导读:本文包含了微型双功能抗体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:抗体,基因工程,功能,稳定性,抗原,药物,淋巴瘤。
微型双功能抗体论文文献综述
杨雨琪,金锐,高子璐,岳凯,李崴[1]（2014）在《二硫键稳定的抗CD3/抗CD19微型双功能抗体的表达及活性测定》一文中研究指出构建了抗CD3/抗CD19(Diabody)微型双功能抗体,并且为增强其稳定性进一步改造为二硫键稳定的抗CD3/抗CD19(ds-Diabody)微型双功能抗体,表达并纯化后测定其生物学活性。构建二硫键稳定的抗CD3/抗CD19表达载体p AYZds CD3CD19,转化感受态大肠杆菌16C9进行原核表达,分离纯化后,经12%SDS-PAGE及Westen-blot鉴定。应用间接免疫荧光和竞争性免疫荧光结合流式细胞分析技术(FACS)检测ds-Diabody与CD19+Raji细胞和CD3+Jurkat细胞的结合活性。改造后的ds-Diabody能够在原核表达系统中进行可溶性表达,ds-Diabody在非还原性SDS-PAGE中,在45 k处可见一条带,Westen-blot在同一位置显示有带,在还原性SDSPAGE中45 k处条带消失,在28 k和26 k各有一条带,Western-blot在28 k显示有带,这些均与理论相符,45 k为二硫键稳定的二聚体,在还原剂巯基乙醇作用下二硫键断开,形成28 k和26 k的2条带。FACS检测ds-Diabody可与CD19+Raji细胞和CD3+Jurkat细胞特异结合,并能竞争性抑制单抗HIT3a和HIT19a与上述细胞的结合。说明改造后的二硫键稳定的抗CD3/抗CD19双功能抗体既能在原核系统中进行可溶性表达,同时又保留了与细胞的结合活性。(本文来源于《药物生物技术》期刊2014年05期）
范冬梅,杨铭,赵英新,许元富,熊冬生[2]（2011）在《微型双功能抗体在裸鼠体内介导人T细胞杀伤白血病细胞》一文中研究指出目的:研究抗CD3/抗CD19微型双功能抗体介导人T细胞对白血病细胞的特异性靶向杀伤活性。方法:利用Ficoll-Hypaque法分离外周血淋巴细胞(PBL),流式细胞术从中分选T淋巴细胞,FACS检测T细胞表面标记CD25和CD69激活后的表达变化,实时定量PCR检测各组穿孔素(Perforin)和颗粒酶A(Granzyme A)的释放,建立BALB/c裸鼠Raji细胞移植瘤模型,测定该双功能抗体介导的体内靶向杀伤活性。结果:激活的T细胞,双功能抗体组CD25和CD69的表达以及释放Perforin和Granzyme A的量均明显高于对照组,在对人白血病裸鼠移植瘤模型的生物治疗中,抗CD3/抗CD19微型双功能抗体能有效抑制白血病移植瘤的生长。结论:抗CD3/抗CD19微型双功能抗体在体外及动物肿瘤模型实验中能介导人T细胞有效杀伤白血病细胞,具有潜在的临床应用前景。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2011年04期）
杨铭,程昕,杜志荣,王彦,范冬梅[3]（2010）在《二硫键稳定的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体稳定性研究》一文中研究指出目的:研究二硫键稳定的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体(Diabody)在体外和体内的稳定性。方法:将抗CD3/抗Pgp Diabody置于37℃含0.2%人血清白蛋白(human serumalbumin,HSB)的PBS中,孵育不同时间后,用流式细胞术(FACS)检测其结合活性。建立K562/A02裸鼠移植瘤模型,用Cy5荧光标记试剂盒标记抗CD3/抗Pgp Diabody,通过尾静脉注射给荷瘤裸鼠,在小动物活体成像系统上动态观察荧光信号。结果:二硫键稳定的抗CD3/抗Pgp Diabody(Ds-diabdoy)体外孵育72小时后活性无明显下降,而改造前Diabody孵育1小时后活性即开始下降,24小时后活性完全丧失。Ds-diabdoy注射后72小时仍能在肿瘤部位检测到荧光信号,而改造前Diabody在注射后24小时肿瘤部位荧光信号消失。结论:Ds-diabdoy较改造前Diabody稳定性大大提高。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2010年12期）
李崴[4]（2010）在《抗CD3/抗CD19及其二硫键稳定构型的微型双功能抗体的构建、表达及活性研究》一文中研究指出背景与目的B淋巴细胞白血病和恶性淋巴瘤是原发于骨髓造血系统和淋巴结并弥漫全身的恶性肿瘤。传统的放化疗对于早、中期患者疗效满意,但对于晚期患者则疗效欠佳,尤其是病理分级较低的患者比如慢粒或套细胞淋巴瘤。近年来,基于抗体的生物治疗因为其特异靶向性、高亲和性收到了良好效果。微型双功能抗体是继单克隆抗体之后一种新型抗体药物,它是基因工程抗体的一种形式,仅由抗体的VL和VH片段构成,通常是抗XAVL／抗XBVH片段和抗XBVL／抗XAVH片段之间通过分子间力形成二聚体,它具有两个抗原结合位点,可选择性募集效应细胞到靶细胞周围,介导特异性杀伤作用。CD19分子表达于干细胞外的B淋巴细胞发育的各个阶段,B细胞来源的恶性肿瘤均有表达,CD3分子表达于T细胞和NK细胞,本实验基于此构建抗CD3／抗CD19 (Diabody)微型双功能抗体,并且为增强其稳定性进一步改造为二硫键稳定的抗CD3／抗CD 19 (ds-Diabody)微型双功能抗体,表达并纯化后测定它们体内外生物学活性和介导效应细胞杀伤靶细胞的作用。方法用重迭PCR (Overlap PCR)和PCR方法,构建抗CD3／抗CD19表达载体pAYZCD3CD19,再用PCR法通过引物在抗CD3VL-100位和抗CD3VH-44位引入半胱氨酸突变,构建二硫键稳定的抗CD3／抗CD 19表达载体pAYZdsCD3CD19,转化感受态大肠杆菌16C9进行原核表达。表达产物经6×His-tag亲和层析柱分离纯化,12%SDS-PAGE电泳及westen-blot鉴定。应用间接免疫荧光和竞争性免疫荧光结合流式细胞分析技术(FACS)检测双功能抗体与CD19+Raji细胞和CD3+Jurkat细胞的结合活性,将2种双功能抗体在0.2%的人血清白蛋白中37℃温育不同时间点至72h后,通过间接免疫荧光法FACS检测其结合活性,并比较二者的稳定性。利用非放射性荧光染料Calcein-AM进行抗体介导的体外特异性杀伤活性检测,Ficoll-Hypaque法分离外周血淋巴细胞(PBL),流式细胞术从中分选T淋巴细胞及CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞作为效应细胞,首先以Raji细胞为靶细胞,按不同效靶比,不同抗体浓度设组,以PBS,抗CD3scFv+抗CD3scFv抗体及抗CD3／抗Pgp双功能抗体为对照,另设CD19-k562细胞为非相关靶细胞组,比较双功能抗体介导特异性体外杀伤活性。取上述杀伤实验效靶比25：1,抗体浓度500ng/ml各组,ELISA法比较激活的T细胞分泌IL-2,IL-4的量,FACS检测T细胞表面标记CD25和CD69激活后的表达变化,实时定量PCR检测各组穿孔素(Perforin)和颗粒酶A (GranzymeA)的释放,FACS检测T细胞凋亡的变化。建立Balb/c裸鼠Raji细胞移植瘤模型,以PBL联合Diabody及ds-Diabody间隔7天尾静脉给药一次,共给药3次,Diabody和ds-Diabody设立3个浓度梯度,并以PBS, PBL,抗CD3scFv+抗CD19scFv抗体及抗CD3／抗PgP抗体为对照,建立k562细胞移植瘤模型作为非相关细胞对照组,观察抗体体内毒性反应,根据肿瘤大小计算抑瘤率,评价疗效。取不同终浓度的抗代谢类化疗药阿糖胞苷(Ara-C),作用Nalm6细胞72h,FACS测定CD80和CD86表达。取不同终浓度Ara-C作用Nalm6细胞72h,MTT法检测Ara-C对Nalm6的抑制率。确定使Nalm6细胞CD80和CD86表达升高但又不产生抑制效果的Ara-C终浓度。Calcein-AM法测定双功能抗体联合Ara-C或单独介导T细胞的体外杀伤活性,并测定激活的T细胞分泌IL-2, IL-4的量,表面标记CD25和CD69的表达变化,Perforin和GranzymeA的释放,以及T细胞凋亡的变化,具体方法同前。结果基因重组质粒pAYZCD3CD19和PAYZdsCD3CD19经测序证实序列正确,构建成功。Diabody和ds-Diabody能够在原核表达系统中进行可溶性表达,表达产物经6×His-tag蛋白纯化柱纯化,浓缩后产量均为约5mg/L。12%SDS-PAGE显示Diabody在28kD和26kD各有一条带,western-blot在28kD显示有带,与理论相符。ds-Diabody非还原性SDS-PAGE中,在45kD可见1条带(空间构象使电泳分子量小于实际分子量),western-blot在同一位置显示有带；还原性SDS-PAGE显示45kD消失,在28kD和26kD各有一条带,western-blot在28kD显示有带,这些均与理论相符,45kD为二硫键稳定的二聚体,在还原剂巯基乙醇作用下二硫键断开,形成28kD和26kD的2条带。表达产物经纯化定量均可达5mg/L。FACS检测Diabody和ds-Diabody可与CD19+Raji细胞和CD3+Jurkat细胞特异结合,并能竞争性抑制单抗HIT3a和HIT19a与上述细胞的结合。体外血清稳定性实验ds-Diabody37℃72h后活性基本不变,而Diabody则递减至消失,证明ds-Diabody比Diabody更加稳定。Diabody和ds-Diabody体外介导T细胞杀伤靶细胞Raji的效果比对照组明显(p<0.05),激活T细胞分泌IL-2、IL-4,释放Perforin和GranzymeA的量及CD25和CD69的表达均明显高于对照组,T细胞凋亡率低于对照组(p<0.05), Diabody和ds-Diabody均能有效抑制移植瘤的生长(p<0.05),而ds-Diabody介导的抑制作用较Diabody增强近1倍。终浓度为0.25μmol/l Ara-C使Nalm6细胞CD80(B7.1)表达升高,而CD86(B7.2)表达不变,该浓度不会产生对Nalm6的抑制作用。Diabody和ds-Diabody体外介导T细胞杀伤Nalm6 (Ara-C)的效果比Nalm6明显(p<0.05), Nalm6 (Ara-C)组激活T细胞分泌IL-2, IL-4,释放Perforin和GranzymeA的量及CD25和CD69的表达均明显高于Nalm6组(p<0.05),而T细胞凋亡率低于Nalm6组(p<0.05)结论本实验成功构建了抗CD3／抗CD19和二硫键稳定的抗CD3/抗CD19微型双功能抗体,改造后的二硫键稳定的抗CD3／抗CD19双功能抗体抗原结合活性和体外介导T细胞发挥杀伤效应的能力没有明显改变,而体内稳定性大大增强,介导T细胞杀伤移植瘤的作用增强近1倍；非抑制剂量化疗药阿糖胞苷使Nalm6细胞CD80表达升高,联合双功能抗体使体外介导T细胞杀伤靶细胞Nalm6的效果提高近20%。(本文来源于《中国协和医科大学》期刊2010-05-01）
李崴,范冬梅,程昕,师锐赞,刘荣[5]（2010）在《抗CD3/抗CD19微型双功能抗体的构建、表达及活性测定》一文中研究指出背景与目的:微型双功能抗体是基因工程抗体的一种形式,它具有两个抗原结合位点,可选择性募集效应细胞到靶细胞周围,介导特异性杀伤作用。本实验构建抗CD3/抗CD19微型双功能抗体(diabody)载体,表达纯化后测定其生物学活性。方法:用重迭PCR(overlap PCR)和PCR方法,构建抗CD3/抗CD19 diabody载体,转化感受态大肠埃希菌进行原核表达。表达产物经抗His-tag亲和层析柱分离纯化,12% SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定。应用间接免疫荧光和竞争性免疫荧光结合流式细胞分析技术(FACS)检测生物学活性。结果:基因重组质粒经测序证实序列正确。抗CD3/抗CD19 diabody能够在原核表达系统中进行可溶性表达。12% SDS-PAGE显示28×103和26×103各有一条带,Western blot在28×103显示有条带,与预期相符。表达产物经纯化定量可达5mg/L。FACS检测抗CD3/抗CD19 diabody可与CD19+ Raji细胞和CD3+ Jurkat细胞特异结合,并能竞争性抑制HIT3a和HIT19a与上述细胞的结合活性。结论:本实验成功构建了抗CD3/抗CD19 diabody,并且能够进行可溶性表达,可与CD19+ Raji细胞和CD3+ Jurkat细胞特异结合,为以后的抗体功能实验奠定了基础。(本文来源于《中国癌症杂志》期刊2010年04期）
姜文国,张树平,杨茗,李淑翠[6]（2009）在《抗CD_3-抗CD_(20)微型双功能抗体的优化表达及其生物活性分析》一文中研究指出目的探讨抗CD3-抗CD20微型双功能抗体的优化表达条件及其生物学活性,为细胞免疫治疗提供依据。方法在不同培养基及不同浓度诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)中表达抗CD3-抗CD20微型双功能抗体,用亲和层析法纯化该产物并经SDS-PAGE和Western Blot鉴定,用流式细胞仪(FACS)法测定其双功能活性。结果IPTG浓度为400μM,培养基选用2YT时目的蛋白实现可溶性表达,培养表达量可达3.5 mg/L,其纯度较高,且与Jurkat和Daudi细胞均具有很好的结合活性。结论本研究优化了抗CD3-抗CD20微型双功能抗体表达条件,且表达产物具有双功能活性;此为细胞免疫治疗奠定了基础。(本文来源于《山东医药》期刊2009年35期）
苏晔,刘娟妮,高瀛岱,秦立,杨铭[7]（2009）在《二硫键稳定的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体的构建、表达及活性测定》一文中研究指出向抗CD3/抗Pgp(P-glycoprotein)微型双功能抗体(Diabody)中引入二硫键,使diabody两条链以共价键交联,增强其稳定性。用重迭PCR(Overlap PCR)和PCR方法,将抗CD3/抗Pgp diabody中抗CD3或抗Pgp轻重链可变区的适当部位定点突变成半胱氨酸,进行原核表达。表达产物经阳离子层析柱和抗Etag亲和层析柱分离纯化,还原性和非还原性SDS-PAGE电泳鉴定。应用间接免疫荧光和竞争性免疫荧光结合流式细胞分析技术(FCM)检测生物学活性。将改造前后的两种抗体分别置37oC含0.2%人血清白蛋白(Human serum albumin,HAS)的PBS中孵育,取多个时间点比较两者与两种把抗原的结合能力。基因重组质粒经测序证实序列正确。向抗Pgp轻重链引入突变的diabody(dsPgp-diabody)在原核表达系统中,SDS-PAGE显示纯化后的蛋白二硫键不能配对。而向抗CD3轻重链引入突变的diabody(dsCD3-diabody)能够在原核表达系统中进行可溶性表达,二硫键能够正确配对。并且与改造前的diabody相比,dsCD3-diabody的抗原结合特异性没有改变,抗原结合和竞争活性均无下降。改造前的diabody在37oCPBS(0.2%HAS)中孵育1h后活性即开始下降,24h后活性完全丧失;而dsCD3-diabody孵育72h后活性并无明显下降。本实验成功构建了dsCD3-diabody,并且能够进行可溶性表达。向diabody抗CD3轻重链区引入的二硫键在宿主菌中可以正确配对,抗原结合活性没有明显下降,而稳定性大大增强。向diabody轻重链区引入二硫键,以增强其稳定性的方法是可行的。(本文来源于《生物工程学报》期刊2009年07期）
刘娟妮[8]（2009）在《抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体的改造及活性研究》一文中研究指出肿瘤细胞对不同的化学相关或不相关的抗肿瘤药物产生不敏感性,即多药耐药(Multidrug resistance,MDR)。MDR是造成肿瘤化疗失败的主要原因,产生MDR的原因通常是因为药物失活或被外排泵排出肿瘤细胞。MDR产生的主要分子机制是细胞表面存在一种叫做P-糖蛋白(P-glycoprotein,Pgp)的跨膜糖蛋白,由MDR1基因编码,Mr为170000。Pgp蛋白属于ATP结合盒(ATP-binding cassette,ABC)转运蛋白超家族,是ATP依赖性的药物外排泵,能将各种不同的药物排出细胞,从而产生MDR。已经证实Pgp蛋白与肿瘤复发和预后差高度相关,是评价肿瘤预后的重要指标之一。以Pgp为治疗靶点已经成为克服肿瘤耐药的新策略。Diabody是双特异性抗体(Bispecific antibody)的一种构建形式之一。通常是两个具有不同抗原结合位点的抗体可变区序列,在同一个启动子控制下组成两个顺反子,同一顺反子中VH和VL用一个短Linker连接。表达产物中同一顺反子上的V_H和V_L因Linker太短而存在空间位阻,不能配对,只能与另一顺反子上的V_H和V_L配对,共价结合形成二聚体。Diabody分子量在55-60 kDa,肿瘤穿透性强;缺乏Fc段,副作用小;Diabody能够将体内细胞毒性T细胞靶向到肿瘤细胞表面,直接发挥细胞毒杀伤效应,避免了使用外源性非特异性细胞毒性物质,并且不受MHC限制。抗CD3/抗Pgp Diabdoy具有良好的临床应用前景。但是,由于Diabody自身结构特点,两条肽链是通过非共价键结合在一起,容易解离而失去活性。向Diabody引入二硫键,可以大大增强其稳定性,并且不影响抗体亲和力,甚至亲和力增加。T细胞活化需要协同刺激信号,否则,T细胞不但不能有效活化,还会处于无能状态。B7分子是协同刺激分子最主要的家庭成员,它包括两种分子:CD80和CD86。文献报道,化疗药物阿糖胞苷(ARA-C)能够诱导肿瘤细胞高表达B7分子。因此,我们推测抗CD3/抗Pgp Diabdoy和ARA-C联合应用可以增强细胞毒性T细胞的活性,达到更好的治疗效果。本实验室构建了抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体(Diabody),并进行原核可溶性表达,体外实验证实具有良好的生物学活性,体内实验证实能有效地介导细胞毒性T淋巴细胞杀伤耐药移植瘤细胞。抗CD3/抗Pgp Diabody带有15肽的Etag纯化标记,可能引起免疫原性,影响其临床应用价值。并且抗CD3/抗Pgp Diabody在体内实验中,停药一周后肿瘤复发,不能彻底根除肿瘤。可能与体外活化的T细胞在体内不能维持其持续活化的状态,以及Diabody不稳定有关。本实验主要对抗CD3/抗Pgp Diabody进行了两项改进,分别为:①通过基因工程技术将抗CD3/抗Pgp Diabody的纯化标签Etag去除,降低免疫原性。与ARA-C联合应用治疗耐药裸鼠移植瘤。②向抗CD3/抗Pgp Diabody的抗CD3或抗Pgp可变区引入一对二硫键,增强其稳定性,提高疗效。实验结果显示,去除Etag的抗CD3/抗Pgp Diabody生物学活性没有明显改变,与ARA-C联合应用,疗效大大增强,在观察窗内肿瘤没有复发。向抗CD3/抗Pgp Diabody的抗Pgp可变区引入一对二硫键后,二硫键不能正确配对。而向抗CD3/抗Pgp Diabody的抗CD3可变区引入一对二硫键后(dsCD3-Diabody),二硫键能够正确配对,在原核系统可溶性表达。dsCD3-Diabody抗原结合活性没有明显改变,介导细胞毒性T细胞发挥杀伤效应的能力亦没有明显改变,而体内外稳定性大大增强,介导细胞毒性T细胞杀伤耐药移植瘤的作用增强一倍。近二十年来,已经证实存在肿瘤干细胞,肿瘤干细胞的存在可能是肿瘤复发难治的根源。最近研究显示,急性髓系白血病(AML)细胞上PgP蛋白的表达明显高于其他亚群的细胞,这样白血病干细胞(LSC)就容易逃脱化疗药物的杀伤作用,重新生长并增殖。研究同时发现,LSC上的Pgp蛋白虽然数量增多,但是其功能是降低的,这可能是ABCB1逆转剂临床治疗效果并没有预期那么好的原因之一。我们研制的抗CD3/抗Pgp Diabody是通过识别Pgp蛋白的叁维结构,与之特异性结合,从而介导细胞毒性T细胞发挥细胞杀伤效应。因此,抗CD3/抗Pgp Diabody较ABCB1逆转剂具有更好的临床应用价值。(本文来源于《中国协和医科大学》期刊2009-05-01）
刘娟妮,高瀛岱,王金宏,邵晓枫,范冬梅[9]（2009）在《二硫键稳定的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体制备及体内外活性研究》一文中研究指出目的:我们实验室已经构建并表达了抗CD3/抗Pgp(P-glycoprotein)微型双功能抗体(Diabody),体内外实验均证实对耐药肿瘤的生长具有良好的抑制作用。但是,动物实验发现抗CD3/抗Pgp Diabody治疗后,肿瘤于一周后复发,而且治疗用量相对较高。这可能与Diabody的两条链是非共价结合,容易解离有关。为了增强抗CD3/抗Pgp Diabody的抗瘤活性,我们向抗CD3/抗PgP Diabody引入二硫键,使两条链共价键交联,增强其稳定性。方法:用重迭PCR(Overlap PCR)和PCR方法,将抗CD3/抗PgP Diabody表达载体中抗CD3 VL(100)和VH(44)两个位点定点突变成半胱氨酸,转化大肠杆菌,进行原核表达。表达产物经抗Etag亲和层析柱分离纯化,通过还原性和非还原性SDS-PAGE电泳鉴定。应用流式细胞分析技术(FCM)检测与靶抗原的直接结合及竞争结合活性。将改造前后的两种抗体分别置37℃含0.2%人血清白蛋白(Human Serum Albumin,HSA)的PBS中孵育,取多个时间点比较两者与两种靶抗原的结合能力,检测其体外稳定性。用Promeg公司非放射性细胞毒实验试剂盒,比较改造前后的两种抗体对耐药细胞株K562/A02的杀伤作用。为了比较两种抗体在体内的抗瘤活性,我们用K562/A02细胞株建立了Pgp高表达的裸鼠耐药实体瘤模型,分别用两种Diabody(各设叁个浓度梯度)联合人外周血T细胞(PBL)进行治疗,观察肿瘤大小。将两种Diabody用GE公司Cy5荧光标记试剂盒标记后,通过尾静脉注射给前述荷瘤裸鼠,在柯达小动物成像仪下观察抗体到达肿瘤部位及在肿瘤部位的停留时间。结果:表达载体经测序证实序列正确。改造后的Diabody能够在原核表达系统中进行可溶性表达,SDS-PAGE显示纯化后的蛋白二硫键正确配对。与改造前的Diabody相比,二硫键稳定的Diabody(ds-Diabody)抗原结合特异性没有改变,抗原结合和竞争活性均无下降,两者对耐药肿瘤细胞的杀伤活性无明显差异。改造前的Diabody在37℃PBS(0.2%HBS)中孵育1小时后活性即开始下降,24小时后活性完全丧失;而ds-Diabody孵育72小时后活性并无明显下降。两种Diabody对裸鼠耐药肿瘤的疗效呈剂量依赖性,相同剂量下ds-Diabody较改造前的Diabody疗效更好,当ds-Diabody剂量是Diabody剂量的一半时,两者疗效相当。Cy5标记的两种Diabody在注射后2小时即能靶向到肿瘤部位,但改造前Diabody较ds-Diabody荧光弱,而且ds-Diabody在注射后72小时肿瘤部位荧光仍较强,但改造前Diabody在注射后24小时肿瘤部位荧光不能被检测到。结论:我们成功构建了ds-Diabody原核表达载体,并且能够进行可溶性表达。与改造前的Diabody相比,Ds-Diabody在结合和杀伤活性没有明显下降的情况下,稳定性有显着提高;Ds-Diabody靶向性更好,在肿瘤部位的停留时间明显延长,并且在体内对耐药肿瘤的抑瘤活性增强,用量可以减半。因此,ds-Diabody较Diabody具有更好的治疗耐药肿瘤的临床应用前景。(本文来源于《2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集》期刊2009-04-09）
刘娟妮,高瀛岱,王金宏,邵晓枫,范冬梅[10]（2007）在《去除Etag标记的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体原核表达载体的构建及表达》一文中研究指出目的:构建和表达不带Etag标记的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体(Diabody[CD3×Pgp]),并测定其生物学活性。方法:利用PCR方法构建不带Etag的Diabody[CD3×Pgp]原核表达载体,进行原核表达,制备抗抗CD3scFv亲和层析柱进行纯化,SDS-PAGE鉴定。通过间接免疫荧光法和竞争性免疫荧光结合流式细胞术(FCM)检测生物学活性。结果:无Etag的Diabody[CD3×Pgp]表达载体经测序证实其序列正确。SDS-PAGE电泳显示2条带,相对分子质量(Mr)分别为25000和26000,与预期Mr相符。去除Etag的Dia-body[CD3×Pgp]与K562/A02和Jurkat细胞结合阳性率分别为89.87%和83.95%。竞争结合实验中,与K562/A02和Jurkat细胞竞争后结合率分别为50.25%和43.78%。结论:成功构建了不带Etag的Diabody[CD3×Pgp]表达载体、进行原核表达及纯化。不带Etag的Diabody[CD3×Pgp]能特异性结合CD3和Pgp靶抗原,Etag标记去除后其生物学活性没有降低。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2007年10期）
微型双功能抗体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:研究抗CD3/抗CD19微型双功能抗体介导人T细胞对白血病细胞的特异性靶向杀伤活性。方法:利用Ficoll-Hypaque法分离外周血淋巴细胞(PBL),流式细胞术从中分选T淋巴细胞,FACS检测T细胞表面标记CD25和CD69激活后的表达变化,实时定量PCR检测各组穿孔素(Perforin)和颗粒酶A(Granzyme A)的释放,建立BALB/c裸鼠Raji细胞移植瘤模型,测定该双功能抗体介导的体内靶向杀伤活性。结果:激活的T细胞,双功能抗体组CD25和CD69的表达以及释放Perforin和Granzyme A的量均明显高于对照组,在对人白血病裸鼠移植瘤模型的生物治疗中,抗CD3/抗CD19微型双功能抗体能有效抑制白血病移植瘤的生长。结论:抗CD3/抗CD19微型双功能抗体在体外及动物肿瘤模型实验中能介导人T细胞有效杀伤白血病细胞,具有潜在的临床应用前景。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
微型双功能抗体论文参考文献
[1].杨雨琪,金锐,高子璐,岳凯,李崴.二硫键稳定的抗CD3/抗CD19微型双功能抗体的表达及活性测定[J].药物生物技术.2014
[2].范冬梅,杨铭,赵英新,许元富,熊冬生.微型双功能抗体在裸鼠体内介导人T细胞杀伤白血病细胞[J].中国免疫学杂志.2011
[3].杨铭,程昕,杜志荣,王彦,范冬梅.二硫键稳定的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体稳定性研究[J].中国免疫学杂志.2010
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