转录因子AP2a在RNA聚合酶Ⅲ指导基因转录中的作用

论文摘要

AP2a（AP2α）是哺乳动物细胞内一种重要的转录因子,它能参与生物体细胞内多种生理生化活动。本课题前期的研究表明,FLNA能够抑制RNA聚合酶Ⅲ所指导的基因转录及其转录因子BRF1和TFⅢC2的表达;通过mRNA-seq分析发现,在SaOS2 FLNA敲低细胞中也明显增加AP2a mRNA的表达。通过检测AP2a的mRNA和蛋白水平,我们发现FLNA敲低的两组系（HeLa和SaOS2）确实能增加AP2a的表达。由于FLNA能同时抑制AP2a,BRF1,TFⅢC2及RNA聚合酶Ⅲ（Pol Ⅲ）基因的表达,AP2a是否也介导RNA聚合酶Ⅲ及其转录因子TFⅢC2和BRF1的基因转录并不清楚。因此,本研究以AP2a作为研究对象,探究其在Pol Ⅲ指导的基因转录中的作用及其机制。为了完成以上研究目标,我们建立了293T和Hela细胞AP2a shRNA稳定表达细胞系并利用这些细胞系研究AP2a对Pol Ⅲ及其转录因子BRF1和TFⅢC2表达的影响。结果表明,AP2a敲低能够显著降低Pol Ⅲ、BRF1和TFⅢC2基因表达水平,提示AP2a是Pol Ⅲ指导的基因转录所必需的。为了进一步确定这一发现,我们将293T细胞过表达AP2a;结果表明,AP2a过表达显著增加Pol Ⅲ、BRF1和TFⅢC2基因表达水平。这些结果证明AP2a是维持Pol Ⅲ正常基因转录所必需的。由于FLNA敲低增强Pol Ⅲ基因表达,在FLNA沉默细胞系中再次敲低AP2a是否下调Pol Ⅲ基因表达还不清楚。利用RT-qPCR和Western blot分析FLNA-AP2a双敲低细胞系,数据表明,FLNA-AP2a双敲低下调Pol Ⅲ基因和BRF1、TFⅢC2的表达水平。为了明白转录因子AP2a是如何调节RNA聚合酶Ⅲ及其转录因子BRF1和TFⅢC2的表达,因此我们对RNA聚合酶Ⅲ的转录因子BRF1和TFⅢC2的启动子进行结合位点的分析,发现在其启动子区均存在AP2a的结合位点。因此,我们推测,AP2a可能与Pol Ⅲ相关转录因子BRF1和TFⅢC2的结合调节Pol Ⅲ基因的表达。为了验证这一猜测,我们选择将BRF1和TFⅢC2启动子克隆在报告基因载体上并转染细胞。数据表明,当细胞的AP2a表达降低时,报告基因表达水平也降低;当过表达AP2a时,报告基因表达水平则升高。这些结果提示,AP2a调节Pol Ⅲ基因的表达是通过影响BRF1、TFⅢC2基因转录来实现的。这些发现不仅加深了对细胞中AP2a功能的了解,也为进一步探索AP2a对细胞增殖的调节机制奠定了基础。

论文目录

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 彭飞霞

导师: 邓文生

关键词: 基因转录,聚合酶

来源: 武汉科技大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学,生物学

单位: 武汉科技大学

分类号: Q75

总页数: 64

文件大小: 2704K

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