尼帕病毒融合蛋白的真核表达及其特异性血清的制备

尼帕病毒融合蛋白的真核表达及其特异性血清的制备

论文摘要

目的:用真核细胞表达可溶性尼帕病毒融合蛋白(sF),通过免疫小鼠获得抗F蛋白的特异性血清。方法:设计构建重组质粒pcDNA-sF,在哺乳动物表达系统中进行表达,通过Strep柱亲和层析纯化目的蛋白,Western印迹检测目的蛋白,免疫小鼠后制备抗F蛋白的特异性血清,并通过ELISA鉴定抗血清的结合活性。结果:尼帕病毒F蛋白在哺乳动物细胞中获得可溶性表达,纯化得到的目的蛋白大小正确,胰蛋白酶切鉴定其具有与天然蛋白相似的切割产物;制备的抗血清能特异性结合目的蛋白。结论:获得了可溶性尼帕病毒融合蛋白及高效价抗F蛋白的特异性血清,可用于尼帕病毒疫苗评价、特异性抗体筛选等相关研究。

论文目录

  • 1 材料和方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 表达质粒构建
  •   1.3 融合蛋白F在哺乳动物细胞中的表达
  •   1.4 Strep Trap柱亲和层析纯化蛋白
  •   1.5 Western印迹检测蛋白表达及血清特异性
  •   1.6 F蛋白的体外酶解实验
  •   1.7 HPLC分析条件
  •   1.8 小鼠免疫
  •   1.9 ELISA检测抗血清的特异性结合活性
  • 2 结果
  •   2.1 F蛋白表达质粒的鉴定
  •   2.2 融合蛋白F的表达、纯化及鉴定
  •     2.2.1 纯化产物的SDS-PAGE鉴定
  •     2.2.2 胰蛋白酶切鉴定
  •     2.2.3 HPLC分析
  •   2.3 融合蛋白F的特异性血清验证及其结合活性检测
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 刘渝娇,李耀辉,张冠英,范鹏飞,迟象阳,房婷,刘树玲,陈旖,宋小红,于长明

    关键词: 尼帕病毒,融合蛋白,特异性血清,真核表达

    来源: 生物技术通讯 2019年05期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,农业科技

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 军事科学院军事医学研究院生物工程研究所

    基金: 国家新药创制重大专项(2018ZX09J18101)

    分类号: Q78;S852.659.5

    页码: 614-618+701

    总页数: 6

    文件大小: 3406K

    下载量: 56

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