免疫共沉淀与质谱联用检测拟南芥SIK1/Hippo互作蛋白

免疫共沉淀与质谱联用检测拟南芥SIK1/Hippo互作蛋白

论文摘要

Hippo通路是迄今为止发现的最重要的负调控动物器官大小的信号通路之一,其核心由两对级联的激酶-脚手架蛋白复合物构成.本实验室在前期工作中首次发现了拟南芥Hippo(Hpo)的同功能基因SIK1,并建立了与Hpo-Mats对应的SIK1-MOB1模块,发现其通过促进退出细胞分裂与细胞延展,参与植物侧生器官大小的调控.为进一步探究SIK1调控器官大小的分子机制,构建了SIK1-GFP转基因株系,用GFP-Trap免疫共沉淀方法捕获与SIK1内源互作的蛋白,并进行质谱分析,获得了SIK1的候选互作蛋白.研究结果将为后续建立完整的植物Hippo信号通路打下基础.

论文目录

  • 0 引言
  • 1 材料与方法
  •   1.1 实验材料
  •   1.2 实验方法
  •     1.2.1 SIK1-GFP转基因拟南芥的获得:
  •     1.2.2 ProUBQ10∶GFP和SIK1-GFP材料的准备:
  •     1.2.3 ProUBQ10∶GFP和SIK1-GFP蛋白表达检测:
  •     1.2.4 GFP-Trap得到与GFP以及GFP-SIK1共沉淀的蛋白:
  •     1.2.5 质谱和数据分析:
  • 2 结果与分析
  •   2.1 SIK1-GFP转基因拟南芥的鉴定和表型
  •   2.2 ProUBQ10:GFP和SIK1-GFP的蛋白表达和IP的效率
  •   2.3 质谱和分析
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 张平平,龚清秋

    关键词: 通路,免疫共沉淀,质谱

    来源: 南开大学学报(自然科学版) 2019年04期

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学

    单位: 南开大学生命科学学院

    基金: 国家自然科学基金面上项目(31671419)

    分类号: Q943.2

    页码: 93-98+112

    总页数: 7

    文件大小: 982K

    下载量: 682

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