一种提高质粒转染效率的质粒提取方法的优化

论文摘要

目的优化和改进质粒提取方法,以提高质粒的提取效率,增加其在哺乳动物细胞中的表达效率。方法分别在室温条件和4℃条件提取质粒,并将细菌裂解、过柱和洗脱3个过程分解在两种温度下提取质粒;使用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳分别检测质粒浓度和超螺旋形式;将质粒转染哺乳动物细胞,使用荧光显微镜和Western blot检测荧光蛋白的表达水平。结果低温进行质粒提取能够显著提高质粒提取效率(P<0.05),并显著提高其在哺乳动物细胞中的表达效率(P<0.01)。质粒提取的3个步骤:细菌裂解、过柱和洗脱均对温度敏感,从而影响质粒的得率和在哺乳动物细胞中的表达效率。结论成功获得一种简单易行的提高质粒得率和在哺乳动物细胞中表达效率的质粒提取方法。

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1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 载体和细胞系:

1.1.2 试剂:

1.2 方法

1.2.1 摇菌:

1.2.2 质粒提取优化:

1.2.3 提取效率计算:

1.2.4 琼脂糖凝胶电泳:

1.2.5 RNA消化:

1.2.6 细胞转染:

1.2.7 荧光显微镜检测质粒转染效率:

1.2.8 Western blot 检测蛋白表达:

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 4 ℃质粒提取显著提升质粒产量

2.2 质粒产量的上升并无RNA污染

2.3 4 ℃提取显著提升质粒转染效率

2.4 4 ℃下裂解、过柱、洗脱均提高质粒的得率

2.5 4 ℃裂解、过柱、洗脱均提升转染效率

3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 胡小青,肖广原,张鹏,陈厚早,刘德培

关键词: 质粒提取,质粒构型,低温,转染效率

来源: 基础医学与临床 2019年05期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

基金: 中国医学科学院医学表观遗传中心基金(2017PT31035,2018PT31015)

分类号: Q78

DOI: 10.16352/j.issn.1001-6325.2019.05.026

页码: 738-744

总页数: 7

文件大小: 3202K

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