囊丝黄精论文_安洁

导读:本文包含了囊丝黄精论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:黄精,大肠杆菌,红细胞,凝集素,活性,基因,组织。

囊丝黄精论文文献综述

安洁^[1]（2006）在《囊丝黄精（Polygonatum cyrtonema Hua.）凝集素Ⅱ基因在大肠杆菌中克隆表达、重组蛋白纯化及性质研究》一文中研究指出将编码黄精凝集素(Polygonatum cyrtonema Hua．lectin Ⅱ，简称PCLⅡ)成熟肽的DNA片段(P)定向克隆到pET32a(+)表达质粒载体中后，获得重组质粒pET-P。用该重组质粒转化E．coli．BL21(DE3)菌株，所获得的阳性转化子经菌落Western检测表达产物。在用IPTG诱导后，插入片段得到表达，用SDS-PAGE检测发现表达产物的分子量约为29kD。优化诱导表达条件，使所表达的融合蛋白大部分位于E．coli．破菌上清液中。取大肠杆菌破菌上清液，利用所表达的融合蛋白N末端6个组氨酸的标签，用金属亲和层析柱进行纯化。纯化的融合蛋白再经肠激酶酶切作用后，再用金属亲和层析柱、离子交换层析柱等进行纯化。经Western印迹分析，证实得到的纯化重组蛋白(recombinant PCLⅡ，简称rPCLⅡ)可与RGS-His抗体和天然PCLⅡ(natural PCLⅡ，简称nPCLⅡ)抗兔血清发生专一性抗原抗体反应，提示重组蛋白与天然PCLⅡ的特征一致，从而进一步证实所克隆到的基因为编码PCLⅡ的基因。rPCLⅡ能凝集兔血细胞，效价为1.95μg／mL；对外周血淋巴细胞具有很强的促有丝分裂能力；对酸碱、温度比较稳定；在抗病毒活性方面，rPCLⅡ能有效地降低Ⅱ型人类单纯疱疹病毒(HSV-Ⅱ)对Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)的感染，在1058μ g／mL时对正常Vero细胞无细胞毒性，IC_(50)=1.52μg／mL，TC／IC为3565.8，表明rPCLⅡ是一种有效的抗病毒蛋白。rPCLⅡ与nPCLⅡ相比，生物活性略有下降。(本文来源于《四川大学》期刊2006-05-01）

鲍锦库^[2]（2004）在《囊丝黄精（Polygonatum cyrtonema Hua.）离体再生体系的建立和活性成分分析、黄精凝集素Ⅱ基团特异性化学修饰与生物学活性及其基因的克隆与表达研究》一文中研究指出百合科植物囊丝黄精(Polygonatum cyrtonema Hua.)是我国传统中草药，其根状茎中含有一种凝集素，命名为黄精凝集素Ⅱ(Polygonatum cyrtonema Hua.Lectin Ⅱ，简称PCLⅡ)，具有特异性结合甘露糖和唾液酸以及凝集兔红细胞、促T细胞有丝分裂等活性。利用野生囊丝黄精的幼嫩根状茎作外植体，诱导形成愈伤组织，愈伤组织分化出不定芽，进而产生试管苗，试管苗经移栽试验，成活率为75％，其外观性状与野生植株无明显差异。离体再生和野生黄精根状茎总蛋白中黄精凝集素Ⅱ(甘露糖和唾液酸结合凝集素)的兔红细胞凝集活性以及SDS-PAGE分析两种根状茎总蛋白的含量及组成，结果表明：离体再生的黄精凝集素的凝集血细胞活性与野生型相近，且黄精凝集素Ⅱ为总蛋白中的主要成分。离体再生黄精根状茎中黄精凝集素Ⅱ的PCR扩增及序列分析表明：其与野生型凝集素比较在核苷酸序列上有2处突变，蛋白质水平上有两处氨基酸变异，分别是55位P突变为Q和119位Q突变P。采用基团特异性化学修饰剂对黄精凝集素Ⅱ(PCLⅡ)的特定氨基酸残基进行修饰，结合其凝集兔红细胞活性和促淋巴细胞有丝分裂活性的变化，并通过荧光光谱学手段研究黄精凝集素Ⅱ分子构象的变化，以研究不同氨基酸残基修饰以及黄精凝集素Ⅱ分子微环境变化与其兔红细胞凝集活性和促淋巴细胞有丝分裂活性的关系。研究发现精氨酸(Arg)、甲硫氨酸(Met)、丝氨酸／苏氨酸(Ser／Thr)并不是黄精凝集素Ⅱ生物学活性的必需基团。四川大学博士学位论文赖氨酸(Lys)的￡.NHZ修饰导致凝集素的凝血活性和促淋巴细胞有丝分裂活性下降，表明Lys的.NHZ参与活性中心结构域，光谱研究显示PCLll结构仅发生细微变化。组氨酸(His)的咪哇基修饰导致黄精凝集素n仅保留50%的血凝活性，其它活性基本保持不变，光谱监测分析表明PCLll主要集中在侧链基团微环境的变化，主链构象变化极其微小。说明孤s为血凝活性中心重要的决定性残基，在其中扮演着重要的角色。采用不同的方法对酪氨酸(Tyr)进行了修饰:用勺r酚经基专一性试剂对硝基苯磺酞氟(NBSF)修饰PCLn，导致PCLn促淋巴细胞有丝分裂活性大幅下降，表明巧r的酚经基对于此活性是必需的。用N-乙酞咪哇(N户J)修饰酚轻基亦得出相同的结果，但促淋巴细胞分裂活性下降更甚，此应归因于Tyr广泛乙酞化的情况下，Lys的.NHZ的乙酞化对此活性有所影响导致。荧光光谱分析表明，NBsF修饰对PCLll结构影响不大，但NAI的修饰可引起PCLll结构有较大程度的松散。由此可以得出结论，Tyr的酚经基作为必需基团参与了促淋巴细胞有丝分裂活性中的构成。PCLll分子中的血凝活性中心和促淋巴细胞有丝分裂活性中心是相互独立的。用专一性试剂对天冬氨酬谷氨酸进行修饰，导致PCLll血凝活性几乎完全丧失，说明酸性氨基酸的梭基对PCLll的凝集血细胞活性是非常重要的，可能直接参与活性中心的组成或位于附近。同时促淋巴细胞分裂活性亦有一定程度的下降。进一步证实PCLn分子中存在多个相互独立的活性中心结构域，分别行使不同的生物学活性。用叁种淬灭剂CsCI、KI、丙烯酞胺对PCLll进行的淬灭研究表明它们对蛋白质分子的淬灭都是动态淬灭机制。综合叁种淬灭剂对黄精凝集素H的淬灭效果，黄精凝集素H中Tyr和TrP对中性淬灭剂(丙烯酞胺)的可接近程度分别达到88.5%和74.07%，而对阴离子淬灭剂(M)为55.5%和66.6%，对阳离子淬灭剂(Cscl)只有25%。说明黄精凝集素H中部分发射荧光的氨基酸残基在疏水内核中，且所有发荧光氨基酸带负电荷的比例比带正电荷的比例大近一倍。黄精凝集素H中TrP残基大部分是位于黄精凝集素H分子表面，小部分埋藏于分子内部疏水性环境中。采用细胞病变效应法(CPE法)和细胞代谢法(MTT法)，研究黄精凝集素n对人类单纯疤疹病毒(HSV-n)的抑制作用，结果表明黄精凝集素n对HSV-n夕四川大学博士学位论文感染的半数抑制浓度(ICS。)为1 .45ug/ml。说明黄精凝集素n在低浓度下即可有效抵抗HSV-n对正常细胞的感染，并且黄精凝集素n的细胞毒性很低，说明黄精凝集素n是一种低毒高效的体外抗HSV-11的生物活性糖结合蛋白。利用反相被动凝血抑制实验(RP扭)进行黄精凝集素H抗乙型肝炎病毒 (HBV)活性的初筛，发现黄精凝集素H在7.sug/ml时仍具有很强的R卫王a活性，表明黄精凝集素H可以和HBsAg抗原有效结合，具有抗HBV活性。进一步用HepG2.2.1.5细胞作为乙型肝炎病毒模型，研究了黄精凝集素H的抗HBv活性。结果发现:黄精凝集素H对HepG2.2.1.5的细胞毒性很小，在2.smg/ml时对细胞基本无毒。同时黄精凝集素H可以有效抑制HepG2.2.1.5细胞两种抗原HBeAg和HbsAg的分泌，在o.313m留ml和0.156mg/ml时，对HepGZ:2 1.5细胞分泌HbsAg和HBeAg的抑制率达50%以上。研究黄精凝集素n抗艾滋病毒Fa琴1和HI从2对CEM(T细胞淋巴瘤细胞系)和TH.4(小鼠神经细胞系)的感染中的作用发现。当受试细胞系为HT-4时，黄精凝集素n对王a从1和Fa琴2的半数抑制浓度均为EC50==o.08u岁nil;当受试细胞系为CEM，黄精凝集素n对班V(本文来源于《四川大学》期刊2004-06-26）

囊丝黄精论文开题报告

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

百合科植物囊丝黄精(Polygonatum cyrtonema Hua.)是我国传统中草药，其根状茎中含有一种凝集素，命名为黄精凝集素Ⅱ(Polygonatum cyrtonema Hua.Lectin Ⅱ，简称PCLⅡ)，具有特异性结合甘露糖和唾液酸以及凝集兔红细胞、促T细胞有丝分裂等活性。利用野生囊丝黄精的幼嫩根状茎作外植体，诱导形成愈伤组织，愈伤组织分化出不定芽，进而产生试管苗，试管苗经移栽试验，成活率为75％，其外观性状与野生植株无明显差异。离体再生和野生黄精根状茎总蛋白中黄精凝集素Ⅱ(甘露糖和唾液酸结合凝集素)的兔红细胞凝集活性以及SDS-PAGE分析两种根状茎总蛋白的含量及组成，结果表明：离体再生的黄精凝集素的凝集血细胞活性与野生型相近，且黄精凝集素Ⅱ为总蛋白中的主要成分。离体再生黄精根状茎中黄精凝集素Ⅱ的PCR扩增及序列分析表明：其与野生型凝集素比较在核苷酸序列上有2处突变，蛋白质水平上有两处氨基酸变异，分别是55位P突变为Q和119位Q突变P。采用基团特异性化学修饰剂对黄精凝集素Ⅱ(PCLⅡ)的特定氨基酸残基进行修饰，结合其凝集兔红细胞活性和促淋巴细胞有丝分裂活性的变化，并通过荧光光谱学手段研究黄精凝集素Ⅱ分子构象的变化，以研究不同氨基酸残基修饰以及黄精凝集素Ⅱ分子微环境变化与其兔红细胞凝集活性和促淋巴细胞有丝分裂活性的关系。研究发现精氨酸(Arg)、甲硫氨酸(Met)、丝氨酸／苏氨酸(Ser／Thr)并不是黄精凝集素Ⅱ生物学活性的必需基团。四川大学博士学位论文赖氨酸(Lys)的￡.NHZ修饰导致凝集素的凝血活性和促淋巴细胞有丝分裂活性下降，表明Lys的.NHZ参与活性中心结构域，光谱研究显示PCLll结构仅发生细微变化。组氨酸(His)的咪哇基修饰导致黄精凝集素n仅保留50%的血凝活性，其它活性基本保持不变，光谱监测分析表明PCLll主要集中在侧链基团微环境的变化，主链构象变化极其微小。说明孤s为血凝活性中心重要的决定性残基，在其中扮演着重要的角色。采用不同的方法对酪氨酸(Tyr)进行了修饰:用勺r酚经基专一性试剂对硝基苯磺酞氟(NBSF)修饰PCLn，导致PCLn促淋巴细胞有丝分裂活性大幅下降，表明巧r的酚经基对于此活性是必需的。用N-乙酞咪哇(N户J)修饰酚轻基亦得出相同的结果，但促淋巴细胞分裂活性下降更甚，此应归因于Tyr广泛乙酞化的情况下，Lys的.NHZ的乙酞化对此活性有所影响导致。荧光光谱分析表明，NBsF修饰对PCLll结构影响不大，但NAI的修饰可引起PCLll结构有较大程度的松散。由此可以得出结论，Tyr的酚经基作为必需基团参与了促淋巴细胞有丝分裂活性中的构成。PCLll分子中的血凝活性中心和促淋巴细胞有丝分裂活性中心是相互独立的。用专一性试剂对天冬氨酬谷氨酸进行修饰，导致PCLll血凝活性几乎完全丧失，说明酸性氨基酸的梭基对PCLll的凝集血细胞活性是非常重要的，可能直接参与活性中心的组成或位于附近。同时促淋巴细胞分裂活性亦有一定程度的下降。进一步证实PCLn分子中存在多个相互独立的活性中心结构域，分别行使不同的生物学活性。用叁种淬灭剂CsCI、KI、丙烯酞胺对PCLll进行的淬灭研究表明它们对蛋白质分子的淬灭都是动态淬灭机制。综合叁种淬灭剂对黄精凝集素H的淬灭效果，黄精凝集素H中Tyr和TrP对中性淬灭剂(丙烯酞胺)的可接近程度分别达到88.5%和74.07%，而对阴离子淬灭剂(M)为55.5%和66.6%，对阳离子淬灭剂(Cscl)只有25%。说明黄精凝集素H中部分发射荧光的氨基酸残基在疏水内核中，且所有发荧光氨基酸带负电荷的比例比带正电荷的比例大近一倍。黄精凝集素H中TrP残基大部分是位于黄精凝集素H分子表面，小部分埋藏于分子内部疏水性环境中。采用细胞病变效应法(CPE法)和细胞代谢法(MTT法)，研究黄精凝集素n对人类单纯疤疹病毒(HSV-n)的抑制作用，结果表明黄精凝集素n对HSV-n夕四川大学博士学位论文感染的半数抑制浓度(ICS。)为1 .45ug/ml。说明黄精凝集素n在低浓度下即可有效抵抗HSV-n对正常细胞的感染，并且黄精凝集素n的细胞毒性很低，说明黄精凝集素n是一种低毒高效的体外抗HSV-11的生物活性糖结合蛋白。利用反相被动凝血抑制实验(RP扭)进行黄精凝集素H抗乙型肝炎病毒 (HBV)活性的初筛，发现黄精凝集素H在7.sug/ml时仍具有很强的R卫王a活性，表明黄精凝集素H可以和HBsAg抗原有效结合，具有抗HBV活性。进一步用HepG2.2.1.5细胞作为乙型肝炎病毒模型，研究了黄精凝集素H的抗HBv活性。结果发现:黄精凝集素H对HepG2.2.1.5的细胞毒性很小，在2.smg/ml时对细胞基本无毒。同时黄精凝集素H可以有效抑制HepG2.2.1.5细胞两种抗原HBeAg和HbsAg的分泌，在o.313m留ml和0.156mg/ml时，对HepGZ:2 1.5细胞分泌HbsAg和HBeAg的抑制率达50%以上。研究黄精凝集素n抗艾滋病毒Fa琴1和HI从2对CEM(T细胞淋巴瘤细胞系)和TH.4(小鼠神经细胞系)的感染中的作用发现。当受试细胞系为HT-4时，黄精凝集素n对王a从1和Fa琴2的半数抑制浓度均为EC50==o.08u岁nil;当受试细胞系为CEM，黄精凝集素n对班V

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。