赖园珠（福建省泉州市洛江区医院362014）
【中图分类号】R927.1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）21-0151-02
【摘要】目的建立四逆泡腾片中多种乌头碱的HPLC检测方法。方法采用安捷伦C18柱(4.6mm×250mm,5μm)，以乙腈-四丁基氢氧化铵(55:45)为流动相，并将pH值调至9.50-9.80之间，流动相流速为1.0ml.min-1，检测波长230nm。结果四逆泡腾片中多种乌头碱在1.015-78.350μg/ml范围内线性关系良好(r=0.9968)，平均加样回收率为93.6%，RSD为1.77%。结论建立的本方法用于检测四逆泡腾片中的多种乌头碱准确可靠、灵敏度高、重复性好。
【关键词】HPLC四逆泡腾片乌头碱
四逆泡腾片是由经典方剂四逆汤通过剂型改变得到，其具有升压、强心、抗休克等急救作用，因而成为中医院临床急救的必备药品，其改变了四逆汤不能长时间保存的缺点，能方便携带，生物利用度高，在临床应用中具有众多优势，该药物中主要成份为乌头碱类生物碱，其中包括乌头碱、新乌头碱及次乌头碱[1]，本文通过建立乌头碱的HPLC检测方法，达到有效控制药物质量的目的。
1仪器与试药
安捷伦高效液相色谱仪，紫外分光光度检测器，乙腈、四丁基氢氧化铵为色谱级。乌头碱、次乌头碱、新乌头碱均购自中国药品生物制品检定所。
2方法
2.1色谱条件安捷伦液相色谱仪和工作站，安捷伦C18柱(4.6mm×250mm,5μm)，以乙腈-四丁基氢氧化铵(55:45)为流动相，并将pH值调至9.50-9.80之间，流动相流速为1.0ml.min-1，检测波长230nm，进样量20μl。
2.2标准曲线绘制精密称取乌头碱、新乌头碱、次乌头碱适量，用流动相释至一定刻度，分别配置0.01、0.05、0.10，0.50及1.0μg.ml-1的不同浓度的一系列对照品溶液，在上述的色谱条件下进样20μl，以浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，建立标准曲线方程[2]。
2.3精密度实验精密吸取一定量标准品溶液，按照2.1色谱条件检测，记录峰高和保留时间，根据峰面积计算RSD值。
2.4重现性实验取研细至粉末的本品适量，加稀盐酸超声处理，滤过后的残渣用稀盐酸洗涤，合并洗液与滤液，用乙醚振摇提取，再用二氯甲烷提取，合并两种提取液后挥干溶剂，用流动相溶解定容后摇匀即得样品测定液[3]。按2.1色谱条件检测6次，根据峰面积计算RSD值。
2.5回收率实验取一定量供试品溶液，分别加入浓度为0.05、0.10、0.15μg/ml的对照品标准溶液，按2.1色谱条件检测6次，根据峰面积计算回收率。
3结果
3.1线性考察结果从表1中可见，对照品混合物的浓度在1.015-78.350μg.ml-1范围内线性良好，相关系数r≥0.9968。
表1标准曲线方程
检测指标保留时间(min)回归方程相关系数最低检出限(μg/ml)
乌头碱20.876y=4629.75x-3427.220.99610.6255
新乌头碱16.205y=3385.32x-714.040.99630.4789
次乌头碱18.274y=2471.19x-919.610.99810.5889
3.2精密度和重复性结果RSD值根据混合液峰面积计算，计算结果显示RSD在1.06%-6.79%范围内精密度良好，供试液中三种乌头碱的RSD值结果分别为1.77%、2.09%、1.94%，由此说明该检测方法重现性好。
3.3回收率实验结果样品平均回收率为85.9%-101.4%，该检测方法回收率高、准确、可靠。
3.4样品检测结果取三批同期购买的四逆泡腾片，按2.4制成供试品液，按2.1的色谱条件进行检测，检测结果从表2中可见。
表2样品检测结果(μg/片)
批号乌头碱新乌头碱次乌头碱
13.2±1.420.2±1.713.4±2.2
24.1±1.124.3±2.212.9±1.5
33.7±1.223.5±1.314.1±1.6
3结论
四逆泡腾片中所含多种乌头碱结构性质相近，同时流动相中的试剂会使生物碱发生一定的改变，从而增加了含量测定的难度[4]，本文通过改变以往HPLC检测中常用的流动相和样品处理方法，建立了一种准确、可靠、稳定性高的HPLC检测方法，从实验结果看，该方法用于四逆泡腾片中多种乌头碱的检测，灵敏度高、准确可靠、线性范围宽，在实际使用中通用性好。
参考文献
[1]陶淑娟，邵太丽，毕开顺.RP-HPLC测定蒙药那如-3丸中乌头类生物碱含量[J].沈阳药科大学学报，2005,22(3):197-199.
[2]韩刚，张爱国，翟冠玉，等.HPLC测定麝香乌龙丸中乌头碱含量[J].中成药，2010,32(6):1081-1082.
[3]侯亚会，陈永孝.HPLC测定小金胶囊中乌头碱的含量[J].成都中医药大学学报，2009,32(2):91-96.
[4]粟贵，廖林川，颜有仪，等.HPLC同时测定生物样品中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量[J].中国药学杂志，2009,44(12):946-950.