导读:本文包含了毕赤氏酵母论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:酵母,载体,基因,深黄,硫酸铵,辅酶,白蛋白。
毕赤氏酵母论文文献综述
王长远,全越,沈冰蕾,姚笛,于长青[1]（2016）在《深黄被孢霉Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因在毕赤氏酵母SMD1168中表达的研究》一文中研究指出引物根据Δ~6-脂肪酸脱氢酶(D6D)基因以及酵母蛋白表达载体p GAPZαA的多克隆位点进行引物设计,并在上游插入ECo RⅠ位点、下游插入XhoⅠ位点,从深黄被孢霉中克隆D6D基因,构建p MD18-T-D6D载体与p GAPZαA-D6D载体。将重组质粒线性化,并将其电转导入到毕赤氏酵母(Pichia pastoris SMD1168)中,Zeocin抗生素筛选高拷贝转化子,对重组菌进行诱导表达。经过Tricine-SDS-PAGE分析和蛋白质免疫印迹(Western bloting)试验,证明Δ~6-脂肪酸脱氢酶融合蛋白具有免疫学活性。结果成功构建了重组酵母p GAPZαA-SMD1168,为利用基因工程菌生产γ-亚麻酸(GLA)奠定理论基础。(本文来源于《农产品加工》期刊2016年14期）
李辰雨[2]（2016）在《毕赤氏酵母发酵液中重组人血清白蛋白分离纯化工艺的初步研究》一文中研究指出重组人血清白蛋白是血源蛋白的一种替代品,生理功能与人血清白蛋白相同,因具有不携带传染性病毒的优点而受到广泛的关注。目前重组人血清白蛋白主要通过基因重组毕赤氏酵母发酵产生,由于发酵过程中会产生许多杂质,因此从发酵液中分离、纯化目标产物是重组人血清白蛋白产业化的重要环节。本文以毕赤氏酵母重组人血清白蛋白的发酵液为研究对象,采用膜分离、层析等技术进行重组人血清白蛋白的分离工艺研究。分离纯化工艺路线为:发酵液离心处理→加热灭活上清液中的蛋白酶→初级超滤分离→二级超滤分离→吸附脱色→阳离子交换层析→阴离子交换层析。其主要的研究结果如下:(1)重组人血清白蛋白上清液超滤分离工艺研究。重组人血清白蛋白分子量在67kD左右,先采用分子质量80kD的膜除去分子质量大于67 k D的杂质,再用分子质量30 k D膜除去分子质量小于67 k D的杂质。超滤分离最佳操作压力为0.15 MPa,最佳操作p H值为7.0。重组血清白蛋白的纯度由2%提升到12%,目标物得到初步分离。(2)重组人血清白蛋白超滤液吸附脱色工艺研究。通过静态吸附实验得到,大孔树脂LS-305和LS-610B的吸附容量分别为68.0△AV·g-1和78.0△AV·g-1,蛋白损失率分别为3.32%和3.39%;且实验数据的拟合得知,Langmuir模型的相关系数分别为0.9602及0.9761,二阶动力学模型的相关系数分别为0.9877及0.9975。通过动态吸附实验,当料液p H值为6.0,流量40 m L·h-1,进料体积200 m L(大孔树脂装柱量为20 m L)时,滤液中色素的脱除率可以达到81.5%,而重组人血清白蛋白的损失率为3%。(3)重组人血清白蛋白脱色液层析纯化工艺研究。通过阳离子交换层析实验得到,在平衡缓冲液的p H值为3.7,及洗脱缓冲液的p H值为5.9、Na Cl浓度为0.1 mol·L-1的条件下,重组人血清白蛋白纯化的纯度达到71%。通过阴离子交换层析实验得到,在洗脱缓冲液的p H值为7.6、Na Cl浓度为0.5 mol·L-1的条件下;重组人血清白蛋白纯化的纯度达到95%。实验表明,本文探索提出的从毕赤氏酵母发酵液中分离纯化重组人血清白蛋白的工艺路线是可行的,对进一步研究及工业规模的放大及优化具有一定的参考意义。(本文来源于《烟台大学》期刊2016-04-01）
钱辉,张充,陆兆新,别小妹,赵海珍[3]（2014）在《内生多粘芽孢杆菌EJS-3纤溶酶基因在毕赤氏酵母中的表达》一文中研究指出以自构建的重组质粒p ET-Dsb A/PPFE-I为模板,扩增内生多粘芽孢杆菌纤溶酶基因PPFE-I,构建Pichia pastoris表达载体p PICZαA/PPFE-I,通过电击转化,p PICZαA/PPFE-I被整合到Pichia pastoris SMD1168基因组中,抗性筛选得到的阳性转化子,用终浓度为1%甲醇诱导72 h,酶活达到286 IU/ml,是野生菌的2.6倍,表达产物用SDS-PAGE进行分析,在相对分子质量63k Da处出现明显的蛋白条带,降解人血纤维蛋白试验中r PPFE-I最先降解人血纤维蛋白原的α链,其次是β链,而对γ链降解最缓慢。实现了多粘类芽孢杆菌纤溶酶基因在毕赤酵母中的表达,为植物内生菌来源溶栓药物的开发提供了新的途径。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2014年12期）
谭琳,谭昕,周鹏,姚志彬[4]（2010）在《4Aβ_(15)基因在毕赤氏酵母中的分泌表达及初步纯化》一文中研究指出以pQE4Aβ15为模板,PCR扩增4Aβ15基因,并克隆到pMD18T载体中.以之进一步构建了酵母表达载体pPICZα4Aβ15.通过电转化,重组质粒pPICZα4Aβ15被整合到毕赤氏酵母GS115基因组中.甲醇诱导GS115/pPICZα4Aβ15表达,得到重组蛋白.SDS-PAGE显示重组蛋白的分子质量为18 kD,而4Aβ15的分子质量理论值为8 kD,经Western blot和质谱分析证实重组蛋白为4Aβ15.毕赤氏酵母GS115/pPICZα4Aβ15工程菌发酵上清经60%饱和硫酸铵沉淀初步纯化,获得纯度为80%的重组4Aβ15.(本文来源于《生命科学研究》期刊2010年04期）
曾璐,秦丹,林亲录,蔡柳[5]（2010）在《生防菌季也蒙毕赤氏酵母增殖培养基优化研究》一文中研究指出从培养基出发,研究了生防菌季也蒙毕赤氏酵母的增殖培养条件。通过测定菌体数量,绘制了季也蒙毕赤氏酵母的生长曲线;确定PDB培养基为季也蒙毕赤氏酵母优化出发培养基;最适增殖培养时间为20h。对碳源、氮源、无机盐、维生素进行单因素试验筛选出较好的组分,然后通过正交试验对培养基条件进行了优化,获得较优的增殖培养基组成为:果糖2%、酵母膏0.8%、MnSO40.1%、烟酰胺0.001%。季也蒙毕赤氏酵母优化培养基的菌体增殖数量可达基础培养基PDB的19.6倍。(本文来源于《湖南农业科学》期刊2010年14期）
王长远,张丽萍,刘松财,汤丹[6]（2009）在《甜味蛋白Brazzein在毕赤氏酵母中表达的初步研究》一文中研究指出目的:采用pGAPZαA为表达载体,SMD1168毕赤酵母为受体系统,构建分泌型的甜味蛋白Brazzein毕赤酵母重组菌。方法:按照毕赤酵母偏爱密码子设计Brazzein基因,共设计4对引物。在上、下游引物分别引入XbaI与XhoI酶切识别位点,采用SOE-PCR法合成Brazzein基因,构建克隆载体pUC57-Bra与酵母表达载体pGAPZαA-Bra。将重组质粒线性化,电转导入毕赤酵母(Pichia. pastoris SMD1168)中,用高浓度的抗生素Zeocin筛选高拷贝转化子。将重组菌株接种于YPD培养基诱导表达,进行SDS-PAGE分析。结果:成功构建了分泌型的Brazzein毕赤酵母重组菌。SDS-PAGE表明,目标蛋白的相对分子质量与理论值一致,在诱导72h后目的蛋白表达量达0.12g/L。对纯化后的蛋白进行生物活性测定,经鉴定具有一定的甜味,表达的Brazzein蛋白生物学活性良好。(本文来源于《中国食品学报》期刊2009年05期）
周小玲,李子龙,孙平楠[7]（2009）在《HBV PreS1-EGFP融合表达质粒高效转化毕赤氏酵母的研究》一文中研究指出目的:实现HBV PreS1-EGFP融合表达质粒高效转化毕赤氏酵母。方法:分别将乙肝病毒前S1蛋白和绿色荧光蛋白克隆到表达载体pPIC9K,获得重组质粒pPIC9K-EGFP-preS1,SacI位点酶切线性化,采用醋酸锂(LiAc)和二硫苏糖醇(DDT)对巴斯德毕赤氏酵母Pichia Pastoris GS115预处理,在电压1.5kv、电容25F条件下进行电击转化。电击后立即迅速稀释在冰预冷的1M的山梨醇中,混匀后取100l的菌液均匀涂布YNBG平板,利用HIS4标记筛选转化子。结果:发现改进后的转化方法pPIC9K-EGFP-preS1的转化率提高到164×104个转化子/1μgpPIC9K-EGFP-preS1 DNA,是传统方法的6.6倍。结论:采用改进后的方法能有效的提高质粒pPIC9K-EGFP-preS1的转化率,为筛选高表达HBVPreS1-EGFP融合蛋白的转化子打下基础。(本文来源于《现代生物医学进展》期刊2009年18期）
何尧声,沈文涛,陈春宝,王明钦,周鹏[8]（2009）在《重组人胰岛素在毕赤氏酵母中的分泌表达》一文中研究指出利用套迭PCR技术合成重组人胰岛素基因,并在A链和B链之间加入Kex2酶切位点。将合成的重组人胰岛素基因以正确的阅读框插入到组成型分泌表达载体pGAPZα-A的α-factor信号肽序列的下游,构建成pGAPZα-A/Insulin重组分泌表达载体。表达载体用BlnI线性化处理后电击转化毕赤酵母GS115感受态细胞,构建成分泌型表达Insulin的工程菌。SDS-PAGE和Native-PAGE的分析表明:蛋白在分泌表达过程中,加入Insu-lin的A链(2.4k)和B链(3.4k)之间的Kex2酶切位点发挥了作用,Kex2蛋白酶将A链和B链切开,在α-factor信号肽的作用下通过分泌途径将A链和B链分泌到胞外,同时A链和B链又以二硫键形成了高级结构。Western Blot结果表明:重组蛋白能够与鼠抗人Insulin抗体发生特异性反应,具有与天然Insulin相同的免疫原性。(本文来源于《药物生物技术》期刊2009年02期）
曾琦锴,杜红丽,翟志臣,林小琼,林影[9]（2008）在《Lysine 21突变对树干毕赤氏酵母木糖还原酶辅酶依赖性的影响》一文中研究指出木糖还原酶是重组酿酒酵母工程菌利用木糖生成乙醇代谢途径中的关键酶,该关键酶在利用木糖时依赖NADPH而不是NADH是导致酿酒酵母代谢木糖生成乙醇的最终产率低的主要原因之一。为了改变树干毕赤氏酵母木糖还原酶的辅酶依赖性,对它的第21位赖基酸Lys进行了突变。利用质粒载体pET28b分别将突变后的基因K21A-XYL1、K21R-XYL1及野生基因WT-XYL1在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中进行表达,表达后的蛋白经His-Tag纯化柱纯化后测定酶学性质。结果表明:K21R突变子的辅酶依赖性没有改变,但K21A突变子的辅酶依赖性由NADPH完全逆转为NADH。(本文来源于《生物工程学报》期刊2008年06期）
王盛,金大勇,蔡宇杰[10]（2007）在《谷胱甘肽生产菌重组巴斯德毕赤氏酵母的构建》一文中研究指出目的:构建一株新型的产谷胱甘肽的重组巴斯德毕赤氏酵母,并研究该重组菌合成谷胱甘肽的能力;方法:利用PCR技术克隆来源于酿酒酵母的γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸合成酶编码基因GSH1和谷胱甘肽合成酶的基因GSH2,串联插入表达载体pGAPZA,转化Pichia pastoris GS115,在Zeo-cin平板上挑选阳性转化子,并对阳性转化重组菌进行摇瓶培养筛选。结果:得到一株GSH的产量高达162.2mg/L重组菌,说明串联表达酿酒酵母GSH1和GSH2基因,重组甲醇酵母生产谷胱甘肽可以达到较高的水平。(本文来源于《食品与机械》期刊2007年06期）
毕赤氏酵母论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
重组人血清白蛋白是血源蛋白的一种替代品,生理功能与人血清白蛋白相同,因具有不携带传染性病毒的优点而受到广泛的关注。目前重组人血清白蛋白主要通过基因重组毕赤氏酵母发酵产生,由于发酵过程中会产生许多杂质,因此从发酵液中分离、纯化目标产物是重组人血清白蛋白产业化的重要环节。本文以毕赤氏酵母重组人血清白蛋白的发酵液为研究对象,采用膜分离、层析等技术进行重组人血清白蛋白的分离工艺研究。分离纯化工艺路线为:发酵液离心处理→加热灭活上清液中的蛋白酶→初级超滤分离→二级超滤分离→吸附脱色→阳离子交换层析→阴离子交换层析。其主要的研究结果如下:(1)重组人血清白蛋白上清液超滤分离工艺研究。重组人血清白蛋白分子量在67kD左右,先采用分子质量80kD的膜除去分子质量大于67 k D的杂质,再用分子质量30 k D膜除去分子质量小于67 k D的杂质。超滤分离最佳操作压力为0.15 MPa,最佳操作p H值为7.0。重组血清白蛋白的纯度由2%提升到12%,目标物得到初步分离。(2)重组人血清白蛋白超滤液吸附脱色工艺研究。通过静态吸附实验得到,大孔树脂LS-305和LS-610B的吸附容量分别为68.0△AV·g-1和78.0△AV·g-1,蛋白损失率分别为3.32%和3.39%;且实验数据的拟合得知,Langmuir模型的相关系数分别为0.9602及0.9761,二阶动力学模型的相关系数分别为0.9877及0.9975。通过动态吸附实验,当料液p H值为6.0,流量40 m L·h-1,进料体积200 m L(大孔树脂装柱量为20 m L)时,滤液中色素的脱除率可以达到81.5%,而重组人血清白蛋白的损失率为3%。(3)重组人血清白蛋白脱色液层析纯化工艺研究。通过阳离子交换层析实验得到,在平衡缓冲液的p H值为3.7,及洗脱缓冲液的p H值为5.9、Na Cl浓度为0.1 mol·L-1的条件下,重组人血清白蛋白纯化的纯度达到71%。通过阴离子交换层析实验得到,在洗脱缓冲液的p H值为7.6、Na Cl浓度为0.5 mol·L-1的条件下;重组人血清白蛋白纯化的纯度达到95%。实验表明,本文探索提出的从毕赤氏酵母发酵液中分离纯化重组人血清白蛋白的工艺路线是可行的,对进一步研究及工业规模的放大及优化具有一定的参考意义。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
毕赤氏酵母论文参考文献
[1].王长远,全越,沈冰蕾,姚笛,于长青.深黄被孢霉Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因在毕赤氏酵母SMD1168中表达的研究[J].农产品加工.2016
[2].李辰雨.毕赤氏酵母发酵液中重组人血清白蛋白分离纯化工艺的初步研究[D].烟台大学.2016
[3].钱辉,张充,陆兆新,别小妹,赵海珍.内生多粘芽孢杆菌EJS-3纤溶酶基因在毕赤氏酵母中的表达[J].中国生物工程杂志.2014
[4].谭琳,谭昕,周鹏,姚志彬.4Aβ_(15)基因在毕赤氏酵母中的分泌表达及初步纯化[J].生命科学研究.2010
[5].曾璐,秦丹,林亲录,蔡柳.生防菌季也蒙毕赤氏酵母增殖培养基优化研究[J].湖南农业科学.2010
[6].王长远,张丽萍,刘松财,汤丹.甜味蛋白Brazzein在毕赤氏酵母中表达的初步研究[J].中国食品学报.2009
[7].周小玲,李子龙,孙平楠.HBVPreS1-EGFP融合表达质粒高效转化毕赤氏酵母的研究[J].现代生物医学进展.2009
[8].何尧声,沈文涛,陈春宝,王明钦,周鹏.重组人胰岛素在毕赤氏酵母中的分泌表达[J].药物生物技术.2009
[9].曾琦锴,杜红丽,翟志臣,林小琼,林影.Lysine21突变对树干毕赤氏酵母木糖还原酶辅酶依赖性的影响[J].生物工程学报.2008
[10].王盛,金大勇,蔡宇杰.谷胱甘肽生产菌重组巴斯德毕赤氏酵母的构建[J].食品与机械.2007
论文知识图
