蔡雄伟[1]2004年在《血卟啉单甲醚—光动力疗法诱导HeLa细胞凋亡机制的初探》文中研究说明光动力疗法(photodynamic therapy，PDT)是一种很有潜力的肿瘤治疗方法，许多国家都在开展这方面的研究。为临床上的进一步应用，在本文，我们初步研究了使用我国自主开发的第二代光敏剂——血卟啉单甲醚进行的光动力疗法诱导HeLa细胞凋亡的分子机制。 本文首先介绍了有关光动力疗法的基本知识和治疗肿瘤的机制，概述了细胞凋亡的信号通路情况，并总结了光动力疗法对细胞凋亡的调节。然后介绍本文的研究工作：利用流式细胞仪找出最佳的光敏剂和光照强度组合，使凋亡率发生在比较高的组合区间；再通过MTT(3-(4，4-dimethylthiazol-2-1)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)法和特异的抑制剂，研究钙离子和ERK1／2(extracellular-regulated kinase 1／2)途径在PDT中的作用；进一步通过蛋白印迹技术，探讨PDT对Bcl-2(B-cell lymphoma／leukemia-2)作用。通过研究取得了如下结果： 1．细胞会发生凋亡； 2．在低剂量时，钙浓度的升高能够阻止细胞的凋亡；高剂量时钙浓度的变化对细胞的凋亡没有影响； 3．在低剂量时，PDT激活ERK1／2来阻止凋亡；而高剂量时，通过ERK1／2来促进凋亡的发生； 4．通过蛋白印迹发现HMME-PDT对Bcl-2没有明显的作用。
徐大光[2]2007年在《HMME-PDT作用于人体乳腺癌细胞MCF-7的体外实验研究》文中进行了进一步梳理光动力学疗法(photodynamic therapy，PDT)是一种非常有发展前景的能诱导细胞凋亡和坏死的肿瘤治疗方法。光动力学的作用因素包括对光敏感的物质——光敏剂、光以及氧分子。光敏剂可以被病变靶组织选择性的吸收，在合适波长的光的激发下，通过能量的转换产生活性氧物质，进而造成对靶组织的损伤。血卟啉单甲醚(hematoporphyrin monomethyl ether，HMME)是一种新型的卟啉类光敏剂，并已在基础实验和临床试验中证明了它的高效性。但目前HMME-PDT对乳腺癌细胞作用的研究较少。本课题采用这种新型光敏剂血卟啉单甲醚，用波长为632.8nm的He-Ne激光照射，研究不同光敏剂剂量及不同激光照射剂量的光动力学作用对MCF-7的影响，用酶标仪检测HMME-PDT对MCF-7细胞的生长抑制率，用透射电镜、荧光显微镜、流式细胞仪等技术检测细胞凋亡的情况。方法：1．细胞抑制率检测先将传代培养的MCF-7细胞，以1×10~5/ml的浓度均匀接种于96孔培养板内，每孔100μl，用无血清的培养液培养24小时，使细胞周期同步化。然后加入不同终浓度的光敏剂在37℃避光孵育2小时，再用PBS洗3次，加入完全培养基，即刻进行激光照射。照光后将培养板放置在培养箱继续避光培养24小时，然后每孔加入10μ1 CellCountingKit8(CCK-8)，在37℃避光孵育3小时，用酶标仪检测每孔的吸光度。用处理组的吸光度与对照组吸光度相比较来表示各组的细胞抑制率。实验分为PDT组和对照组。PDT组共设5个光敏剂浓度，5μg/ml(A组)，10μg/ml(B组)、20μg/ml(C组)、40μg/ml(D组)、80μg/ml(E组)，每组用5个激光照射剂量进行照射，1.2J/cm~2(a组)、2.4J/cm~2(b组)、4.8J/cm~2(c组)、9.6J/cm~2(d组)、19.2J/cm~2(e组)。对照组分单纯光敏剂组(5μg/ml，10μg/ml，20μg/ml，40μg/ml，80μg/ml)、单纯激光照射组(1.2J/cm~2，2.4J/cm~2，4.8J/cm~2，9.6J/cm~2，19.2J/cm~2)和空白对照组。每个处理组设4孔。2．形态学观察(透射电镜和荧光显微镜)体外传代培养的MCF-7接种于35mm培养皿，用无血清的培养液培养24小时使细胞周期同步化。PDT组加入10μg/ml的光敏剂HMME，激光照射能量密度为2.4J/cm~2时。空白对照组未加任何处理。光动力学作用后，再培养24小时，分别进行Hoechst 33342染色荧光显微镜观察和固定包埋切片电镜观察。3．流式细胞仪检测细胞凋亡率和坏死率体外培养的MCF-7均匀接种35mm培养皿，用无血清的培养液培养24小时使细胞周期同步化。PDT处理步骤同形态学观察。光动力学作用后，再培养24小时，收集各组细胞，上流式细胞仪检测细胞的凋亡率、坏死率和存活率。实验结论：1．单纯激光组照射组和单纯光敏剂组的吸光度与空白对照组比较，无统计学差异，即单纯激光照射或单纯光敏剂孵育对MCF-7的增殖无明显抑制作用。各PDT组的吸光度与空白对照组比较，有统计学差异，即当激光和光敏剂同时存在时，对MCF-7有生长有抑制作用。2．用不同浓度的血卟啉单甲醚(5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml)，以及不同剂量的632.8nm的激光(1.2J/cm~2、2.4J/cm~2、4.8J/cm~2、9.6 J/cm~2、19.2 J/cm~2)对人类乳腺癌细胞MCF-7进行光动力学处理，均可产生明显的抑制作用，抑制程度在一定范围内与光敏剂浓度和激光照射剂量呈正比关系。3．荧光显微镜和透射电镜观察和流式细胞仪检测结果表明血卟啉单甲醚可以诱导人体乳腺癌细胞MCF-7凋亡。4．对体外培养的MCF-7细胞，光敏剂HMME在浓度40μg/ml时，只需很小的激光剂量就可产生较高的细胞抑制率。当激光照射能量密度达到4.8J/cm~2就可在较低的光敏剂HMME剂量下对细胞产生较高的生长抑制作用。
肖卫东[3]2006年在《光化学基因转染技术及诱导结肠癌细胞分化的实验研究》文中研究说明尽管肿瘤基因治疗研究取得了极大进展,目前仍存在着大量难题亟待解决,特别在基因传送手段与基因治疗靶点的有效性与特异性方面。本研究着眼于探讨这两方面问题,拟分别通过对光化学基因转染技术和诱导分化靶点的研究,对肿瘤基因治疗手段与靶点这两个问题的解决做一些有意义的尝试。多数基因载体是以胞吞形式进入靶细胞的。而大多数基因载体被靶细胞胞吞后只能滞留在内吞泡中,只有少数能从内吞泡中逸出进入胞浆,极大影响了转染效率,难以达到预期目的。光化学基因转染((photochemical gene transfection,PCGT)是一种源于光动力治疗(photodynamic therapy,PDT)原理,基于光化学作用的新型基因转染方法,它充分利用了光敏剂在光照激发下产生的生物效应,来解决常规基因转染的内吞释放问题。本研究动态观察了光化学作用对胞吞大分子的内吞释放效应,同时对不同基因载体进行对比性PCGT研究,观察光照剂量、光敏剂种类、不同细胞系等多个光化学作用的关键因素对PCGT效率的影响,以期掌握PCGT的一些基本技术特性,从而达到优化技术并应用于实验研究的目的。肿瘤细胞分化状态对光敏剂的胞内聚集及对PDT的影响目前不清楚。本研究通过使用丁酸钠(sodium butyrate,NaBt)及全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导结肠癌细胞,对比观察诱导分化对不同光敏剂的胞内摄取及对PDT的影响,观察诱导分化疗法(differentiation therapy,DT)与PDT的联合增效增效机制。与常规抗癌治疗相比,具有纠正基因表达异常、逆转肿瘤增殖特性的诱导分化疗法是肿瘤基因治疗的另一个重要研究方向,寻找诱导分化基因靶点则是治疗的关键。pp32是组蛋白乙酰化抑制复合物(inhibitor of histone acetyl transferase,INHAT)的关键亚单位,目前研究表明它与正常细胞生长分化及肿瘤的发生、分化状态密切相关。pp32可能与INHAT的另一个亚单位SET通过联合表达来提供一种协调和控制机制,来控制细胞增殖和分化。pp32也可通过与RNA结合蛋白HuR作用而来调节整合包括mRNA运输及mRNA稳定性的核信号通路。本课题通过检测临床结直肠肿瘤标本
参考文献：
[1]. 血卟啉单甲醚—光动力疗法诱导HeLa细胞凋亡机制的初探[D]. 蔡雄伟. 华南师范大学. 2004
[2]. HMME-PDT作用于人体乳腺癌细胞MCF-7的体外实验研究[D]. 徐大光. 郑州大学. 2007
[3]. 光化学基因转染技术及诱导结肠癌细胞分化的实验研究[D]. 肖卫东. 第叁军医大学. 2006