导读:本文包含了共表达载体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基因,载体,顺反子,病毒,蛋白,杆菌,文昌鱼。
共表达载体论文文献综述
唐维,李强,张允刚,后猛,闫会[1]（2019）在《甘薯淀粉合成关键酶AGPase小亚基双顺反子共表达载体构建》一文中研究指出为了研究甘薯AGPase小亚基功能,创制高淀粉甘薯新材料,本研究构建了甘薯35S-IbAGPa1-NosT-35SIbAGPa2-NosT共表达载体.实验首先通过酶切连接的方法构建出中间载体pzp-35S-NosT,然后将分离得到的IbAGPa1和IbAGPa2 2个小亚基核苷酸片段分别与pzp-35S-NosT载体进行连接,从而得到35S-IbAGPa1-NosT和35S-IbAGPa2-NosT 2个表达框.随后,将扩增的目的基因35S-IbAGPa1-NosT的全长片段与已经构建好的pzp-35S-IbAGPa2-NosT载体通过In-fusion技术进行连接反应,最终获得双顺反子共表达载体.(本文来源于《江苏师范大学学报(自然科学版)》期刊2019年01期）
王成宇,姚心茹,刘晶,胡译文,赵维静[2]（2018）在《共表达基因Ⅱ型新城疫病毒F、HN蛋白mcDNA载体的构建》一文中研究指出为了构建共表达基因Ⅱ型新城疫病毒(NDV)F、HN蛋白的mcDNA载体,试验采用融合PCR技术将合成的Ⅱ型NDV的F基因片段与HN基因片段融合并携带Flag标签,构建pUC-F-HN-Flag基因片段,然后与mcDNA载体MN512A连接构建重组质粒MN512A-pUC-F-HN-opt-Flag,采用菌落PCR扩增与酶切方法对重组质粒进行鉴定;利用阿拉伯糖诱导剂诱导重组质粒产生mcDNA;将重组质粒转染至HEK-293T细胞中,收集细胞总蛋白并通过Western-blot与间接免疫荧光试验检测蛋白表达情况。结果表明:通过F、HN基因片段的扩增与融合成功构建pUC-F-HN-Flag基因片段,菌落PCR扩增与酶切结果证明重组质粒连接成功,经诱导剂诱导重组质粒成功产生mcDNA,Western-blot及间接免疫荧光试验均检测到目的蛋白。说明重组质粒MN512A-pUC-F-HN-opt-Flag构建成功。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2018年23期）
张甜丽[3]（2018）在《番茄碳同化相关基因共表达载体构建及遗传转化研究》一文中研究指出山西省是设施蔬菜生产大省,温室内CO_2亏缺是制约温室蔬菜提质增效的重要因素。为研究番茄响应低浓度CO_2基因的功能,以及探讨光合碳同化相关基因共表达对番茄应答低浓度CO_2的作用,本试验以番茄“合作908”为材料,克隆了番茄碳同化相关基因/cCA1、和FBA,通过构建βCA1+SBP+FBA多基因共表达载体,利用农杆菌介导法进行番茄遗传转化,最终获得βCA1、SBP和FBA叁个基因共同表达的番茄转基因植株。主要研究结果如下:(1)从番茄叶片中克隆了番茄碳同化相关的βCA1、SBP和FBA;(2)利用连接肽“2A”构建了含βCA1、SBP和FBA的多基因共表达载体;(3)对番茄再生体系进行了优化,筛选出褐化程度低的番茄再生体系:诱茅培养基:MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IAA+500 mg/L Cef+400 mg/mL PVP/40,生根培养基 MS+0.1 mg/L IAA+250 mg/L Cef;(4)利用农杆菌介导法进行番茄遗传转化,获得了高表达βCA1、SBP和FBA的番茄T1代转基因植株。(本文来源于《山西农业大学》期刊2018-06-01）
庞中兵,王伟,刘赛宝,王辉,陈洪岩[4]（2018）在《利用重组慢病毒载体共表达Cas9-sgRNA构建TLR4基因敲除DF1细胞系》一文中研究指出Toll样受体4(TLR4)是TLRs家族成员之一,可识别革兰阴性菌细胞壁脂多糖(LPS)和某些病毒蛋白,进而激活天然免疫应答,在细菌和病毒感染性疾病的发生过程中起重要作用。本研究靶向禽源TLR4基因第一外显子,设计、构建了2个sg RNA的CRISPR/Cas9双质粒表达系统,转染禽DF1细胞。流式细胞仪分选、测序验证了在家禽DF1细胞系成功敲除了TLR4基因。然后利用GV393慢病毒表达载体,构建了CAG启动子启动Cas9的共表达载体Lv-CAG-Cas9-U6-sg RNA。通过转染、流式分选、培养单细胞克隆、靶基因组测序以及Western-blot检测,筛选获得1株TLR4基因敲除的DF1细胞系。结果表明,TLR4基因敲除细胞系与野生型细胞生长动力学无显着差异。本研究验证了共表达Cas9和sg RNA可以在禽源细胞系实现基因编辑,为利用重组慢病毒共表达Cas9和sg RNA策略探索构建敲除鸡模型研究奠定了理论基础和科学依据,也为研究禽TLR4基因功能、家禽天然免疫应答机制提供了细胞模型。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2018年08期）
华俊豪[5]（2018）在《文昌鱼胚胎发育中Fused基因功能研究及2A肽介导共表达载体构建》一文中研究指出Fused基因在动物胚胎Hedgehog(Hh)信号通路和纤毛发生过程中有着重要作用,Fused基因最早在果蝇体节中发现,参与果蝇胚胎发育中前后轴的区段体节极性的建立,并参与到果蝇Hedgehog(Hh)信号通路,而随后在小鼠和斑马鱼研究中发现Fused具有参与运动纤毛中央对的建立的功能。虽然Fused功能在无脊椎动物和脊椎动物中被广泛报道,但是Fused基因表达谱以及功能分析在文昌鱼胚胎发育中都没有任何研究。本文先通过原位杂交和实时定量PCR对Fueed基因在不同时期的空间表达谱进行系统的研究,随后利用基因过表达和敲除2种方法研究文昌鱼Fused基因与胚胎发育中Hedgehog(Hh)信号通路的关系。原位杂交及实时定量PCR结果显示,Fused基因为母源性表达,并且在胚胎发育早期呈现全胚胎表达模式,随着胚胎发育到3体节时期,Fused基因开始集中表达在文昌鱼胚胎内胚层。在过表达实验中,注射Fused全长mRNA后并没有观察到任何胚胎发育异常的现象,并且原位杂交检测文昌鱼中Hh信号通路下游靶基因Ptch表达也未发生变化。对于这个结果可能是Fused激酶在Hh信号通路中参与suppressor of Fused(Sufu)磷酸化从而促进Gli入核,而过量的Fused并不能使得suppressorofFused(Sufu)磷酸化增加,因此Gli入核程度变化不大,未能检测到Hh信号通路上调的结果。本文筛选出已敲除Fused基因文昌鱼F1,将相同移码突变个体(缺失4bp)进行自交,成功获得含有Fused纯合突变的F2代。原位杂交检测F2后代胚胎发现,在自交后代中有四分之一胚胎出现Fused基因表达消失现象,这暗示着我们获得Fused基因敲除的文昌鱼,而Hh信号通路下游靶基因Ptch在Fused-/-中却没有发生明显变化,说明Fused基因可能没有参与文昌鱼Hh通路。F2幼体个体基因型鉴定结果发现后代中Fused+/+:Fuse+/-:Fused/-=l:2:1,符合孟德尔分离比,但是光学显微镜下观察的Fused-/-个体却没有表现出和文昌鱼Hh信号通路其他功能元件敲除突变体相类似的表型(如脑泡,眼点,口,尾部器官变化的表型)。在随后观察中我们发现Fused-/-在胚后发育比相同培养条件下的Fuse+/+,Fused+/-缓慢,并且Fused/-在受精后3星期内全部死亡。以上结果表明文昌鱼Fused并没有参与到Hh信号通路调控中去,但是Fused基因在文昌鱼胚后3周正常发育中起到作用。为了确认Fused基因是否参与文昌鱼运动纤毛发生,我们通过免疫荧光和扫描电镜对Fused/-中运动纤毛分布和长度进行细致的观察。结果显示,Fused/-中运动纤毛的分布和长度与野生型并没有显着性差别。考虑到Fused基因为母源性表达,母源性残余的Fused蛋白可能对运动纤毛发生起相应作用,所以我们通过高盐处理脱去Fused-/-3体节期、8体节期、12体节期运动纤毛,并用扫描电镜检测运动纤毛在Fused-/-中再生的情况。但是扫描电镜结果显示,Fused/-中运动纤毛再生的情况与野生型中没有显着性差别。随后我们在光学显微镜下对幼体Fused--中运动纤毛的摆动进行观察,也未发现与野生型有明显区别。由上述结果我们推测Fused基因并未参与文昌鱼中运动纤毛发生和功能发挥。2A肽介导的多基因表达载体具有高裂解活性、上下游基因等摩尔表达等优点,已广泛应用于动物转基因研究。文昌鱼作为一种新兴的模式动物,尚无应用这种表达载体的报道,但已有的pCS2转录系统在文昌鱼中表达效率不高,我们在pXT7转录系统重新构建一个由P2A(一种2A肽)介导的多基因表达载体。将体外转录的mRNA注入文昌鱼胚胎后,经过激光共聚焦显微镜检测表明,由P2A介导的mRNA在文昌鱼原肠胚中期即开始表达,并且随着胚胎发育表达量不断上升。在胚胎发育至5体节期时我们能明显观察到eGFP蛋白被定位到细胞核中,而mCherry蛋白被定位到细胞膜上,说明此时重组eGFP蛋白和mCherry蛋白已被完全剪切开。通过蛋白质免疫印迹检测表明,在8体节时期由P2A介导的mRNA在文昌鱼胚胎中剪切效率达到了 91%,说明2A肽介导的多基因表达载体在文昌鱼胚胎中具有高效的翻译和剪切效率。进而我们构建了由文昌鱼热启动子(BbHsp70)启动的P2A多基因共表达载体,热激证明其也能在文昌鱼胚胎中表达,并且能被剪切成两个独立的蛋白,达到了预期的效果。综上,我们成功地构建了一个在文昌鱼中可用热激启动表达、由P2A介导的多基因表达载体。(本文来源于《厦门大学》期刊2018-04-01）
何佳,邓峰美,林友胜,刘漪沦[6]（2018）在《网素蛋白1和增强绿色荧光蛋白基因共表达慢病毒载体构建和鉴定及在结直肠癌细胞SW480中表达》一文中研究指出目的构建和鉴定网素蛋白基因(PLS)1和增强绿色荧光蛋白(EGFP)共表达慢病毒载体,并检测其在人结直肠癌细胞株SW480中的表达水平。方法采用聚合酶链反应(PCR)方法克隆PLS1基因;将PLS1基因连接到带有EGFP的慢病毒表达载体p EZ-Lv201中构建慢病毒载体;将构建的慢病毒载体质粒p EZ-PLS1-SV40-e GFP-IRES-Puro(p EZ-PLS1)与慢病毒包装质粒混合物Lenti-Pac HIV mix共转染293T细胞,收集慢病毒悬液;重组病毒转染H1299细胞,定量PCR法检测重组病毒滴度;将构建的p EZ-PLS1感染SW480细胞,荧光显微镜观察和Western印迹检测感染后SW480细胞中EGFP和目的基因PLS1表达。结果基因测序分析证实克隆的PLS1基因与Gen Bank提供的序列完全一致;构建的重组慢病毒载体经双酶切、琼脂糖凝胶电泳鉴定证实PLS1正确插入p EZ-Lv201;定量PCR测定慢病毒滴度为0.1×10~9~1.0×10~9TU/ml。在SW480细胞中重组病毒感染96 h后在荧光显微镜下可检测到较强的绿色荧光蛋白表达,Western印迹检测到在SW480细胞中PLS1蛋白过表达。结论成功构建携带PLS1基因的重组慢病毒载体,在SW480细胞中有效表达。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2018年02期）
于周璐,滕巧泱,崔宏锐,荣广玉,李雪松[7]（2016）在《一种共表达不同亚型禽流感病毒基因且形成病毒样颗粒的真核表达载体的构建与鉴定》一文中研究指出动物流感DNA疫苗是非常有应用前景的新型疫苗之一,本研究构建了能同时表达禽流感病毒2种血凝素H5HA和H9HA以及1种神经氨酸酶N1NA的真核表达质粒。间接免疫荧光结果表明,构建的真核表达质粒转染MDCK细胞后,同时表达出H5HA、H9HA和N1NA蛋白;转染293T细胞上清通过血凝试验可检测到2~4血凝价;通过透射电镜观察到了病毒样颗粒。本研究用一种质粒同时表达不同亚型流感病毒蛋白并且形成了病毒样颗粒,为流感病毒多价DNA疫苗研究提供了坚实基础。(本文来源于《中国动物传染病学报》期刊2016年04期）
姚延珠,吴明明,孙金海[8]（2016）在《pGH和IGF-Ⅰ双基因共表达载体的构建及转双基因猪的获得与检测》一文中研究指出旨在构建可高效表达pGH基因和IGF-Ⅰ基因的双基因共表达载体,制备转双基因(pGH+IGF-Ⅰ)猪,以期探索pGH基因和IGF-Ⅰ基因对猪生长发育的影响,为节粮型高瘦肉率新品种猪的培育奠定理论基础。从长白猪耳样中提取总RNA,经反转录RT-PCR获得pGH基因不含终止密码子的编码序列和IGF-Ⅰ基因完整的编码序列,经酶切连接克隆至pc DNA3.1(+)真核表达载体上,构建pc DNA3.1(+)-pGH-IGF-Ⅰ双基因共表达载体。将其转染PK15细胞,Q-PCR检测2个目的基因在PK15细胞中的表达情况。将构建的双基因共表达载体用纳米材料包裹后转染长白猪精子,采用精子载体法制备转双基因猪。PCR及测序鉴定转双基因阳性个体,Q-PCR检测2个目的基因在转双基因猪体内的表达情况。PCR及测序鉴定追踪检测转双基因猪体内pGH基因和IGF-Ⅰ基因的稳定情况。RT-PCR及测序结果表明,成功克隆了长白猪的pGH基因和IGF-Ⅰ基因的编码序列。酶切和测序分析表明成功构建了双基因真核共表达载体,转染PK15细胞后,Q-PCR检测表明,pGH基因和IGF-Ⅰ基因均在mRNA水平成功表达。母猪妊娠获得13头仔猪,经PCR及测序检测,其中4头仔猪为转双基因阳性,转双基因阳性率为30.76%。Q-PCR检测外源pGH基因与IGF-Ⅰ基因在转双基因猪体内成功表达。1~7月龄均可检测到外源pGH基因与IGF-Ⅰ基因,证明2个外源基因在转双基因猪体内稳定存在,并未随着生长而丢失。在转双基因公猪的精液中均能检测到2个外源基因,证明外源基因存在稳定传代的可能。(本文来源于《华北农学报》期刊2016年03期）
曹平华[9]（2016）在《多元纤维素酶基因乳酸杆菌共表达载体的构建及无抗标记乳酸杆菌重组技术的研究》一文中研究指出提高反刍动物粗饲料利用率一直是许多研究者持续关注的重要课题,解决该问题的一种有效方法就是利用纤维分解菌来提高粗饲料中粗纤维的降解率。随着基因工程技术的发展和对乳酸菌的深入研究,利用基因工程技术构建可共表达多元纤维素酶的乳酸杆菌工程菌来直接处理粗饲料,或利用其作为活菌制剂帮助动物提高其粗饲料利用率都可能是便捷、有效、廉价的方法,但是,需要特别关注重组菌的安全性问题。因此,人工重组菌构建中的无抗、有效、简便、稳定等就成为微生物基因工程技术研究中的热点。本试验通过克隆叁种纤维素酶基因,筛选宿主菌乳酸菌的启动子和信号肽元件,旨在建立复杂载体的快速构建方法与技术,完善构建共表达多元纤维素酶乳酸杆菌工程菌的技术体系,并建立人工重组菌的体外评测方法,最终为功能性安全级乳酸杆菌重组菌的开发奠定基础。获得的主要研究结果如下:1.从A.fumigatus WL002 cDNA中克隆到1个内切纤维素酶基因成熟肽和1个β-葡萄糖苷酶基因成熟肽,大小分别为1434 bp和2517 bp,命名为cenA(No.KU933946)和bglW(No.KM520393);从B.subtilis WL001基因组DNA中克隆获得外/内切双功能纤维素酶基因,大小1527 bp,命名为eglS3(No.KU933947);从Streptomyces griseorubens WL003基因组DNA中克隆到1个β-葡萄糖苷酶基因,大小1203 bp,命名为bglS(No.KU921415)。获得的这4个基因均在大肠杆菌E.coil Rosseta(DE3)中能实现可溶性异源表达,经酶学性质分析发现在偏酸性条件下,重组酶CENA(pH 4.5)、EGLS3(pH 6.0-6.5)和BGLS(pH 6.0)具有最高的纤维素酶活性,而在偏碱性(pH 9.0)条件下,重组酶BGLW具有最高纤维素酶活性。因此,可以把cenA、eglS3和bglS基因用于多元纤维素酶基因的共表达乳酸杆菌工程菌的构建。2.基于POE-PCR,建立了一种简便、快速可同时将多个外源DNA片段整合到同一质粒的技术,其操作过程可在2-3天完成,大大提高了复杂载体的构建效率。而且,其质粒的阳性转化效率明显提高(>95%)。3.为了提高叁个纤维素酶基因乳酸杆菌共表达质粒的基因表达水平和相应纤维素酶蛋白的胞外分泌量,将同一报告基因(celL15)和信号肽(SPusp45)一起连接到克隆载体pLEM415上,然后,从6个备选启动子中筛选出了3个作用效果理想的启动子,比较研究结果表明其作用效果是Paldo>Ppgm>PermB,且它们介导的内切葡聚糖酶活性是常用启动子P32的1.5-2倍;另外,将同一报告基因(celL15)和启动子(Paldo)一起连接到克隆载体pLEM415上,通过比较胞外纤维素酶活性,从5个备选信号肽中筛选出了3个胞外分泌效果理想的信号肽,比较研究结果表明其胞外分泌酶的活性SPlp0373>SPamyL>SPusp45,之后,又在β-葡萄糖苷酶的胞外分泌效果和酶活上进行了比较,证明信号肽SPlp0373的效果最好,可用于构建乳酸杆菌分泌表达载体。4.成功构建了3元纤维素酶基因乳酸杆菌共表达质粒pLEM415-cenA-eglS3-bglS,并获得了一个共表达叁元纤维素酶的乳酸杆菌重组菌XNY/pLEM415-cenA-eglS3-bglS。该菌在正常发酵培养条件下可同时表达分泌内切葡聚糖酶、外切内切双功能纤维素酶和β-葡萄糖苷酶,其胞外重组蛋白在45-50℃和pH 5.5-6.0条件下具有较高的内切葡聚糖酶活性(1.42±0.13 U/mL/OD600)、外切葡聚糖酶活性(0.42±0.06 U/mL/OD600)、β-葡萄糖苷酶活性(0.71±0.09 U/mL/OD600)和滤纸酶活性(0.72±0.07 U/mL/OD600),表明该菌具有一定的纤维降解能力。进一步利用该工程菌株对小麦秸秆和玉米秸秆进行了固体发酵试验,结果表明在优化后的发酵条件下,小麦秸秆和玉米秸秆的粗纤维降解率分别提高了12.6%和9.7%,表明用于粗饲料体外发酵或作为活菌制剂具有一定效果。5.为完善乳酸杆菌重组技术,获得无抗标记的乳酸杆菌重组菌,本试验首次克隆了乳酸杆菌苯丙氨酰-tRNA合成酶α亚基编码基因pheS(No.KF915808),大小1047 bp,并证实该基因存在的一个点突变(GCC312GGC)可作为乳酸杆菌负向筛选的标记,筛选确定的底物(p-Cl-Phe)的适宜浓度为25 mM。通过把该负向筛选标记(pheSM同义突变基因pheSMn)、正向筛选标记(红霉素基因)与靶基因一起,经过两轮同源重组,建立了一种无抗标记乳酸杆菌重组技术。同时,利用该技术成功获得了一个无抗标记的纤维素酶基因重组乳酸杆菌XNY-celL15。进一步的研究表明,该重组菌可表达内切葡聚糖酶,活性为0.81 U/mL/OD600。这为开发功能性安全级乳酸杆菌提供了技术基础。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2016-06-01）
孙悦[10]（2016）在《非淀粉多糖酶基因筛选及其与植酸酶基因共表达载体构建》一文中研究指出非淀粉多糖(Non-starch polysaccharides,NSP)是广泛存在于植物细胞壁中的抗营养因子,包括纤维素、半纤维素(阿拉伯木聚糖、β-葡聚糖、甘露聚糖等)、果胶等物质。猪、鸡等单胃动物的胃和小肠中缺乏降解这类物质的酶,无法充分吸收细胞内的营养物质,不仅造成了饲料的浪费,还造成了环境污染。饲料企业往往通过添加NSP酶制剂的方式来缓解或消除NSP产生的抗营养作用,而酶制剂在饲料制粒、贮藏等过程中易失活,影响了其实际利用价值。此外,在饲料中添加NSP酶制剂还增加了饲料成本。转基因技术为上述问题的解决提供了新的思路。本研究从微生物和低等真核生物中筛选了大量NSP酶基因,通过猪密码子优化及信号肽替换后克隆到pCDNA3.1(+)真核表达载体上,瞬时转染猪PK15细胞后通过收集细胞分泌上清分析酶学性质(最适pH、p H稳定性、胃/胰蛋白酶耐受性),以筛选可在猪细胞中高效表达的NSP酶基因。经基因连接方式的筛选和优化及体外细胞表达验证,构建了一条多个NSP酶基因共表达的多顺反子,并构建了一个唾液腺特异共表达多个NSP酶的载体,为新型环保转基因猪的制备奠定基础,对我国养猪业的可持续发展具有重要意义。本研究主要结果如下:(1)通过对微生物和低等真核生物来源的多个纤维素酶基因的表达活性及酶学性质分析,筛选到两个可在猪细胞中高效表达出具有较高活性纤维素酶的基因:egII和TeEGI,二者兼具葡聚糖酶活性。在PK15细胞中,以上两个基因表达的纤维素酶和葡聚糖酶活性分别为0.20 U/mL(egII)、0.30 U/mL(TeEGI)(CMC-Na,pH4.00)和0.61 U/mL(egII)、0.66 U/mL(Te EGI)(β-葡聚糖,pH 4.62)。(2)通过对微生物源的叁个果胶酶基因的表达活性及酶学性质分析,筛选到两个可在猪细胞中高效表达出具有较高活性果胶酶的基因:PG7fn和PG。二者在PK15细胞中表达的果胶酶最高酶活分别为1.15 U/mL(多聚半乳糖醛酸、pH4.0)和1 U/mL(多聚半乳糖醛酸、pH5.50)。(3)对比分析了叁种微生物源木聚糖酶基因(asp-xyn、Xynl11、Penxyl)的表达活性及酶学性质,筛选到可在猪细胞中高效表达木聚糖酶的基因:asp-xyn。以上叁种木聚糖酶基因表达的最高酶活力分别为:1.88 U/mL、1.65 U/mL、0.72 U/mL(木聚糖,pH5.0)。(4)通过基因重组技术,构建了四条共表达木聚糖酶和纤维素酶的双顺反子:xyn-flag-egII-T2A,xyn-flag-egII,xyn-egII-T2A,xyn-egII。其中xyn-egII融合效果最好,其木聚糖酶活性为asp-xyn表达活性的57.35%(pH 5.00);β-葡聚糖酶活性egII表达活性的46.90%(pH 4.50);CMC的活性为egII表达活性的67.97%(pH 6.00)。(5)成功构建pCD-EsAPPA-T2A和pCD-TeEGI-T2A表达载体,其在PK15细胞中表达的酶活性低于单基因表达活性。(6)优化多基因共表达的连接方案,确定了四个基因(pg7fn、asp-xyn、EsAPPA、TeEGI)的最佳连接方案,成功构建了PG7fn-asp-xyn-EsAPPA-TeEGI多顺反子,在PK15细胞中成功共表达果胶酶-木聚糖酶-植酸酶-纤维素酶。(7)成功构建唾液腺特异表达四种基因(pg7fn、asp-xyn、EsAPPA、TeEGI)的转基因载体pPB-mPSP-PXAT-neoGFP。(本文来源于《华南农业大学》期刊2016-06-01）
共表达载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了构建共表达基因Ⅱ型新城疫病毒(NDV)F、HN蛋白的mcDNA载体,试验采用融合PCR技术将合成的Ⅱ型NDV的F基因片段与HN基因片段融合并携带Flag标签,构建pUC-F-HN-Flag基因片段,然后与mcDNA载体MN512A连接构建重组质粒MN512A-pUC-F-HN-opt-Flag,采用菌落PCR扩增与酶切方法对重组质粒进行鉴定;利用阿拉伯糖诱导剂诱导重组质粒产生mcDNA;将重组质粒转染至HEK-293T细胞中,收集细胞总蛋白并通过Western-blot与间接免疫荧光试验检测蛋白表达情况。结果表明:通过F、HN基因片段的扩增与融合成功构建pUC-F-HN-Flag基因片段,菌落PCR扩增与酶切结果证明重组质粒连接成功,经诱导剂诱导重组质粒成功产生mcDNA,Western-blot及间接免疫荧光试验均检测到目的蛋白。说明重组质粒MN512A-pUC-F-HN-opt-Flag构建成功。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
共表达载体论文参考文献
[1].唐维,李强,张允刚,后猛,闫会.甘薯淀粉合成关键酶AGPase小亚基双顺反子共表达载体构建[J].江苏师范大学学报(自然科学版).2019
[2].王成宇,姚心茹,刘晶,胡译文,赵维静.共表达基因Ⅱ型新城疫病毒F、HN蛋白mcDNA载体的构建[J].黑龙江畜牧兽医.2018
[3].张甜丽.番茄碳同化相关基因共表达载体构建及遗传转化研究[D].山西农业大学.2018
[4].庞中兵,王伟,刘赛宝,王辉,陈洪岩.利用重组慢病毒载体共表达Cas9-sgRNA构建TLR4基因敲除DF1细胞系[J].中国兽医科学.2018
[5].华俊豪.文昌鱼胚胎发育中Fused基因功能研究及2A肽介导共表达载体构建[D].厦门大学.2018
[6].何佳,邓峰美,林友胜,刘漪沦.网素蛋白1和增强绿色荧光蛋白基因共表达慢病毒载体构建和鉴定及在结直肠癌细胞SW480中表达[J].中国老年学杂志.2018
[7].于周璐,滕巧泱,崔宏锐,荣广玉,李雪松.一种共表达不同亚型禽流感病毒基因且形成病毒样颗粒的真核表达载体的构建与鉴定[J].中国动物传染病学报.2016
[8].姚延珠,吴明明,孙金海.pGH和IGF-Ⅰ双基因共表达载体的构建及转双基因猪的获得与检测[J].华北农学报.2016
[9].曹平华.多元纤维素酶基因乳酸杆菌共表达载体的构建及无抗标记乳酸杆菌重组技术的研究[D].西北农林科技大学.2016
[10].孙悦.非淀粉多糖酶基因筛选及其与植酸酶基因共表达载体构建[D].华南农业大学.2016
论文知识图
