导读:本文包含了环己酮单加氧酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:环己酮单加氧酶,定向进化,立体选择性,手性硼酸酯
环己酮单加氧酶论文文献综述
王婕[1]（2019）在《环己酮单加氧酶定向进化及其酶促串联反应研究》一文中研究指出定向进化改造酶的结构,是提高酶催化活性和改变选择性(化学选择性、区域选择性和立体选择性)的重要手段,近年来受到广泛关注。来源于不动杆菌NCIMB 9871的环己酮单加氧酶(AcCHMO)是Baeyer-Villiger单加氧酶中研究最为广泛的一种,对于其天然反应具有较高的反应活性和立体选择性。随着研究的深入,AcCHMO被应用于更多底物的氧化反应,甚至能够催化杂原子化合物氧化。手性有机硼酸酯是一个重要的有机反应中间体,可以作为构建手性碳-碳键的前体。本论文通过定向进化手段,对AcCHMO氧化拆分消旋硼酸酯反应的立体选择性进行调控,并将该反应同化学偶联反应进行串联,获得手性产物1-苯乙基取代的苯衍生物。同时调控AcCHMO对不同环大小和取代环酮的活性及立体选择性。主要研究成果总结如下:本论文首先选择AcCHMO底物结合口袋周围的L143、F246、F432、L435等位点,以丙氨酸A、苯丙氨酸F、亮氨酸L叁种侧链大小不同的氨基酸作为代表氨基酸进行定点突变构建高度聚焦的小型突变库,以α-苯乙基硼酸频哪醇酯作为底物,筛选出具有高立体选择性的突变株。分析了重要突变株中氨基酸残基对氧化α-苯乙基硼酸频哪醇酯反应的立体选择性的影响,在最优单位点突变的基础上进行迭代,最终获得了两个具有立体选择性互补的AcCHMO突变株,L143F/F432I/L435A和F246A/L435F/L507A。两个突变株催化氧化拆分反应可以分别得到ee值在75%以上的(R)-和(S)-α-苯乙基硼酸频哪醇酯,以及相反构型的(S)和(R)-α-苯乙醇产物(ee值分别为58%和68%)。论文在得到手性α-苯乙基硼酸频哪醇酯的基础上,将其与取代的碘苯亲电试剂偶联,成功构建了一个酶促化学串联一锅体系,得到手性的1-苯乙基取代的苯衍生物。在分别对Suzuki偶联反应和AcCHMO全细胞体系催化的串联反应进行条件优化后,最终可以以40%的产率和75%的ee值得到手性产物1-苯乙基取代的苯衍生物。此外,论文扩展了工程化AcCHMO催化环酮的底物谱,探讨了从环丁酮到环辛酮等一系列底物的反应结果,对比分析了底物环大小与酶空腔空间结构的关系,筛选出了分别能够提高各环酮底物催化活性的突变株。另外,还在环酮上增加了苯基取代基,对比3-苯基环丁酮、3-苯基环戊酮和4-苯基环己酮的反应结果,发现432位点和435位点对含苯环取代基的环酮底物有明显的立体选择性调控作用。F432L突变株能够分别催化3-苯基环丁酮与4-苯基环己酮氧化得到与WT构型相反的对映异构体,经过进一步突变优化两种底物都实现了大于99%ee值的选择性。对于3-苯基环戊酮,同样以F432L和L435G为调控突变株,实现更加复杂的区域选择性与立体选择性同时调控,得到与WT完全不同的结果。(本文来源于《浙江大学》期刊2019-04-01）
翟晓红,陈振明[2]（2012）在《环己酮单加氧酶的克隆表达及酶学性质分析》一文中研究指出为研究鞘氨醇杆菌中环己酮单加氧酶的催化特性,从N.aromaticivorans DSM 12444基因组DNA克隆表达了一个编码环己酮单加氧酶的基因chmo,并分析了该基因产物的酶学性质.该基因全长1650bp,编码550个氨基酸,理论分子量为61.6kDa.将携带此基因的重组质粒pET28a-chmo转入E.coli BL21(DE3)后,获得了62kDa左右的表达产物.重组环己酮单加氧酶(CHMO)能氧化芳香族硫醚及其衍生物、链式硫醚、其他硫醚和酮类等底物,以2-氯乙基苯基硫醚为底物时活力最高(25.65U/mg).CHMO最适反应温度和pH分别为55℃和8.87,倾向于利用NADPH作辅酶.上述结果表明,重组CHMO是一个新型的环己酮单加氧酶,推测其与硫醚及酮类物质的氧化降解有关.(本文来源于《杭州师范大学学报(自然科学版)》期刊2012年05期）
彭哲慧,龚凤娟,刘丹丹,吾鲁木汗·那孜尔别克[3]（2011）在《赤红球菌JDM312环己酮单加氧酶的原核表达及检测》一文中研究指出通过酶切法从重组质粒pUC18-chnB中得到编码环己酮单加氧酶的chnB基因序列,将其定向插入原核表达载体pQE30中,构建重组质粒pQE30-chnB,转化到大肠杆菌BL21中并诱导表达目的蛋白,用SDS-PAGE电泳检测表达产物.测序结果表明chnB基因大小为1 623bp,编码由540个氨基酸残基构成的多肽.SDS-PAGE结果显示,表达分子量约为60kDa的带有6×His标签的环己酮单加氧酶,与预期分子量相符,表明成功构建出原核表达质粒并实现了目的蛋白表达,为进一步开展环己酮单加氧酶活性研究奠定了基础.(本文来源于《吉首大学学报(自然科学版)》期刊2011年04期）
彭哲慧,许大奎,王静芳,吾鲁木汗·那孜尔别克[4]（2011）在《赤红球菌JDM312株环己酮单加氧酶基因的克隆和序列分析》一文中研究指出应用PCR从赤红球菌JDM312株基因组DNA中扩增出chnB基因序列,构建pUC18-chnB重组质粒,转化大肠杆菌DH5α,并对插入片段进行测序,用Clustal X和Mega 3.1软件对测定DNA序列进行相似性和系统发育分析.结果显示:扩增得到的chnB基因大小为1 623 bp,编码由542个氨基酸残基构成的多肽,与已报道不同细菌属菌种chnB基因核苷酸序列的相似性为85%～98%,其中与红球菌Phi2株的亲缘关系最近.(本文来源于《吉首大学学报(自然科学版)》期刊2011年03期）
环己酮单加氧酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为研究鞘氨醇杆菌中环己酮单加氧酶的催化特性,从N.aromaticivorans DSM 12444基因组DNA克隆表达了一个编码环己酮单加氧酶的基因chmo,并分析了该基因产物的酶学性质.该基因全长1650bp,编码550个氨基酸,理论分子量为61.6kDa.将携带此基因的重组质粒pET28a-chmo转入E.coli BL21(DE3)后,获得了62kDa左右的表达产物.重组环己酮单加氧酶(CHMO)能氧化芳香族硫醚及其衍生物、链式硫醚、其他硫醚和酮类等底物,以2-氯乙基苯基硫醚为底物时活力最高(25.65U/mg).CHMO最适反应温度和pH分别为55℃和8.87,倾向于利用NADPH作辅酶.上述结果表明,重组CHMO是一个新型的环己酮单加氧酶,推测其与硫醚及酮类物质的氧化降解有关.
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
环己酮单加氧酶论文参考文献
[1].王婕.环己酮单加氧酶定向进化及其酶促串联反应研究[D].浙江大学.2019
[2].翟晓红,陈振明.环己酮单加氧酶的克隆表达及酶学性质分析[J].杭州师范大学学报(自然科学版).2012
[3].彭哲慧,龚凤娟,刘丹丹,吾鲁木汗·那孜尔别克.赤红球菌JDM312环己酮单加氧酶的原核表达及检测[J].吉首大学学报(自然科学版).2011
[4].彭哲慧,许大奎,王静芳,吾鲁木汗·那孜尔别克.赤红球菌JDM312株环己酮单加氧酶基因的克隆和序列分析[J].吉首大学学报(自然科学版).2011