VCAM-1抗体包被促进骨髓间充质干细胞迁移的体外实验研究

论文摘要

目的观察包被VCAM-1抗体（Ab-VCAM）能否改变骨髓间充质干细胞（BMSCs）的特性及增加迁移率。方法①利用骨片法贴壁培养小鼠BMSCs;②利用抗体包被技术分两步将Ab-VCAM附着于BMSCs,第一步将PPG包被于BMSCs,即PPG-MSC,第二步将Ab-VCAM包被于PPG-MSC,即V-MSC;③利用免疫荧光技术证实V-MSC的成功构建;④观察未包被BMSCs （即MSC）及V-MSC组BMSCs的形态、生长曲线及多向分化潜能;⑤利用Transwell迁移实验比较体外迁移率。结果①选择浓度为100μg/mL的PPG以及1∶200的VCAM-1抗体浓度进行包被的效果最佳;②MSC组、PPG-MSC组、V-MSC组中绿色荧光数目的数值分别为（2.25±1.71）个/视野、（24.75±7.63）个/视野、（66±5.72）个/视野,差异具有显著统计学意义（P<0.01）;③第四代BMSCs均可见正常细胞形态、生长情况一致、均可被诱导成脂肪细胞及成骨细胞;④两组细胞均具有迁移特性,V-MSC的迁移数量[（34.33±9.48）细胞/视野]多于MSC[（23±7.16）细胞/视野],但差异无统计学意义（P>0.05）。结论利用抗体包被技术成功地构建了Ab-VCAM-1靶向性干细胞,证实了抗体包被不影响BMSCs的生物学特性,并强化了BMSCs的迁移特性,可用于下一步移植治疗相关疾病。

论文目录

1 材料与方法

1.1 实验动物

1.2 主要实验试剂及仪器

1.3 小鼠骨髓MSCs的分离、培养

1.4 构建Ab-VCAM1-MSC （V-MSC）具体步骤同前期实验[1-4]

1.4.1 不同浓度的棕榈酸蛋白G （PPG）包被细胞

1.4.1. 1 酯化反应

1.4.1. 2 PPG包被步骤

1.4.2 VCAM-1抗体包被步骤

1.4.3 MSC、PPG-MSC、V-MSC包被率比较实验

1.5 MSCV-MSC的生物学活性

1.5.1 计数法测定两组BMSCs的生长曲线

1.5.2 成脂诱导分化

1.5.3 成骨诱导分化

1.6 MSC及V-MSC的体外迁移

1.7 统计学方法

2 结果

2.1 不同浓度PPG包被的结果

2.2 不同浓度VCAM-1抗体包被的结果

2.3 MSC、PPG-MSC及V-MSC包被率比较

2.4 两组BMSCs的生物活性比较

2.4.1 形态学观察

2.4.2 生长曲线

2.4.3 成脂诱导结果

2.4.4 成骨诱导结果

2.5 Transwell迁移实验结果

3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈倩倩,杜海涛,陈峥,李毅,万军

关键词: 骨髓间充质干细胞,包被抗体,包被技术,迁移,靶向治疗

来源: 海南医学 2019年10期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 中国人民解放军总医院第二医学中心消化科

基金: 国家自然科学基金(编号:81370503)

分类号: R329.2

页码: 1225-1229

总页数: 5

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VCAM-1抗体包被促进骨髓间充质干细胞迁移的体外实验研究

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