鸡输卵管暂态表达论文-朱秋菊,孙怀昌,王劲松,高波,王志跃

鸡输卵管暂态表达论文-朱秋菊,孙怀昌,王劲松,高波,王志跃

导读:本文包含了鸡输卵管暂态表达论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献,主要关键词:鸡输卵管暂态生物反应器,重组人溶菌酶,表达,鉴定

鸡输卵管暂态表达论文文献综述

朱秋菊,孙怀昌,王劲松,高波,王志跃[1](2006)在《鸡输卵管暂态表达人溶菌酶的研究》一文中研究指出目的:建立暂态表达人溶菌酶(hLYZ)的鸡输卵管生物反应器,以寻求一种生产药用hLYZ的有效方法。方法:将hLYZcDNA克隆入鸡输卵管特异表达载体pOV1和pOV2,将获得的重组表达载体pOV1LYZ和pOV2LYZ与一定比例的聚乙烯亚胺混合,经翅静脉注射产蛋鸡,用微球菌平板溶菌试验检测蛋清中的溶菌酶活性。结果:2个重组载体注射鸡的蛋清中均有rhLYZ的表达,pOV2LYZ的表达水平及维持时间优于pOV1LYZ。设立4个试验组,分别以不同剂量或注射次数的pOV2LYZ注射产蛋鸡,蛋清中重组酶的定量测定结果表明,1mg/2次注射组的表达效果较好,最高表达量达750μg/mL蛋清,有效表达维持7d左右,载体注射对鸡的产蛋等生理指标无明显影响。当初次载体注射鸡蛋清中的rhLYZ含量下降到注射前水平时,用同样的方法和剂量进行再次注射。结论:蛋清中的rhLYZ表达水平较初次载体注射有所提高,表达维持时间有所延长。用hLYZ特异抗体进行的Western印迹结果显示,表达在蛋清中的rhLYZ相对分子质量与天然hLYZ相同。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2006年04期)

房浩霞[2](2006)在《暂态表达重组蛋白鸡输卵管生物反应器的优化》一文中研究指出随着重组DNA技术的飞速发展,已经出现了多种生产重组蛋白的表达系统,其中以转基因动物生物反应器,尤其是转基因哺乳动物的乳腺生物反应器和转基因家禽的输卵管生物反应器的优点最为突出,能在不损伤机体正常生理功能的条件下源源不断地获得表达产品。家禽具有繁殖周期短、生产性能高、研究成本较低等优点,其输卵管是生产蛋白质的天然“发酵罐”,更加适合作为生产重组蛋白的生物反应器。但由于家禽特殊的生殖生理特点,其转基因技术一直落后于其它动物。虽然近几年来相关技术有所突破,但家禽转基因研究仍有许多理论和技术难题有待突破,距离产业化开发仍有很远的路要走。为此,寻求禽类的转基因技术的突破和开辟新的研究方法已成为当前研究工作的重点。本课题组用自行克隆的鸡卵清蛋白(OV)基因表达调控序列构建成鸡输卵管定位表达载体,以人溶菌酶和组织激肽释放酶(hK1)基因为目的基因的鸡输卵管暂态表达试验结果表明,通过翅静脉注射一定剂量的重组载体后,能表达一定水平的重组酶并分泌到试验鸡的蛋清中,具有一定的开发利用价值。本研究在前期研究的基础上,以hK1基因为目的基因,通过对先前构建的鸡输卵管特异表达载体进行优化改造,旨在获得结构更为合理、表达水平更高、维持时间更长的表达载体。在先前构建的pOV3K载体的基础上,分别通过酶切消化或PCR扩增等方法,将其中3.0 kb的OV基因5′-调控序列的长度分步缩减,获得叁个新的重组载体分别命名为pOV4K、pOV5K和pOV6K。将此重组载体与25 kDa聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)混合,经翅静脉注射产蛋鸡,用标准方法检测蛋清中的重组酶活性,结果表明,含1.1 kb OV基因5′-调控序列的pOV6K表达水平和表达时间均不如含3.0 kb OV基因5′-调控序列的pOV3K,含2.1 kb OV基因5′-调控序列的pOV4K和含1.7 kb OV基因5′-调控序列的pOV5K与含3.0 kb OV基因5′-调控序列的pOV3K表达水平相当,说明1.7 kb OV基因5′-调控序列足以指导外源基因(本文来源于《扬州大学》期刊2006-05-01)

鸡输卵管暂态表达论文开题报告

(1)论文研究背景及目的

此处内容要求:

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例:

随着重组DNA技术的飞速发展,已经出现了多种生产重组蛋白的表达系统,其中以转基因动物生物反应器,尤其是转基因哺乳动物的乳腺生物反应器和转基因家禽的输卵管生物反应器的优点最为突出,能在不损伤机体正常生理功能的条件下源源不断地获得表达产品。家禽具有繁殖周期短、生产性能高、研究成本较低等优点,其输卵管是生产蛋白质的天然“发酵罐”,更加适合作为生产重组蛋白的生物反应器。但由于家禽特殊的生殖生理特点,其转基因技术一直落后于其它动物。虽然近几年来相关技术有所突破,但家禽转基因研究仍有许多理论和技术难题有待突破,距离产业化开发仍有很远的路要走。为此,寻求禽类的转基因技术的突破和开辟新的研究方法已成为当前研究工作的重点。本课题组用自行克隆的鸡卵清蛋白(OV)基因表达调控序列构建成鸡输卵管定位表达载体,以人溶菌酶和组织激肽释放酶(hK1)基因为目的基因的鸡输卵管暂态表达试验结果表明,通过翅静脉注射一定剂量的重组载体后,能表达一定水平的重组酶并分泌到试验鸡的蛋清中,具有一定的开发利用价值。本研究在前期研究的基础上,以hK1基因为目的基因,通过对先前构建的鸡输卵管特异表达载体进行优化改造,旨在获得结构更为合理、表达水平更高、维持时间更长的表达载体。在先前构建的pOV3K载体的基础上,分别通过酶切消化或PCR扩增等方法,将其中3.0 kb的OV基因5′-调控序列的长度分步缩减,获得叁个新的重组载体分别命名为pOV4K、pOV5K和pOV6K。将此重组载体与25 kDa聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)混合,经翅静脉注射产蛋鸡,用标准方法检测蛋清中的重组酶活性,结果表明,含1.1 kb OV基因5′-调控序列的pOV6K表达水平和表达时间均不如含3.0 kb OV基因5′-调控序列的pOV3K,含2.1 kb OV基因5′-调控序列的pOV4K和含1.7 kb OV基因5′-调控序列的pOV5K与含3.0 kb OV基因5′-调控序列的pOV3K表达水平相当,说明1.7 kb OV基因5′-调控序列足以指导外源基因

(2)本文研究方法

调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

鸡输卵管暂态表达论文参考文献

[1].朱秋菊,孙怀昌,王劲松,高波,王志跃.鸡输卵管暂态表达人溶菌酶的研究[J].生物技术通讯.2006

[2].房浩霞.暂态表达重组蛋白鸡输卵管生物反应器的优化[D].扬州大学.2006

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