纳米氧化锌对美国红鱼单核巨噬细胞的毒性效应

纳米氧化锌对美国红鱼单核巨噬细胞的毒性效应

论文摘要

纳米氧化锌(zinc oxide nanoparticles, Zn O NPs)的广泛应用使生物更容易接触到纳米氧化锌及其不良影响。为探讨纳米氧化锌对美国红鱼(Sciaenops ocellatus)单核巨噬细胞(monocytes/macrophages,MO/MΦ)的毒性效应,使用不同浓度ZnO NPs(0, 12.5, 25, 50μg/mL)对美国红鱼MO/MΦ进行不同时间(6, 12, 24 h)处理,用四唑盐(3-(4, 5-dimethyl thiazol-2-yl)-2, 5-diphenyl tetrazolium bromide, MTT)比色法、中性红(neutral red uptake, NRU)法和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)释放法测定细胞活性。在处理6 h后,用流式细胞仪检测细胞对ZnO NPs的摄取、细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平及细胞凋亡率;用qRT-PCR测定了Caspase 9 mRNA表达水平的变化。结果显示,与对照组相比,实验组表现为:1) MTT法检测的细胞活性和细胞对于中性红的摄入能力均随ZnO NPs浓度的增高和暴露时间的延长而降低;2) LDH的释放量会随着ZnO NPs暴露时间的延长和ZnO NPs浓度的增加而增多。3)细胞对ZnO NPs的摄取量随浓度增加而增加;4)细胞内ROS水平升高;5)细胞凋亡率呈现增长的趋势;6)Caspase 9表达量均显著增高。上述研究结果表明,Zn O NPs与美国红鱼MO/MΦ活性存在浓度和时间-毒性依赖关系,ZnO NPs进入细胞后,细胞内活性氧水平升高,从而引起细胞凋亡,氧化应激可能是诱发ZnO NPs细胞毒性的主要途径。本研究为深入探讨Zn O NPs对水生生物的毒性效应提供了基础资料。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 实验材料与试剂
  •   1.2 ZnO NPs悬液制备
  •   1.3 美国红鱼原代头肾MO/MΦ的分离与培养
  •   1.4 MTT法检测细胞活性
  •   1.5 中性红实验
  •   1.6 乳酸脱氢酶的释放
  •   1.7 细胞对ZnO NPs的摄取
  •   1.8 细胞内活性氧 (reactive oxygen species, ROS) 含量检测
  •   1.9 细胞凋亡检测
  •     1.9.1 Annexin V-FITC细胞凋亡检测
  •     1.9.2 细胞凋亡-Hoechst 33342染色
  •   1.1 0 qRT-PCR检测美国红鱼MO/MΦ中Cas-pase 9的表达
  •   1.1 1 统计分析
  • 2 结果与分析
  •   2.1 美国红鱼头肾MO/MΦ形态学观察
  •   2.2 ZnO NPs对美国红鱼MO/MΦ活性的影响
  •   2.3 美国红鱼MO/MΦ对不同浓度ZnO NPs的摄取
  •   2.4 ZnO NPs对美国红鱼MO/MΦ内ROS产生的影响
  •   2.5 ZnO NPs对美国红鱼单核巨噬细胞Caspase 9基因的影响
  •   2.6 ZnO NPs对美国红鱼MO/MΦ凋亡的影响
  • 3 讨论
  • 4 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 张剑,朱跃骅,周妮妮,费岳军,刘莲,钱云霞

    关键词: 纳米氧化锌,美国红鱼,单核巨噬细胞,毒性效应,氧化应激,细胞凋亡

    来源: 农业生物技术学报 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学,工程科技Ⅰ辑

    专业: 生物学,环境科学与资源利用

    单位: 宁波大学海洋学院,国家海洋局宁波海洋环境监测中心站

    基金: 国家重点研发计划重点专项(No.2016YFC1402405)

    分类号: X171.5

    页码: 1081-1089

    总页数: 9

    文件大小: 1247K

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