张水华[1]2003年在《金属蛋白酶在大鼠视神经挤压伤的表达及意义》文中指出目的：试图理解视神经轴突对于轴突损伤的潜在反应，对于帮助神经再生和修复的治疗是非常有必要的。能够降解细胞外基质的金属蛋白酶参与了与细胞外基质降解、细胞移行、增殖等有关的所有病理及生理过程。在损伤愈合的过程中发挥重要作用。本研究的目的是探讨视神经损伤时，基质金属蛋白酶(MMPs)中MMP-2(明胶酶A)和MMP-9(明胶酶B)是否表达及其可能发挥的作用。 方法：我们首先在大鼠视神经球后2mm处用反向镊子夹持5秒钟，建立了大鼠视神经不完全损伤的挤压伤模型，通过视网膜神经节细胞计数，荧光金顺行标记和组织病理来观察神经损伤一般情况；然后利用明胶酶谱的方法测定损伤后视神经组织内的MMP-2和MMP-9的活性变化；Western biotting进一步确认所消化的条带的属性；用逆转录-聚合链反应法(RT-PCR)测定MMP-2和MMP-9的mRNA的表达；免疫组织化学和原位酶谱的方法观察MMPs在损伤轴突中的表达位置与可能功能。 结果：视神经挤压伤后2周的视网膜神经节细胞剩余57.2％，荧光金顺行标记示踪观察损伤远端轴突数目明显减少，组织病理显示损伤区附近内有胶质细胞增生，不利于再生的间质分子硫酸软骨素蛋白多糖的沉积和新生血管的形成。明胶酶谱结果显示正常视神经组织内仅表达MMP-2，不表达MMP-9。在视神经挤压伤后表达MMP-9，1天时表达水平最高。MMP-2在视神经损伤后表达水平略有增加，1周时最高。Western blotting进一步确认所消化的条带是MMP-2 军医进修学院 博士论文 中文摘要 和 M M P－9。RT－P C R结果表明正常的视神经仅表达 M M P－2的 mRNA，损伤的视神经有MMP．2和MMP－9 的mRNA表达。 原位酶谱和免疫组织化学结果显示MMPs在损伤区域的边缘 高表达，并和区域内的CSPG呈现负相关的趋势。 结论：视神经损伤后不能很好的再生可能与损伤区轴突 的新生血管物理障碍有关，还可能和损伤中心沉积的CSPG 的化学性阻碍有关。MMP－2 和 MMP－9 参与了视神经损伤后 的修复过程，可能在视神经损伤后降解CSPG，促进再生。其 来源可能是视神经内的胶质细胞。
单丽, 张水华, 马志中[2]2008年在《基质金属蛋白酶在大鼠视神经挤压伤后的原位酶谱表达》文中认为目的观察大鼠视神经(optical nerves,ON)挤压伤后基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2和-9在轴突损伤中的表达及与ON损伤处瘢痕成分的关系。方法建立大鼠ON挤压伤模型,利用原位酶谱和免疫组织化学的方法检测ON组织内MMP-2、MMP-9、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和硫酸软骨素蛋白聚糖(chondroitin sulphate peoteoglycan,CSPG)在损伤后时间和空间位置的表达。结果正常大鼠ON中有MMP-2的弱阳性表达,ON挤压伤后MMP-2和MMP-9均为强阳性表达,早期在损伤区边缘表达稍高,至损伤后28d时,在损伤区和周围的表达趋于一致。正常大鼠ON有GFAP和CSPG的弱阳性表达。ON挤压伤后CSPG在损伤区中心呈强阳性表达,GFAP在损伤区边缘表达较高,而在损伤区中心缺乏。结论ON挤压伤后胶质细胞增生瘢痕形成,GFAP、CSPG、MMP-2和MMP-9均参与ON的损伤修复过程。
李瓦里[3]2009年在《明胶酶在大鼠坐骨神经挤压伤后的原位酶谱表达》文中认为目的：临床中的周围神经损伤比较常见。一般分为神经传导障碍、轴索中断及神经中断。临床处理都需要后期的固定。那么为什么固定的时间为3-4周?在这固定期间神经的微观变化都有哪些?神经修复和时间的相关性如何?探讨周围神经挤压损伤后轴突对损伤后的潜在反应，对于帮助神经再生和修复的治疗非常关键。明胶酶参与了细胞外基质的降解、细胞的移行及增殖等有关的神经受损之后修复的所有病理及生理过程，在神经损伤修复后的过程中发挥了重要的作用。本实验以大鼠为研究对象，研究的目的是为了探讨坐骨神经损伤后，神经修复的时间过程中微观的病生理变化，探讨明胶酶A(MMP-2)和明胶酶B(MMP-9)是否有表达以及其可能发挥的作用。方法：我们用实验的方法将大鼠的双侧的坐骨神经进行暴露，一侧钳夹持续一分钟，另一侧作为正常对照组(暴露的时间与对侧相同)，从而建立了大鼠坐骨神经挤压损伤的动物模型。方法一、30只大鼠分为1天、3天、1周、2周和4周共五组。称重后盐酸氯胺酮注射液腹腔注射麻醉，150mg／kg。俯卧位固定四肢于手术台上。双侧腰、臀和股部剃毛，碘伏消毒，铺无菌纱布。两侧臀部各做一斜行切口，并向股后侧延伸。劈开臀肌，分离股二头肌和半膜半腱肌，暴露各组的双侧坐骨神经。在距离梨状肌下缘约8mm处，用反向血管钳钳夹一分钟(左侧为钳夹组，右侧为正常对照组，在手术区域和显露区域丝线标志准确位置)，所有组的正常对照组仅仅暴露，时间与钳夹组相同。0／1丝线缝合臀肌和皮肤。苏醒后送回饲养室给予动物普通饮食，同等条件下饲养。在大鼠坐骨神经挤压损伤后1天、3天、1周、2周和4周时随机取6只大鼠，进行深度麻醉下心脏灌注0．01M的PBS后取材，石蜡包埋切片，光镜下观察损伤后各个时间段内受损神经的病理变化；利用明胶酶谱的测定方法，测定损伤后大鼠坐骨神经组织内的明胶酶A(基质金属蛋白酶2，MMP-2)和明胶酶B(基质金属蛋白酶9，MMP-9)的活性变化；方法二、15只大鼠随机分为1天、7天和4周共叁组。手术方法同一。在大鼠坐骨神经挤压损伤后1天、7天和4周时，深度麻醉下心脏灌注0．01M的PBS后，分离大鼠双侧标志处的坐骨神经，切取神经长度约5-8mm，OCT包埋，立刻放入盛有4℃异戊烷的容器内，浸入液氮2分钟后，放入-25℃冰冻切片机内，切成10微米厚的纵行坐骨神经冰冻切片，粘贴于载玻片上，室温下风干，需做原位酶谱的直接在玻片上滴加反应缓冲液。免疫组织化学染色-20℃冰箱保存待用。用免疫组织化学和原位酶谱的方法观察MMPs在损伤神经轴突中的表达位置及其功能。用于神经胶质酸性蛋白(GFAP)和硫酸软骨素蛋白多糖(CSPG)免疫组织化学的大鼠，在损伤后1周，4周，经4％多聚甲醛心脏灌注后，取大鼠双侧标志处的坐骨神经长约各5-8mm，常规石蜡包埋，纵行切片，了解硫酸软骨素蛋白多糖与瘢痕组织及明胶酶之间可能存在的关系。结果：1．大鼠坐骨神经挤压伤之后有不同种类的明胶酶的表达，即明胶酶A和明胶酶B。在挤压伤后的各个阶段光镜下观察，有不同的细胞参与此过程，这与以往的报道一致。明胶酶谱检测的结果显示正常的大鼠坐骨神经组织内有明胶酶A的表达，没有发现明胶酶B的表达。在坐骨神经挤压伤之后的一天内有明胶酶B的迅速表达，而且表达较高。此时光镜下可见到受损区域内有很少的细胞核及血细胞，周围可看到局部中性粒细胞的出现。在伤后的叁天可看到起到吞噬作用的炎细胞，至一周时可见减少，与明胶酶B呈现正相关。明胶酶A在受损伤后的表达水平有轻微的增加，到一周时候表达的最高。此时光镜下见到炎细胞较前减少，两周时细胞恢复较多，四周时已经接近正常。Western blot分析进一步确认所消化的条带是明胶酶A和明胶酶B。2．原位酶谱和免疫组织化学的结果显示基质金属蛋白酶中的明胶酶在损伤区域的边缘有较高的表达，不仅仅如此而且和受损区域内的硫酸软骨素蛋白多糖(CSPG)呈现负相关的趋势。结论：1．大鼠坐骨神经损伤后的再生与修复不仅仅有巨噬细胞、雪旺氏细胞等细胞因子存在，同时还有基质金属蛋白酶类的明胶酶参与。在神经受损的第一天，神经周围本身的中性粒细胞有一定程度的反应，此时明胶酶B迅速的上调，保持高水平至叁天左右，而此时渗入性的炎细胞大量出现，一周后明胶酶B下降，而明胶酶A表达升高，至四周时明胶酶A、B表达接近正常。提示明胶酶B参与了神经受损后反应的前期阶段，即第一周；而明胶酶A参与了神经修复再生的后期阶段。2．神经的修复过程宏观上看是髓鞘的退变与再生过程，微观上是众多的细胞因子综合调控的结果。同时有大量降解细胞外基质成分的酶类参与。整个的神经修复过程是4周左右的时间，与临床神经处理术后固定时间吻合。3．损伤的坐骨神经中心部分有沉积的硫酸软骨素蛋白多糖的存在，明胶酶可能是降解了此成分，从而促进髓鞘的再生过程。
蔡萧君[4]2017年在《基于疏肝通窍法对实验性青光眼基质金属蛋白酶及水通道蛋白表达的影响》文中进行了进一步梳理目的:研究临床经验方通窍明目4号对高眼压模型大鼠视网膜中基质金属蛋白酶9(MMP-9)及水通道蛋白4(AQP4)表达的影响,以探讨中药方剂对视神经保护的分子学作用机制。方法:选择8-12周龄、体重200±12.09g、雌雄各半SD大鼠323只,采用前房注射复方卡波姆方法建立大鼠慢性高眼压模型。造模成功后按体重随机分为空白组和实验组,空白组为17只大鼠,实验组又分为叁组,分别为实验高眼压1周组(实高1组)、高眼压2周组(实高2组)、高眼压3周组(实高3组),每组大鼠102只。每一实验组再分6组,分别为通窍明目4号低剂量组、中剂量组、高剂量组,对照组(VitB1、VitB12灌胃)、模型1组、模型2组(生理盐水灌胃),每组大鼠17只。模型1组给药前处死并取材,其余持续给药两周后处死并取材。采用免疫组化法及Western blot法观察AQP4和MMP-9的表达。结果:1、免疫组化及免疫印迹检查下对MMP-9表达的提示:叁组高眼压组各组内比较均提示正常状态下,MMP-9呈现低表达状态,当受到高眼压的影响后,MMP-9表达上调,维持一段时间后,又逐渐下降。其中3周高眼压组组间比较不具有统计学意义,说明高眼压叁周后MMP-9的表达已经明显减少。纵向组间比较可知,MMP-9在正常视网膜为低表达状态,在出现眼压升高的情况下,各高眼压组MMP-9表达发生上调,第1周末达到高峰,以后逐渐减少,高表达持续较长时间,直至第4周时才恢复正常水平。通窍明目4号治疗后对MMP-9表达的提示:组内比较显示1周高眼压组中各治疗组均可使MMP-9下降的趋势减慢,且这种作用高剂量组优于中低剂量组和对照组,中低剂量组和对照组未达到治疗效果。2周高眼压组中高中剂量组和对照组MMP-9的表达均高于模型2组,且高中剂量组MMP-9的表达显着上调,高于模型1组和低剂量组。3周高眼压组高剂量组治疗后可使MMP-9的表达上调,其他各治疗组上调的作用不具有统计学意义。纵向组间比较显示,各治疗组均可使MMP-9表达上调,其中高剂量组作用最强。2、免疫组化及免疫印迹检查下对AQP4表达的提示:叁组高眼压组各组内比较均显示AQP4在空白组呈低表达,受到高眼压影响后,AQP4的表达上调即模型1组,但随着高眼压持续时间的延长,AQP4的表达又呈现下降趋势即模型2组;纵向组间比较可知,AQP4在正常情况为低表达状态,在出现眼压升高的情况下,AQP4表达发生上调,第1周末的时候达到高峰,以后逐渐减少,高表达持续较长时间,直至第4周时才恢复正常水平。通窍明目4号治疗后对AQP4表达的提示:叁组高眼压组各组内比较均显示,各治疗组与模型2组比较差异无统计学意义,未起到治疗作用。其中高眼压2组中通窍明目4号高低剂量组和对照组使AQP4的表达发生了上调。高眼压3周中通窍明目4号低剂量组和对照组使AQP4的表达又发生了上调。纵向组间比较显示各药物治疗组未能抑制AQP4的表达。其中2周高眼压组中通窍明目4号高低剂量组和对照组使AQP4的表达上调较1、3周高眼压组为最高。结论:通窍明目4号可以促进MMP-9表达上调,减轻高眼压造成的视网膜病理改变,纠正可逆的变性细胞,减轻高眼压状态下的视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡,促进神经的再生,发挥视神经保护作用。机制可能与破坏MMP-9的天然抑制剂,改变基因转录率,激活MMP-9酶原的活性有关。通窍明目4号对AQP4未起到抑制作用。
马建洲[5]2005年在《大鼠慢性高眼压模型的建立和Nogo、NgR在其视网膜的表达》文中进行了进一步梳理背景:研究认为高眼压是青光眼最危险的因素。青光眼的病理学机制是视网膜神经节细胞(retina ganglion cells RGCs)的程序性死亡(凋亡)和神经纤维的变性,而造成不可逆的损伤。研究发现Nogo蛋白,是阻碍CNS受损后神经元存活和再生的因素之一。它包括NogoA、B、C叁种蛋白,它们主要通过其共有的Nogo66同受体NgR的结合,而抑制轴突的生长,导致其生长锥的崩溃。因此,研究Nogo、NgR在正常和高眼压模型视网膜和视神经的表达,可能为青光眼的神经损伤治疗提出新思路。目的:本实验通过1:观察麻醉状态下正常大鼠的日间眼压分布及波动情况;建立大鼠慢性高眼压模型,通过多次眼压观测,逆行荧光金标记RGCs后视网膜铺片、视网膜尼氏、HE染色、视神经甲苯胺蓝染色,视觉电生理F-VEP检查等手段,研究观察高眼压模型的眼压、病理和视功能改变情况;2:采用免疫荧光组织化学、免疫组织化学SP(Streptavidin peroxydase)法方法观察Nogo蛋白、NgR在正常视网膜视神经的表达;SP法免疫组织化学染色动态观察它们在青光眼动物模型视网膜的表达情况,探讨其表达特征,为以后进一步的研究奠定基础。材料和方法:1.正常大鼠日间眼压的测量:在统一麻醉、测量标准下,使用Tono-penXL眼压计测量。取健康SD大鼠105只,在6:00-18:00之间,麻醉状态下进行日间眼压测量;然后随机取20只健康SD大鼠,于6:00-7:00、11:00-12:00、15:00-16:00、19:00-20:00各测眼压一次,连续测量4天,观察麻醉状态下正常大鼠日间眼压分布及眼压波动情况。2.建立大鼠高眼压模型:SD大鼠45只,麻醉后,使用532二极管激光行右眼角膜缘360°光凝,角膜缘激光斑为80～100个,大鼠角膜缘颞侧、颞上及颞下巩膜浅层静脉3条,每条静脉光凝3～4个斑点功率0.45w/0.7s。左眼为对照眼,3天
参考文献：
[1]. 金属蛋白酶在大鼠视神经挤压伤的表达及意义[D]. 张水华. 中国人民解放军军医进修学院. 2003
[2]. 基质金属蛋白酶在大鼠视神经挤压伤后的原位酶谱表达[J]. 单丽, 张水华, 马志中. 眼科新进展. 2008
[3]. 明胶酶在大鼠坐骨神经挤压伤后的原位酶谱表达[D]. 李瓦里. 天津医科大学. 2009
[4]. 基于疏肝通窍法对实验性青光眼基质金属蛋白酶及水通道蛋白表达的影响[D]. 蔡萧君. 黑龙江中医药大学. 2017
[5]. 大鼠慢性高眼压模型的建立和Nogo、NgR在其视网膜的表达[D]. 马建洲. 第叁军医大学. 2005
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