4 造模后不同时间点海马组织clathrin、膜蛋白NMDAR1 Western Blot结果 |
| 第三节 讨论 |
| 1 血管性痴呆大鼠行为学特点 |
| 2 组织形态学特点 |
| 3 通络化痰胶囊对脑缺血再灌注早期海马神经元clathrin介导的NMDA受体胞吞过程不同时点的动态变化研究 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 1 创新与优势 |
| 2 不足与展望 |
| 附录 |
| 1. 通络化痰胶囊治疗中风病中经络(脑梗塞)恢复期(痰瘀阻络证)临床研究CRF表 |
| 2. 各组大鼠海马CA1区组织形态观察 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（6）基于Neurogranin调控海马突触可塑性探讨游泳运动改善慢性低灌注脑缺血致空间记忆障碍的机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 实验材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验设备 |
| 1.3 主要实验试剂及耗材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 基因敲除小鼠PCR鉴定 |
| 2.2 实验动物分组 |
| 2.3 慢性低灌注脑缺血模型制备 |
| 2.4 激光散斑检测脑血流灌注 |
| 2.5 干预方法 |
| 2.6 T迷宫实验 |
| 2.7 Morris水迷宫实验 |
| 2.8 蛋白表达检测 |
| 2.9 电生理检测 |
| 3 统计分析 |
| 4 技术路线图 |
| 实验结果 |
| 1 Ng敲除小鼠基因和蛋白表达的鉴定 |
| 1.1 PCR鉴定Ng敲除小鼠基因表达情况 |
| 1.2 Western blot检测Ng敲除小鼠海马组织Ng蛋白水平 |
| 2 慢性低灌注脑缺血模型检验 |
| 2.1 脑血流检测 |
| 2.2 空间记忆行为学检测 |
| 3 游泳运动对慢性低灌注脑缺血模型小鼠空间记忆功能的影响 |
| 3.1 游泳运动对慢性低灌注脑缺血模型小鼠空间工作记忆的影响 |
| 3.2 游泳运动对慢性低灌注脑缺血模型小鼠空间学习记忆能力的影响 |
| 4 游泳运动对慢性低灌注脑缺血模型小鼠海马突触可塑性活动的影响 |
| 5 游泳运动对慢性低灌注脑缺血模型小鼠突触相关蛋白表达的影响 |
| 讨论 |
| 1 慢性低灌注脑缺血导致认知障碍及其动物模型的选择 |
| 2 游泳运动可以改善慢性低灌注脑缺血模型小鼠空间记忆功能 |
| 3 游泳运动增强慢性低灌注脑缺血模型小鼠海马CA3-CA1 突触活动 |
| 4 游泳运动增加慢性低灌注脑缺血模型小鼠海马突触相关蛋白的表达 |
| 5 总结 |
| 结论 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（7）基于炎症反应、氧化应激、miRNA-124/BACE1/Aβ通路探讨涤痰汤治疗血管性痴呆模型大鼠的作用机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词汇表 |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1.古代中医对血管性痴呆的认识 |
| 1.1.秦汉时期 |
| 1.2.晋—宋时期 |
| 1.3.明清时期 |
| 2.现代中医对血管性痴呆的认识 |
| 2.1.从虚论治 |
| 2.2.从实论治 |
| 2.3.虚实夹杂 |
| 3.涤痰汤治疗血管性痴呆的理论依据 |
| 3.1.痰浊阻窍是血管性痴呆认知障碍的病机中心环节 |
| 3.2.涤痰汤的组方分析及药味的现代药理研究 |
| 4.参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1.实验一涤痰汤对血管性痴呆模型大鼠行为及海马组织病理的影响 |
| 1.1.实验材料 |
| 1.2.实验方法 |
| 1.3.统计学处理 |
| 1.4.结果 |
| 1.5.讨论 |
| 1.6.参考文献 |
| 2.实验二涤痰汤对血管性痴呆模型大鼠氧化应激反应的影响 |
| 2.1.实验材料 |
| 2.2.实验方法 |
| 2.3.统计学处理 |
| 2.4.结果 |
| 2.5.讨论 |
| 2.6.参考文献 |
| 3.实验三涤痰汤对血管性痴呆模型大鼠炎症反应的影响 |
| 3.1.实验材料 |
| 3.2.实验方法 |
| 3.3.统计学处理 |
| 3.4.结果 |
| 3.5.讨论 |
| 3.6.参考文献 |
| 4.实验四基于mi RNA-124/BACE1/Aβ信号通路探讨涤痰汤对VD模型大鼠的治疗机制 |
| 4.1.实验材料 |
| 4.2.实验方法 |
| 4.3.统计学处理 |
| 4.4.结果 |
| 4.5.讨论 |
| 4.6.参考文献 |
| 结语 |
| 1.结论 |
| 2.创新 |
| 3.不足 |
| 附录 |
| 附录一 综述 |
| 参考文献 |
| 附录二 在校期间发表论文 |
| 致谢 |
（8）参知健脑方对拟血管性痴呆细胞模型的神经保护作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 参知健脑方各组分药物改善认知机制研究 |
| 1 人参 |
| 1.1 中医认识 |
| 1.2 化学成分 |
| 1.3 改善认知机制 |
| 2 知母 |
| 2.1 中医认识 |
| 2.2 化学成分 |
| 2.3 改善认知机制 |
| 3 赤芍 |
| 3.1 中医认识 |
| 3.2 化学成分 |
| 3.3 改善认知机制 |
| 参考文献 |
| 综述二 神经元突触囊泡内吞途径对神经系统疾病的影响 |
| 1 网格蛋白介导的内吞作用(CME)与神经系统疾病 |
| 1.1 网格蛋白包被组装 |
| 1.2 质膜内陷和凹窝形成 |
| 1.3 凹陷收缩和剪切 |
| 1.4 囊泡去包被 |
| 2 Kiss and run途径 |
| 3 不依赖网格蛋白的大量内吞作用(clathrin-independent bulk endocytosis,CIE) |
| 4 超速内吞作用 |
| 5 讨论与展望 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一部分 基于网络药理学的参知健脑方治疗血管性痴呆机制研究 |
| 1 研究材料 |
| 1.1 数据库 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 参知健脑方入血活性化学成分的检索与筛选 |
| 2.2 参知健脑方药物成分-靶点、VD疾病-靶点及参知健脑方治病靶点的预测 |
| 2.3 参知健脑方活性成分-VD-靶点的网络构建 |
| 2.4 基因本体论(GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 参知健脑方潜在入血活性化学成分的筛选结果 |
| 3.2 参知健脑方药物成分-靶点、VD疾病-靶点及参知健脑方治病靶点预测结果 |
| 3.3 参知健脑方-活性成分-VD靶点的网络构建 |
| 3.4 GO功能及KEGG通路富集分析结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 中医药研究与网络药理学 |
| 4.2 参知健脑方的理法方药分析 |
| 4.3 参知健脑方的网络药理学分析 |
| 5 小结 |
| 第二部分 参知健脑方和谷氨酸干预浓度筛选及其对拟VD细胞模型增殖及毒性的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 主要实验药品及试剂 |
| 1.3 主要仪器设备及耗材 |
| 1.4 主要试剂的配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 PC12细胞培养 |
| 2.2 谷氨酸诱导PC12细胞损伤的最适宜造模浓度筛选及参知健脑方低、中、高剂量适宜浓度筛选(CCK-8法) |
| 2.3 谷氨酸造模适宜浓度及干预药物适宜浓度的筛选验证(IncuCyte长时间动态活细胞成像及功能分析系统) |
| 2.4 谷氨酸诱导损伤PC12细胞模型的建立及分组给药 |
| 2.5 CCK-8法检测各组细胞增殖及毒性 |
| 2.6 IncuCyte长时间动态活细胞成像及功能分析系统检测各组细胞增殖及毒性2.7 CFSE细胞增殖实验 |
| 2.7 CFSE细胞增殖实验 |
| 2.8 统计学分析 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 生理状态下PC12细胞的形态学特征 |
| 3.2 不同浓度谷氨酸和参知健脑方溶液对PC12细胞增殖及毒性的影响 |
| 3.3 参知健脑方对拟VD细胞模型的增殖及毒性影响 |
| 3.4 CFSE细胞增殖实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 “毒损脑络”与VD |
| 4.2 “毒损脑络”的现代生物学内涵 |
| 4.3 “解毒通络”是治疗VD的重要法则 |
| 4.4 谷氨酸诱导损伤PC12细胞模型的建立 |
| 4.5 参知健脑方对谷氨酸损伤PC12细胞的增殖及毒性作用 |
| 5 小结 |
| 第三部分 参知健脑方对拟VD细胞模型周期、凋亡、钙离子浓度及活性氧的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 主要实验药品及试剂 |
| 1.3 主要仪器设备及耗材 |
| 1.4 主要试剂的配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 PC12细胞培养 |
| 2.2 谷氨酸损伤的PC12细胞模型的建立及各组给药 |
| 2.3 流式细胞术检测PC12细胞周期 |
| 2.4 流式细胞术检测PC12细胞凋亡 |
| 2.5 高内涵细胞成像分析系统检测PC12细胞内游离钙离子浓度、活性氧及超氧化物的水平 |
| 2.6 qRT-PCR技术检测PC12细胞caspase-3 mRNA的相对表达水平 |
| 2.7 统计学分析 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 PC12细胞周期检测结果 |
| 3.2 PC12细胞凋亡检测结果 |
| 3.3 PC12细胞内游离钙离子浓度、活性氧及超氧化物的水平检测结果 |
| 3.4 参知健脑方对谷氨酸损伤PC12细胞caspase-3 mRNA表达水平的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 参知健脑方与谷氨酸损伤的PC12细胞周期阻滞 |
| 4.2 参知健脑方与谷氨酸损伤的PC12细胞凋亡 |
| 4.3 参知健脑方与谷氨酸诱导的PC12细胞内钙超载及氧化应激损伤 |
| 4.4 “解毒通络”法则的部分生物学内涵 |
| 5 小结 |
| 第四部分 参知健脑方对拟VD细胞模型clathrin介导的NMDA受体胞吞过程的作用机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 主要实验药品及试剂 |
| 1.3 主要仪器设备及耗材 |
| 1.4 主要试剂的配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 细胞免疫荧光技术检测PC12细胞clathrin、RAB5B和NMDAR1的分布和表达水平 |
| 2.2 qRT-PCR检测PC12细胞clathrin mRNA和NMDAR1 mRNA的表达水平 |
| 2.3 Western Blot检测PC12细胞clathrin、RAB5B及NMDAR1的表达水平 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 PC12细胞的细胞免疫荧光检测结果 |
| 3.2 PC12细胞的qRT-PCR检测结果 |
| 3.3 PC12细胞的Western Blot检测结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 参知健脑方与clathrin介导的细胞内吞作用 |
| 4.2 参知健脑方与NMDA受体的内吞过程 |
| 4.3 “解毒通络”法则的部分生物学内涵 |
| 5 小结 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（9）基于海马突触传递效能和可塑性探讨电针改善血管性痴呆学习记忆功能的作用机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 1 血管性痴呆的中医认识 |
| 2 电针对血管性痴呆学习记忆障碍的改善作用 |
| 3 电针改善VD大鼠学习记忆功能的可能机制 |
| 4 海马调控学习记忆的突触可塑性机制 |
| 5 电针对海马突触可塑性和相关蛋白表达的影响 |
| 6 研究假说 |
| 实验材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验设备耗材及试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组及VD模型建立 |
| 2.2 电针“百会”、“神庭”干预方法 |
| 2.3 小动物磁共振3D-TOF扫描 |
| 2.4 学习记忆能力测试 |
| 2.5 膜片钳电生理记录技术检测大鼠海马CA3-CA1 区场电位 |
| 2.6 突触可塑性相关调节蛋白定量检测 |
| 3 统计方法 |
| 3.1 行为学数据分析 |
| 3.2 大鼠海马CA3-CA1 区场电位数据分析 |
| 3.3 突触可塑性相关调节蛋白表达定量分析 |
| 4 技术路线图 |
| 实验结果 |
| 1 VD大鼠模型检验结果 |
| 1.1 小动物磁共振3D-TOF血管成像检测结果 |
| 1.2 新物体识别行为学实验检测结果 |
| 2 电针“百会”、“神庭”对VD模型大鼠学习记忆功能的影响 |
| 3 电针“百会”、“神庭”对VD模型大鼠海马CA3-CA1区I/O曲线和PPR的影响 |
| 4 电针“百会”、“神庭”对VD模型大鼠海马CA3-CA1区LTP的检测结果 |
| 5 电针“百会”、“神庭”对VD模型大鼠海马Nr2B、GluR1和CaMKⅡ蛋白表达及其磷酸化水平的影响 |
| 讨论 |
| 1 VD模型大鼠学习记忆功能障碍 |
| 2 电针对 VD 学习记忆功能的影响 |
| 3 电针对VD大鼠海马突触传递效能的影响 |
| 4 电针对 VD 大鼠海马突触可塑性的影响 |
| 5 电针对血管性痴呆大鼠突触可塑性相关蛋白影响 |
| 结论 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（10）培补二天膏对老年原发性高血压大鼠学习记忆功能的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstracts |
| 前言 |
| 实验材料和研究方法 |
| 一、实验材料 |
| (一) 实验动物 |
| (二) 实验药物 |
| (三) 主要仪器 |
| (四) 主要试剂 |
| 二、研究方法 |
| (一) 实验设计与动物分组 |
| (二) 大鼠行为学检测 |
| (三) 脑组织样本的制备 |
| (四) Western blot |
| (五) 统计分析 |
| 实验结果 |
| 一、老年SHR行为学表现出学习记忆功能障碍 |
| 二、老年SHR与青年SHR海马体神经元数量差异 |
| 三、老年SHR海马体学习记忆功能相关蛋白表达降低 |
| 四、膏制药给药后老年SHR行为学表现有所改善 |
| 五、膏制药给药后老年SHR海马体神经元数量变化 |
| 六、膏制药给药后老年SHR海马体学习记忆功能相关蛋白表达变化 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 突触可塑性在阿尔兹海默症中的研究现状 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 攻读学位期间公开发表的论文 |
| 致谢 |
四、血管性痴呆大鼠认知障碍的NMDAR机制研究（论文参考文献）
- [1]参麻益智方通过调节血管性痴呆大鼠脑微血管内皮改善突触可塑性的机制研究[D]. 张震. 中国中医科学院, 2021
- [2]电针调控miR-219a促进血管性认知障碍大鼠内嗅-海马CA1神经环路突触可塑性的机制[D]. 戴雅玲. 福建中医药大学, 2021(01)
- [3]解毒益智方对阿尔茨海默病双转基因小鼠行为学及大脑皮层内β-淀粉样蛋白沉积及BACE1表达影响的研究[D]. 朱晓婷. 长春中医药大学, 2021(01)
- [4]NMDAR在血管性痴呆中的研究进展[J]. 李海琦,刘海贝,周海燕,何金婷. 中国实验诊断学, 2020(09)
- [5]通络化痰胶囊治疗中风恢复期的临床疗效及对VD大鼠Clathrin介导的NMDAR胞吞动态变化研究[D]. 张丹丹. 北京中医药大学, 2020(04)
- [6]基于Neurogranin调控海马突触可塑性探讨游泳运动改善慢性低灌注脑缺血致空间记忆障碍的机制[D]. 张嘉泳. 福建中医药大学, 2020(08)
- [7]基于炎症反应、氧化应激、miRNA-124/BACE1/Aβ通路探讨涤痰汤治疗血管性痴呆模型大鼠的作用机制[D]. 杨超. 湖北中医药大学, 2020(08)
- [8]参知健脑方对拟血管性痴呆细胞模型的神经保护作用及机制研究[D]. 田丹枫. 北京中医药大学, 2020(04)
- [9]基于海马突触传递效能和可塑性探讨电针改善血管性痴呆学习记忆功能的作用机制[D]. 张宇豪. 福建中医药大学, 2020(08)
- [10]培补二天膏对老年原发性高血压大鼠学习记忆功能的影响[D]. 韩孟晓. 苏州大学, 2020(02)