论文摘要
目的:研究L-古洛糖酸-γ-内酯氧化酶（L-gulono-γ-lactone oxidase,Gulo）在C57BL/6小鼠胚胎肾脏中的表达,以及对后肾间充质（metanephric mesenchyme,MM）细胞增殖、凋亡、间质-上皮转化（mesenchymal-to-epithelial transformation,MET）过程的影响,进而阐明Gulo在肾脏发育过程中的潜在生物学功能。方法:1.分离不同发育时期的C57BL/6小鼠胚胎肾脏,利用RT-qPCR检测Gulo的表达情况;培养不同发育阶段的MM细胞,mK3细胞和mK4细胞,通过RT-qPCR检测Gulo在这两种细胞的表达情况。2.在mK3细胞中过表达Gulo,在mK4细胞中敲低Gulo,免疫印迹试验（Western blot,WB）检测细胞的MET标志物和Sine oculis-related homeobox 2（Six2）的变化;细胞划痕实验检测细胞迁移能力的改变。5-乙炔基-2’-脱氧尿苷（5-Ethynyl-2’-deoxyuridine,Edu）实验检测细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡。3.在过表达Gulo的mK3细胞中再转染Six2过表达质粒,在敲低Gulo的mK4细胞转染Six2敲低质粒,Western blot检测细胞的MET过程相关标志物的变化;细胞划痕实验检测迁移能力的改变。Edu实验检测细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡。结果:1.Gulo在C57BL/6小鼠胚胎肾脏中胚胎期12.5天（embryonic12.5 days,E12.5）表达显著增多,在未分化的MM（mK3）细胞中Gulo表达低于已分化的MM（mK4）细胞。2.过表达Gulo可促进mK3细胞的MET和细胞凋亡过程,抑制细胞增殖。mK4细胞中Gulo的敲低使其上皮特性减弱,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡。3.Six2受Gulo负调控。在过表达Gulo的mK3细胞中过表达Six2,在敲低Gulo的mK4细胞中敲低Six2,可部分挽救由于Gulo增多或缺乏引起的MM细胞的MET、增殖和凋亡改变。结论:综上所述,我们的研究结果表明Gulo在小鼠胚胎肾脏中E12.5表达显著升高,未分化的MM（mK3）细胞Gulo表达显著低于已分化的MM（mK4）细胞。此外,Gulo通过负调控Six2从而促进MM细胞的MET和凋亡,抑制其增殖。
论文目录
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 何庆龄
导师: 周钦
关键词: 古洛糖酸内酯氧化酶,增殖,凋亡,间质上皮转化,肾脏发育
来源: 重庆医科大学
年度: 2019
分类: 基础科学,医药卫生科技
专业: 生物学,基础医学
单位: 重庆医科大学
分类号: R329.2
总页数: 56
文件大小: 1377K
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标签：古洛糖酸内酯氧化酶论文; 增殖论文; 凋亡论文; 间质上皮转化论文; 肾脏发育论文;