利用荧光免疫层析技术定量检测相思子毒素

利用荧光免疫层析技术定量检测相思子毒素

论文摘要

目的利用荧光免疫层析技术,研发定量检测相思子毒素的试纸条。方法采用亲和层析法纯化相思子种子,用凝胶过滤层析纯化天然相思子毒素,制备鼠抗相思子毒素单克隆抗体和兔抗相思子毒素多克隆抗体,将特异性单抗结合荧光微球,兔多抗包被检测线,羊抗鼠二抗包被质控线,建立相思子毒素双抗体夹心定量检测方法及其试纸条,并对该试纸条进行性能评价。结果经纯化获得分子量31 k Da的相思子毒素A链和33 kDa的B链。研发的荧光免疫层析试纸条配合荧光免疫检测仪在0~50 ng/ml的检测范围内拟合曲线R~2=0.990,线性范围为1~10 ng/ml,最低检出限为1 ng/ml。批间、批內重复性均小于15%,常温稳定性14个月,采用动物血清和食物模拟样本检测特异性良好。结论开发的荧光免疫层析试纸条可以用于食品和环境中相思子毒素的检测。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 相思子毒素的制备
  •     1.2.1 粗提
  •     1.2.2 亲和层析
  •     1.2.3 凝胶过滤
  •   1.3 试纸条的制备
  •     1.3.1 荧光标记物垫制备
  •     1.3.2 包被垫制备
  •     1.3.3 组装
  •     1.3.4 条件优化
  •   1.4 检测
  •   1.5 性能评估
  •     1.5.1 最低检出限和工作曲线拟合
  •     1.5.2 重复性
  •     1.5.3 特异性
  •     1.5.4 稳定性
  •     1.5.5 模拟样本检测
  • 2 结果
  •   2.1 相思子毒素的制备
  •     2.1.1 亲和层析
  •     2.1.2 凝胶过滤
  •   2.2 荧光层析试纸条性能评估
  •     2.2.1 最低检出限和工作曲线拟合
  •     2.2.2 重复性
  •   2.3 特异性
  •   2.4 稳定性
  •   2.5 模拟样本检测
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 聂聪,侯宝翠,王静,杨宇

    关键词: 相思子毒素,荧光微球,免疫层析

    来源: 中国国境卫生检疫杂志 2019年05期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,工程科技Ⅰ辑

    专业: 化学,预防医学与卫生学

    单位: 中国检验检疫科学研究院

    基金: 国家重点研发计划项目(2018YFF0214900),中国检科院基本科研项目(2018JK014)

    分类号: R185;O657.3

    DOI: 10.16408/j.1004-9770.2019.05.003

    页码: 312-316

    总页数: 5

    文件大小: 201K

    下载量: 121

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